将顶板和底板组装成微流控芯片。装入铝箔袋中，密封4°保存。
[0085](三)样本检测
[0086]用正常人血楽作稀释液，将0(-冊标准品稀释成如下浓度:(^8/1111、50(^8/1111、11^/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、lOOng/ml和200ng/ml。
[0087]将50μ1样本滴入加样口后，盖上盖子。将微流控芯片放入配套仪器(磁铁磁感应强度为2000高斯)中，仪器挤出吖啶酯标记单抗，并使样本和吖啶酯标记单抗混合均匀后注入底板过滤区。样本过滤后，到达微通道，并溶解磁颗粒标记单抗，磁铁加速样本反应，形成吖啶酯标记抗体-CK-MB抗原-磁颗粒标记抗体的三明治夹心结构，然后磁铁收集磁颗粒。水泡释放清洗液，将磁颗粒清洗后，发光激发液释放，仪器检测系统检测发光信号强度。总检测时间15min。每个样本分别用3个微流控芯片测定3次，取平均值，绘制标准曲线。
[0088]将50μ1血楽样本滴入加样口，15分钟内仪器检测系统检测发光信号强度，依据标准曲线获得样本中CK-MB浓度。
[0089]检测原理为:当血浆加入微流控芯片后，血浆先与吖啶酯标记抗体混合，然后经过滤区后，混合了吖啶酯标记抗体的血浆到达微通道，血浆溶解磁标记抗体。当血样中含有CK-MB，则形成吖啶酯标记抗体-CK-MB-磁颗粒标记抗体的三明治结构(双抗体夹心法)。经清洗后，发光激发液释放，经混合后与吖啶酯作用产生直接化学发光，仪器检测系统测试发光信号。依据配套仪器获取的标准曲线，进而分析血浆中CK-MB浓度。血浆中CK-MB含量越高，则发光信号越强。
[0090]结果表明，其最低检测限为200pg/ml，最低定量限为700pg/ml，定量检测范围为
0.2?150ng/ml，线性相关系数R2 >0.99 ；在检测范围内，未出现HOOK效应;且批内与批间重复性均小于10%。可为心梗心衰疾病诊断提供参考。
[0091 ]实施例3:磁微粒颗粒尺寸筛选
[0092]其他的实验条件参见实施例2，磁颗粒尺寸和磁铁磁感应强度按照以下方案进行。
[0093]颗粒尺寸为0.1μπι、0.5μηι、0.7μηι、1μηι、2.4μηι、3μηι、ΙΟμπι。磁铁磁感应强度为500高斯、1000尚斯、4000尚斯、8000尚斯、12000尚斯、30000尚斯。分别以这八种磁铁分别驱动七种尺寸的磁颗粒。
[0094]实验结果显示:0.Ιμ??磁颗粒和500高斯磁铁组合使用时，其最低检测限为lng/ml，定量检测范围为I?150ng/ml，线性相关系数R2>0.90;批内与批间重复性均小于20%。即:化学发光信号较弱，灵敏度不高，重复性较差。
[0095]ΙΟμπι磁颗粒和30000高斯磁铁组合使用时，其最低检测限为2ng/ml，定量检测范围为2?100pg/ml，线性相关系数R2>0.90;批内与批间重复性均小于20%。即:阴性样本信号较高(清洗不充分)，线性范围不宽。
[0096]I?3μπι的磁颗粒为和1000?8000高斯的磁铁组合使用时，其最低检测限均小于500pg/ml，定量检测范围可达到0.5?200ng/ml，线性相关系数R2>0.95 ；批内与批间重复性均小于12%。满足为临床心梗心衰疾病诊断提供参考的需要。
[0097]根据以上结果，磁颗粒尺寸优选I?3μηι，磁铁磁感应强度优选1000?8000高斯。可根据磁颗粒所用尺寸，进一步确定磁铁磁感应强度。
[0098]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种检测全血中肌酸激酶同工酶的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括顶板(I)结构和底板(2)结构，其中顶板(I)上的气栗(3)、加样口(4)、样本填充区(12)、标记抗体存储池(5)和样本混合区(13)依次连接;底板上的过滤区(6)、磁颗粒包被区(7)、清洗区(14)、检测区(8)、液体释放通道(16)依次连接;底板的检测区(8)分别与清洗液存储池(9)和发光基底液存储池(1)通过液体释放通道(16)连接； 所述标记抗体存储池(5)存储预封装酶或发光剂标记抗CK-MB抗体，磁颗粒包被区(7)包被预封装磁颗粒标记抗CK-MB抗体，清洗液存储池(9)和发光基底液存储池(10)存储预封装清洗液和发光基底液;所述微流控芯片测试流程中，用磁铁操控磁颗粒移动或聚集;所述标记抗体存储池、清洗液存储池和发光基底液存储池为液体密封池，可通过外力挤压而局部破裂，释放液体;所述过滤区包含滤血膜，所述顶板(I)与底板(2)用胶带(19和20)密封。2.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于发光基底液保质期少于I年时应分开，用发光基底液存储池A(23)和发光基底液存储池B(24)替代发光基底液存储池(10)，所述发光基底液存储池A( 23)和发光基底液存储池B (24)通过预混合通道(25)连接。3.如权利要求1或2所述的微流控芯片，其特征在于，所述磁颗粒标记抗CK-MB抗体使用的磁颗粒为超顺磁性颗粒，由铁、钴或镍的化合物构成.磁颗粒尺寸为0.1??ομπι，与磁珠匹配的磁铁磁感应强度为500?30000高斯。4.如权利要求3所述的微流控芯片，其特征在于，所述磁颗粒标记抗CK-MB抗体使用的磁颗粒包含三氧化二铁和四氧化三铁化合物，磁颗粒尺寸为I?3μπι，与磁珠匹配的磁铁磁感应强度为1000?8000高斯。5.如权利要求1或2所述的微流控芯片，其特征在于，所述酶或发光剂标记抗体溶液、磁颗粒标记抗体溶液和清洗液均包含缓冲液、蛋白质、表面活性剂和防腐剂，且磁颗粒标记抗体溶液还包含糖类。6.如权利要求5所述的微流控芯片，其特征在于，所述酶或发光剂标记抗体溶液包含牛血清白蛋白、吐温-20和Proclin300的pH7.4Tris-HCl缓冲液;所述磁颗粒标记抗体溶液包含牛血清白蛋白、葡萄糖、吐温-20和Proclin300的pH7.4Tris-HCl缓冲液;所述清洗液包含牛血清白蛋白、曲拉通X-100和Proclin300的pH7.4Tris-HCl缓冲液。7.如权利要求5所述的微流控芯片，其特征在于，所述酶或发光剂标记抗体溶液包含牛血清白蛋白、吐温-20和Procl in300的pH7.4磷酸盐缓冲液;所述磁颗粒标记抗体溶液包含牛血清白蛋白、酪蛋白、蔗糖、吐温-20、曲拉通X-100和Procl in300的pH7.4磷酸盐缓冲液；所述清洗液包含牛血清白蛋白、吐温20、曲拉通X-100和Proclin300的pH7.4磷酸盐缓冲液。8.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的配套仪器为小型便携设备，包含挤压气栗和存储池，磁铁移动，发光检测系统等功能。9.一种检测全血中肌酸激酶同工酶的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的测试流程包括: 步骤I)将全血样本滴入加样口后，盖上盖子，微流控芯片放入配套仪器中，酶标抗体释放后，气栗使样本和酶标抗体混合均匀，然后注入底板过滤区； 步骤2)样本经过滤区后，到达包被区，溶解磁标抗体，充分反应后磁铁收集磁颗粒，清洗液存储池释放清洗液，将磁颗粒清洗后，移至检测区，释放发光基底液，仪器检测系统检测发光信号强度，进而实现全血样本中CK-MB的定量检测。
【专利摘要】本发明公开了一种检测全血中肌酸激酶同工酶的磁微粒化学发光微流控芯片，所述微流控芯片包括顶板(1)结构和底板(2)结构，其中顶板(1)上的气泵(3)、加样口(4)、样本填充区(12)、标记抗体存储池(5)和样本混合区(13)依次连接；底板上的过滤区(6)、磁颗粒包被区(7)、清洗区(14)、检测区(8)、液体释放通道(16)依次连接；底板的检测区(8)分别与清洗液存储池(9)和发光基底液存储池(10)通过液体释放通道(16)连接。
【IPC分类】B01L3/00, G01N33/573
【公开号】CN105435867
【申请号】CN201510696685
【发明人】王东, 李泉
【申请人】深圳华迈兴微医疗科技有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年10月26日