专利名称：羟基，巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法
技术领域：
本发明属分析化学领域，涉及化合物的柱前衍生化方法，具体涉及羟基化合物和巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法。
背景技术：
柱前衍生化是提高羟基化合物及巯基化合物的检测灵敏度常用的方法，但目前已报道的羟基化合物及巯基化合物的衍生化方法均存在反应时间长、反应所需温度高、副反应产物多、过量衍生化试剂干扰待侧物的测定等缺陷。磺酰异氰酸酯类化合物，其结构通式可表示为RSO2NCO，其中R可以为烷基、芳基等各种基团，以往主要用于有机合成，未见其用于柱前衍生化的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种化合物的柱前衍生化方法，具体是提供一种反应条件温和、快速高效的羟基化合物及巯基化合物的柱前衍生化方法。本发明方法以磺酰异氰酸酯类为衍生化试剂进行柱前衍生化，与高效液相色谱、高效液相色谱—质谱、毛细管电泳或者毛细管电泳—质谱法联和使用，可以实现对羟基化合物及巯基化合物的高灵敏度测定。
本发明方法通过下述技术方案和步骤实现取含有待测羟基化合物或巯基化合物样品，经过样品预处理后，加入不含活泼氢的反应溶剂，以及磺酰异氰酸酯类衍生化试剂，混匀，室温下放置2-5分钟，加水终止反应，用高效液相色谱、高效液相色谱—质谱、毛细管电泳或者毛细管电泳—质谱法测定羟基化合物或巯基化合物的浓度。
本发明方法所述的衍生化试剂是磺酰异氰酸酯类化合物，其结构通式可表示为RSO2NCO，其中R可以为烷基、芳基等各种基团。本发明使用磺酰异氰酸酯类化合物作为衍生化试剂，衍生化反应在室温下即可以发生；将衍生化试剂与待测溶液混匀2-5分钟后，衍生化反应即已经完成。
本发明方法所述的不含活泼氢的溶剂是乙腈、四氢呋喃、乙醚、苯和四氯化碳等溶剂。
本发明中衍生化反应完毕后加水终止反应。通过水解反应可以将过量的衍生化试剂—磺酰异情酸酯转变为磺胺，由于磺胺类化合物的反相色谱保留时间较短，因而不会干扰羟基化合物及巯基化合物的测定。
本发明方法克服了已有的羟基化合物及巯基化合物的衍生化方法均存在的缺陷，较已知化合物的衍生化方法灵敏度高50倍。具有反应时间短、室温下即可以发生衍生化反应、副反应产物少和过量衍生化试剂不会干扰待侧物的测定等优点。
图1是C3～C10脂肪醇衍生化后高效液相色谱(HPLC)图，其中A是空白对照，B是C3～C10脂肪醇反应色谱图，图2是空白血浆液相质谱(LC-MS)图，图3是血浆样品液相质谱(LC-MS)图，其中I是代谢物Org4094，II是代谢物Org 30126，III是内标(倍他米松)。
具体实施例方式
20 0 10025 0 100流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长227nm实验步骤分取1×10-4mol/L C3～C10脂肪醇混合溶液100μl，加入20％(V/V)的TSIC乙腈溶液10μl，漩涡使其充分混匀，置室温下2min后加水10μl除去未反应的衍生化试剂，取此溶液按上述条件作高效液相色谱分析，同做随行空白。实施实例2仪器与条件美国Agilent 1100型HPLC-MSD高效液相色谱-质谱系统，系统包括在线脱气、二元高压梯度系统、柱温控制箱、自动进样器、二极管阵列检测器、电喷雾接口(离子源)、四极质量分析系统以及ChemStation for LC-MS 3D工作站。
色谱条件色谱柱200×4.6mm ID，5μm DiamonsilTMC18(DIKMA)；流动相A0.2％醋酸铵溶液(g/ml)；流动相B甲醇；梯度洗脱程序T(min) A(％) B(％)0 22 7810 0 100流速0.8ml/min；柱温25℃质谱条件ESI负离子方式电离；碎裂电压130V；喷雾压力40psi；氮气流速10L/min；干燥气流温度350℃；毛细管电压4000V；选择离子检测，检测质荷比为M1＝511.0(Org4094及Org 30126)，M2＝588.0(内标)。
实验步骤取血浆样品1.0ml，置10ml具塞试管内，加入内标倍他米松3.5ng，加入pH＝11的硼砂缓冲溶液0.5ml，摇匀，加入乙酸乙酯6ml，漩涡混旋2min，静置，离心5min(3000rpm)，取有机相于离心试管中，50℃水浴氮气流吹干。
取吹干之残渣，于进样前用100μl乙腈溶解，加入20％的TSIC乙腈溶液10μl，充分混匀，室温下放置2min，加水20μl，混匀，进样50μl作HPLC-ESI-MS分析，以内标法测定血浆样品种替勃龙两种活性羟基代谢物Org4094及Org 30126的浓度。
权利要求
1，羟基，巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是以磺酰异氰酸酯类为衍生化试剂进行柱前衍生化，与高效液相色谱、高效液相色谱—质谱、毛细管电泳或者毛细管电泳—质谱法联和使用，对羟基化合物或巯基化合物测定。
2，根据权利要求1所述的羟基，巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是所述的衍生化试剂磺酰异氰酸酯类化合物，其结构通式可表示为RSO2NCO，其中R可以为烷基、芳基基团。
3，根据权利要求1所述的羟基，巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是按下述步骤进行，1)待测样品羟基或巯基化合物预处理，2)加入不含活泼氢的反应溶剂和磺酰异氰酸酯类衍生化试剂，混匀，3)室温放置2-5分钟，加水终止反应，4)用高效液相色谱、高效液相色谱—质谱、毛细管电泳或毛细管电泳—质谱法测定羟基或巯基化合物的浓度。
4，根据权利要求3所述的羟基，巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是所述的不含活泼氢的反应溶剂是乙腈、四氢呋喃、乙醚、苯和四氯化碳溶剂。
5，根据权利要求3所述的羟基，巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是所述的衍生化反应为室温放置2-5分钟，反应完毕加水终止反应。
全文摘要
本发明属分析化学领域，涉及化合物的柱前衍生化方法，具体涉及羟基化合物和巯基化合物的磺酰异氰酸酯柱前衍生化方法。本发明在不含活泼氢的溶剂中，以磺酰异氰酸酯类化合物为衍生化试剂，对羟基化合物或巯基化合物进行柱前衍生化之后，加水终止反应。本发明提供的衍生化方法具有反应条件温和、反应速度快、副反应少、过量衍生化试剂不干扰羟基化合物或巯基化合物的测定等优点，本发明衍生化方法与高效液相色谱、高效液相色谱—质谱、毛细管电泳或者毛细管电泳—质谱等方法联合使用可以实现对羟基化合物或巯基化合物的高灵敏度测定。
文档编号G01N30/88GK1480726SQ0314171
公开日2004年3月10日 申请日期2003年7月18日 优先权日2003年7月18日
发明者段更利, 左明 申请人:复旦大学