专利名称：一种盐酸美金刚中有关物质的hplc－elsd测定方法
技术领域：
本发明涉及一种盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，属于药物制剂分析检测领域。
背景技术：
盐酸美金刚为N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂，通过延缓兴奋性神经递质谷氨酸盐的释放，主要用于治疗阿尔茨海默症(老年痴呆症)。阿尔茨海默症是老年人的常见病之一，主要表现为记忆力减弱及识别能力障碍等，是一种渐进性的神经功能退化性失调。该产品是目前唯一一个开发用于阿尔茨海默病的NMDA拮抗剂。由于盐酸美金刚在合成过程中有可能引入残留原料及其它有关物质，在储藏过程中还有可能产生降解产物，而该原料药结构比较稳定，没有发色基团，在紫外可见光区难以进行有效的检测。将盐酸美金刚供试品溶解并配制成每1ml含5.0mg的溶液，并选择205nm检测波长，其检测灵敏度仍然较低。因此，为更好的控制产品质量，我们选用了高效液相色谱-蒸发光散射检测器来进行本品有关物质的检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用HPLC-ELSD对盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂进行有关物质检查的测定方法。
本发明有关物质检查方法的实现包括以下步骤(1)色谱条件检测器采用蒸发光散射检测器(ELSD)，漂移管温度范围为70-130℃，最佳检测温度为100℃；氮气流速为2.0-2.5L/min，色谱条件的流动相由甲醇-乙腈-异丙醇-水组成，其最佳配比为(50∶20∶20∶10)，并在流动相中滴加三乙胺溶液，调整pH范围5.0～9.0，其最佳pH值为7.8左右；色谱柱温度为室温，流速为1.0ml/min。理论塔板数按盐酸美金刚峰计算不低于1500。
(2)供试品溶液的制备取盐酸美金刚或含盐酸美金刚的相关制剂适量，加流动相配制成0.3mg/ml的溶液，作为供试品溶液。
(3)对照溶液的制备量取上述(2)供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含6μg的溶液，作为对照溶液。
(4)测定方法取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20％，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸美金刚主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积(见附
图1、附图2)。
本发明盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，上述(2)中供试品溶液的制备为满足供试品溶液检测浓度的需要，取盐酸美金刚适量，用流动相配制成浓度为每1ml含0.3mg的溶液，作为供试品溶液。再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样20μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.3ng(S/N≥3)，若以有关物质检查时的浓度0.3mg/ml计算，其检出限度为0.1％。
本发明盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，上述(3)中对照溶液的制备精密量取上述供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。当该对照溶液浓度范围在1～5μg/ml内时，峰面积与浓度呈良好的线性关系，其线性相关系数为0.9998(见附图3)。
本发明盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，其有关物质检测高效液相色谱图中，如有杂质峰出现，量取各杂质峰面积的和，应不得大于对照溶液的主峰面积(2％)。
本发明盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，适用于各种需要进行有关物质检测的盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射液、控释和缓释制剂以及各种含盐酸美金刚的复方制剂。
本发明与已有技术相比的积极效果在于1、使用蒸发光散射检测器对本品进行有关物质检测，克服了本品原料药结构稳定，没有发色基团，用紫外检测器难以检测的缺点。传统方法常用衍生化反应，本发明采用蒸发光散射，无需进行复杂的衍生化反应，并有效提高了其检测灵敏度。
2、本发明适用于各种剂型的盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射液、控释和缓释制剂以及各种含盐酸美金刚的复方制剂。
3、本发明检测方法准确，操作简捷，重现性好，灵敏度高，可以充分满足有关物质检查与分解产物测定的要求，较好地控制样品中的特殊杂质，保证产品质量，在工作中实用性强。
具体实施例方式
实施例一1、色谱条件与系统适用性试验1.1、检测仪器的选择由于本品结构比较稳定，没有发色基团，因此本品在紫外区没有吸收。将盐酸美金刚供试品以甲醇溶解并配制成每1ml含5.0mg的溶液，并选择205nm检测波长，其检测灵敏度仍然较低，因此，为更好的检出杂质，更好的控制产品质量，我们选用了蒸发光散射检测器。
1.2、色谱条件的选择仪器SHIMADZU LC-10AT VP，Alltech ELSD 2000，717 Plus Auto sampler。ELSD漂移管温度范围为70-130℃，其最佳检测温度为100℃；氮气流速为2.0-2.5L/min。液相色谱柱用十八烷基键烷硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)，参照相关文献并结合试验具体情况，先后选用甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸、甲醇-乙腈-异丙醇-水、乙腈-0.25％三氟乙酸溶液等多种条件，最终确定流动相由甲醇-乙腈-异丙醇-水组成，其最佳配比为(50∶20∶20∶10)，并在流动相中滴加三乙胺溶液，调整pH范围5.0～9.0，其最佳pH值为7.8左右；色谱柱温度为室温，流速为1.0ml/min。进样量10ul。
在该色谱条件下，盐酸美金刚主峰保留时间适中，峰形较好。
1.3、灵敏度测定 取盐酸美金刚对照品适量，用流动相配制成浓度为每1ml含0.3mg的溶液，再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.3ng(S/N≥3)，若以有关物质检查时的浓度0.3mg/ml计算，其检出限度为0.1％。结果证明，该方法灵敏度高，可以充分满有关物质检查测定的要求。
1.4、溶液稳定性 取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8小时分别进样测定，其主峰峰面积及有关物质测定结果在8小时内基本稳定。
以上试验结果表明，此方法简便灵敏，重现性好，可较好地对样品中盐酸美金刚的质量进行较好的检测。
2、供试品溶液的制备取盐酸美金刚或含盐酸美金刚的相关制剂适量，加流动相配制成0.3mg/ml的溶液，作为供试品溶液。
3、对照溶液的制备量取上述(2)供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含6μg的溶液，作为对照溶液。
4、盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂有关物质的检测取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20％，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸美金刚主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积。
实施例二盐酸美金刚片有关物质的测定取本品适量，研细，精密称取细粉(约相当于盐酸美金刚30mg)，加流动相配制成每1ml中含0.3mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中约含6μg的溶液，作为对照溶液。在下列选定的色谱条件下HPLC-ELSD检测器(SHIMADZU LC-10AT VP，Alltech ELSD 2000，717 Plus Auto sampler)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-异丙醇-水(50∶20∶20∶10)为流动相，并在流动相中滴加三乙胺溶液，调整pH值为7.8，色谱柱温度为室温，流速为1.0ml/min。理论塔板数按盐酸美金刚峰计算应不低于1500。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对照溶液主峰高约为满量程的20％，再取供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积。
表1.盐酸美金刚片有关物质测定结果
实施例三盐酸美金刚胶囊有关物质的测定取本品内容物适量，研细，精密称取细粉(约相当于盐酸美金刚30mg)，加流动相配制成每1ml中含0.3mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中约含6μg的溶液，作为对照溶液。在下列选定的色谱条件下HPLC-ELSD检测器(SHIMADZU LC-10AT VP，Alltech ELSD 2000，717 Plus Auto sampler)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-异丙醇-水(50∶20∶20∶10)为流动相，并在流动相中滴加三乙胺溶液，调整pH值为7.8，色谱柱温度为室温，流速为1.0ml/min。理论塔板数按盐酸美金刚峰计算应不低于1500。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对照溶液主峰高约为满量程的20％，再取供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积。
表2.盐酸美金刚胶囊有关物质测定结果
实施例四盐酸美金刚缓释片有关物质的测定取本品适量，研细，精密称取细粉(约相当于盐酸美金刚30mg)，加流动相配制成每1ml中含0.3mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中约含6μg的溶液，作为对照溶液。在下列选定的色谱条件下HPLC-ELSD检测器(SHIMADZU LC-10AT VP，Alltech ELSD 2000，717 Plus Auto sampler)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-异丙醇-水(50∶20∶20∶10)为流动相，并在流动相中滴加三乙胺溶液，调整pH值为7.8，色谱柱温度为室温，流速为1.0ml/min。理论塔板数按盐酸美金刚峰计算应不低于1500。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对照溶液主峰高约为满量程的20％，再取供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积。
表3.盐酸美金刚缓释片有关物质测定结果
图例说明图1对照溶液的HPLC图谱图2供试品溶液的HPLC图谱图3盐酸美金刚杂质限度线性关系图
权利要求
1.一种盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于检测方法包括以下步骤(1)色谱条件本品原料药结构比较稳定，没有发色基团，因此选用蒸发光散射检测器。采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-异丙醇-三乙胺溶液为流动相，流速为1.0ml/min。理论塔板数按盐酸美金刚峰计算不低于1500。(2)供试品溶液的制备取盐酸美金刚或含盐酸美金刚的相关制剂适量，加流动相配制成0.3mg/ml的溶液，作为供试品溶液。(3)对照溶液的制备量取上述(2)供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含6μg的溶液，作为对照溶液。(4)测定方法取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20％，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸美金刚主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积(2.0％)。
2.根据权利要求1所述的盐酸美金刚或含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于，其中(1)检测器采用蒸发光散射检测器，漂移管温度范围为70-130℃，最佳检测温度为100℃；氮气流速为2.0-2.5L/min，色谱条件的流动相由甲醇-乙腈-异丙醇-水组成，其最佳配比为(50∶20∶20∶10)，并在流动相中滴加三乙胺溶液，调整pH范围5.0～9.0，其最佳pH值为7.8左右；色谱柱温度为室温，流速为1.0ml/min。
3.根据权利要求1所述的盐酸美金刚或含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于其中(3)对照溶液的制备由于盐酸美金刚有关物质的检测限度为2％，同时为满足供试品溶液检测浓度的需要，取盐酸美金刚相关制剂适量，加流动相配制成0.3mg/ml的溶液，作为供试品溶液。再精密量取供试品1ml，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。
4.根据权利要求1、2、3所述的盐酸美金刚或含盐酸美金刚相关制剂的有关物质的检测方法，其特征在于，盐酸美金刚或含盐酸美金刚相关制剂的有关物质检测色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，应不得大于对照溶液的主峰面积。
5.根据权利要求1、2、3、4所述的盐酸美金刚或含盐酸美金刚相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于该方法适用于各种需要进行有关物质检测的盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射液、控释和缓释制剂以及各种盐酸美金刚的复方制剂。
全文摘要
本发明公开了一种盐酸美金刚的有关物质检测方法，具体是采用HPLC－ELSD检测器，以甲醇－乙腈－异丙醇－三乙胺溶液为流动相。取盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂适量，加流动相配制成每1ml中含盐酸美金刚0.3mg的溶液，作为供试品溶液。并用流动相稀释成每1ml中约含6μg的溶液，作为对照溶液。分别进样，供试品溶液色谱图中各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积。本发明盐酸美金刚及含盐酸美金刚的相关制剂的有关物质检测方法，克服了本品结构比较稳定、在紫外区没有吸收难以进行有效检测的缺点，可快速准确的检测出盐酸美金刚的杂质及降解产物情况。操作简捷，灵敏度高，可较好地控制产品质量。
文档编号G01N30/88GK101038280SQ20071001451
公开日2007年9月19日 申请日期2007年4月11日 优先权日2007年4月11日
发明者张岱州, 李玉基, 梁大连, 王功霞, 朱春花 申请人:山东省医药工业研究所