专利名称：：使用抗rsv单克隆抗体的rsv检测试剂盒、免疫层析试验用具和抗rsv单克隆抗体的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种使用抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体、可对呼吸道合胞病毒进行高灵敏检测的呼吸道合胞病毒检测试剂盒及免疫层析试验用具。本发明还涉及一种可用于制作该试剂盒或该用具的抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体。
背景技术：
：呼吸道合胞病毒(以下简称"RSV"或"RS病毒")是引起小儿呼吸道感染的主要病原。通常感染RSV时，引起类似感冒的轻微症状。但是，当免疫力低下的婴幼儿和老年人感染RS病毒时，可引起毛细支气管炎，发生呼吸困难，甚至有死亡的病例。因此，人们希望能快速简便地检测该病毒感染。RSV主要根据血清学上的不同，分为A型和B型两个亚型。A型RSV已知Long株、A2株等。B型RSV已知9320株、Bl野生型株等。RSV包膜中有糖蛋白质的G蛋白质和与细胞融合相关的F蛋白质。G蛋白质己知在RSV亚型(A型、B型)间氨基酸序列有很大差异。另一方面，F蛋白质已知在RSV亚型(A型、B型)间氨基酸序列差异很小。识别RSV的抗RSV单克隆抗体己知有几个。特许公开2001—510329号公报公开了与RS病毒的F蛋白质结合、有中和活性的变异单克隆抗体。特许公开2005-522996号公报公开了一种人RSV抗体。特许公开平11一507640号公报也公幵了与RS病毒的F蛋白结合的人单抗。各种克隆获得的与RS病毒的F蛋白质结合的抗RSV单克隆抗体都可以在市面上买到。另外，基于利用诸如BDRSVexamen(BD公司)、CheckRSV(AlfresaPharma公司[爱芙乐赛制药株式会社])、BinaxNOW(荣研化学)、免疫卡(TFB公司)、poctemSRSV(希森美康公司)等抗RSV单抗的免疫层析技术检测RSV用的试剂盒市场上也有销售。然而，用这些传统的RSV检测用试剂盒检测RSV时，灵敏度不够，有时全阳性样本的30~40%会被诊断为阴性。
发明内容本发明的范围只由后附权利要求书所规定，在任何程度上都不受这一节
发明内容的陈述所限。本发明提供一种检测RSV用试剂盒，其包括由杂交瘤RSF2—412培育出的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体。所述试剂盒，还包括由杂交瘤RSF1—1565和杂交瘤RSF6—255培育出的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体中的至少其中一种。所述试剂盒用于试剂盒的所述抗RSV单克隆抗体中至少一种用标记物标记。被标记物标记的抗RSV单克隆抗体为由杂交瘤RSF1—1565培育出的抗RSV单克隆抗体。所述试剂盒其中抗RSV单克隆抗体的至少一种固定在固相上。固定在固相上的抗RSV单克隆抗体是选自杂交瘤RSF2—412和杂交瘤RSF6—255培育的抗RSV单克隆抗体中的至少一种。本发明还提供一种RSV检测用免疫层析试验用具，至少包括由杂交瘤RSF2—412培育的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体。所述免疫层析试验用具，还包括由杂交瘤RSF1—1565和杂交瘤RSF6一255培育出的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体中的至少一种。所述免疫层析试验用具，具有添加可能含RSV的试样的加样垫、固定抗RSV单克隆抗体的标记附着垫、有固定与标记附着垫所固定的抗体不同的抗RSV单克隆抗体的判断区的层析膜，固定在标记物吸附垫的抗体被标记物标记。所述被标记物标记的抗体是由杂交瘤RSF1—1565培育出的抗RSV单克隆抗体。所述标记物为非溶性颗粒状物质。所述非溶性颗粒状物质为显色合成高分子粒子或胶体金属粒子。所述免疫层析试验用具，固定在判断区的抗RSV单克隆抗体是选自由杂交瘤RSF2—412和杂交瘤RSF6—255培育的抗RSV单克隆抗体中的至少一种。本发明另提供一种抗RSV单克隆抗体，由从杂交瘤RSF2—412、杂交瘤RSF1—1565和杂交瘤RSF6—255构成的群中选择的至少一种杂交瘤培育，识别RS病毒F蛋白。图1为本发明的免疫层析试验用具的某种实施方式的例示图。具体实施例方式下面参照附图就本发明的具体实施方式进行说明。(杂交瘤和抗RSV单克隆抗体)本发明的用于RSV检测用试剂盒和免疫层析试验用具的抗RSV单克隆抗体由杂交瘤RSF2—412(以下称为"杂交瘤412")培育而成。下面把这一抗体称为"412抗体"。本发明的抗体可以从其本身用众所周知的方法培养的杂交瘤获得。即用与所希望相符的辅药混合的RSV抗原、最好是用RS病毒F蛋白质免疫适当的哺乳动物(比如小鼠、大鼠等)。使该动物的脾细胞、淋巴细胞、B淋巴细胞等抗体产生细胞与来源于适当的哺乳动物(比如小鼠、大鼠等)的骨髓瘤细胞融合，即可获得杂交瘤。通常，抗体产生细胞和骨髓瘤细胞来源于同种动物。细胞融合可以通过在适当的培养基中在聚乙二醇等参与下使抗体产生细胞和骨髓瘤细胞融合的PEG法等进行。细胞融合后，用HAT培养基等选择性培养基选择杂交瘤，关于杂交瘤产生识别RS病毒F蛋白质的抗体的能力，按常法(比如酶免疫检测法(EIA))进行筛选。然后，按常法(如有限稀释法)克隆产生适当抗体的杂交瘤，选择产生单克隆抗体的杂交瘤。在本发明中，如以下实施例所示，用RS病毒F蛋白质免疫小鼠获得的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤412。杂交瘤412于2008年6月26日寄存于国家技术评估研究所专利微生物寄存中心(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8)，2009年移交国际保藏(保藏日2008年6月26日，保藏号NITEBP-601号)。在本发明中，用与上述同样的方法获得RSF1—1565(以下称"杂交瘤1565")和杂交瘤RSF6—255(以下称"杂交瘤255")。杂交瘤15652007年7月19日寄存于独立行政法人产业技术研究所特许生物寄存中心(日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，2009年移交国际保藏(保藏日2007年7月19日，保藏号FERMBP—11119)。杂交瘤255于2008年6月26日寄存于国家技术评估研究所专利微生物寄存中心(曰本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8)，2009年移交国际保藏(保藏日2008年6月26日，保藏号NITEBP-602号)。由杂交瘤1565和杂交瘤255产生的抗RSV单克隆抗体以下分别称为1565抗体和255抗体。上述杂交瘤412、1565和255的具体获得办法在后述实施例中明示。上述各杂交瘤产生的412抗体、1565抗体和255抗体可与RS病毒F蛋白质结合。RSVLong株的F蛋白质的氨基酸序列众所周知，表示为序列号l。如后述实施例所示，这三种抗体识别RS病毒F蛋白各个不同的表位。在本说明书中，"抗体"包含抗体、具有与该抗体同等RS病毒F蛋白质结合特性的抗体片段及其重构抗体。作为该抗体片段有Fab片段、F(ab，)2片段、Fab，片段、sFv片段等。(RSV检测用试剂盒)本发明的RSV检测用试剂盒至少包含由杂交瘤412产生的412抗体。在本说明书中，所谓"RSV检测用试剂盒"指包括数个组分、通过将这些组分组合使用能够检测出RSV的组分集合。本发明的RSV检测用试剂盒由包括上述412抗体在内的第一组分和其他组分构成。这些组分可以是含或不含抗体的溶液、含或不含抗体的固体载体及其组合等。本发明的试剂盒最好还包含识别与上述412抗体识别的RS病毒F蛋白质的表位不同表位的抗RSV抗体(以下称"其他抗体")。该其他抗体可以是一种或几种，但最好是二种。本发明的试剂盒最好包含412抗体及其他二种抗RSV抗体，共三种抗体，以此与过去的RSV检测试剂盒相比，可以提高RSV检测灵敏度。上述其他抗体识别的表位是否与412抗体识别的表位相同可以用众所周知的方法检测。作为众所周知的方法有竞争抑制法。所谓竞争抑制法就是探讨目标抗体对任意抗体和抗原结合的竞争抑制能力，是一种研究各抗体结合的表位是否相同的方法。更具体地说，就是在后述实施例3所示条件下进行的方法。上述任意抗体只要不是目标抗体，无特别限定。比如，在上述竞争抑制法中，当某种抗RSV抗体无法抑制412抗体可以抑制的任意抗体与RSV抗原的结合时，该抗RSV抗体就是上述"其他抗体"。当某种抗RSV抗体能够抑制412抗体不能抑制的任意抗体与RSV抗原的结合时，该抗RSV抗体也是上述"其他抗体"。在上述竞争抑制法中，"能抑制"意思是对上述任意抗体和RSV抗原的结合抑制30%以上、理想的是50°/。以上、更好的是90%以上。在上述竞争抑制法中，"不能抑制"意思是对上述任意抗体和RSV抗原的结合只能抑制不到30%、更好的是不到10%、最好是0%。412抗体以外的本发明试剂盒中所含上述其他抗体最好是不与有序列号2所示氨基酸序列的蛋白质结合的抗RSV单克隆抗体。序列号2的氨基酸序列是RS病毒的F蛋白质的氨基酸序列(序列号l)的第421赖氨酸残基变异为苏氨酸残基的氨基酸序列。不与有序列号2氨基酸序列的蛋白质结合的抗RSV单克隆抗体比如有1565抗体等(参照实施例5)。作为其他理想的其他抗体如有255抗体。特别是作为其他抗体最好是1565抗体和255抗体都含有的试剂盒。本发明的试剂盒只要包括有412抗体、包括可进行用抗原抗体反应检出抗原的免疫检测的这些组成要素，没有其他特别限定。这种组成要素是该行业人员都知道的。作为免疫检测法可采用免疫沉降、标记免疫检测等方法。作为标记免疫检测法如有免疫层析法、酶免疫试验(EIA)、放射免疫测定(RIA)、荧光免疫测定(FIA)、化学发光免疫测定等。(标记抗体)作为本发明的试剂盒最好是标记免疫检测试剂盒。在这种试剂盒中，所用的抗RSV单克隆抗体至少有一种被标记物标记。作为被标记物标记的抗体最好是不与有序列号2所示氨基酸序列的蛋白质结合的抗RSV单克隆抗体，尤以1565抗体为宜。上述标记物只要是在通常的免疫检测中可用的标记物即可，无特别限定。比如可以是酶、荧光物质、放射性同位素、非溶性粒状物等。作为酶如有碱性磷酸酶、过氧化物酶、葡糖氧化酶、酪氨酸酶、酸性磷酸酶等。作为荧光物质如有异硫氰酸荧光素(FITC)、绿色荧光蛋白质(GFP)、萤光素等。作为放射性同位素如有125I、14C、"P等。作为上述非溶性粒状物质，可以使用如寒天、琼脂糖、架桥琼脂糖、架桥海藻酸、架桥瓜尔胶、硝酸纤维素和羧基纤维素等纤维素酯类、凝胶、架桥凝胶、乳胶、橡胶、聚酯、聚乙烯、聚丙烯、苯乙烯-丁二烯共聚物、聚氯乙烯树脂、聚醋酸乙烯酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、苯乙烯-甲基丙烯酸酯共聚物、聚甲基丙烯酸环氧丙酯、丙烯醛-乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物等天然或合成树脂及其衍生物。还可以使用用色素分子、荧光分子或磁粒子等标记由玻璃(比如活性化玻璃)、硅胶、高岭土、云母、硅铝、氧化铝、硫酸钡等无机材料构成的粒子所得标记粒子作为非溶性粒状物质。也可以将金胶体等金属胶体粒子及红细胞等作为非溶性粒状物质使用。作为非溶性粒状物质，尤以用色素分子标记上述合成高分子而成的显色合成高分子粒子和金属胶体粒子为宜。(固定在固相上的抗体)作为上述标记免疫检测最好釆取利用抗体结合到固相上的固相法。在固相法中，所用抗RSV单克隆抗体至少一种固定在固相上。固定在固相上的抗体应至少一种是选自412抗体和255抗体。最好这两种抗体都固定在固相上。作为固相法所用固相，如有微量滴定板、薄膜、粒子等。作为固相的材料可以使用胶乳、橡胶、聚乙烯、聚丙烯、苯乙烯树脂、苯乙烯一丁二烯共聚物、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、苯乙烯一甲基丙烯酸酯共聚物、聚甲基丙烯酸环氧丙酯、丙烯醛一乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物、聚偏氟乙烯(PVDF)、纤维素类(硝酸纤维素、醋酸纤维素等)、尼龙(如也可以羧基和烷基作为置换基的导入了氨基的修饰尼龙)等聚合物材料；琼脂糖；明胶；红细胞；硅胶、玻璃、无活性矾土、磁体等无机材料等。固相也可以将其中的一种或二种以上材料组合起来使用。(试样)用本发明的RSV检测用试剂盒进行试验的试样包括从RSV疑似患者采集的生物试样、和对该生物试样进行前期处理所得的试样。作为生物试样，如有血液、血清、粪便、尿液、唾液、鼻腔抽取液、拭液、汗液、泪液等。作为上述前期处理比如有将生物试样溶解到适当的前期处理试剂中，用过滤器过滤溶解所得溶液等。(试剂盒的组成要素)当上述固相为微量滴定板时，本发明的试剂盒包含微量滴定板和至少含有上述412抗体的溶液。或者也可以将含有固定有412抗体的微量滴定板的试剂盒作为本发明的试剂盒。当上述固相是薄膜时，本发明的试剂盒包含薄膜和至少含有上述412抗体的溶液。或者也可以将含有固定有或吸附有412抗体的薄膜的试剂盒作为本发明的试剂盒。当上述固相是粒子时，本发明的试剂盒包含粒子和至少含有上述412抗体的溶液。或者也可以将含有固定有412抗体的粒子的试剂盒作为本发明的试剂盒。作为本发明的试剂盒，最好是免疫层析用试剂盒。即上述试剂盒包含固定或吸附有412抗体的免疫层析试验用具。在本说明书中，所谓"吸附"抗体意指固相上的抗体可移动。(免疫层析试验用具)本发明还提供一种固定或附着有412抗体的免疫层析试验用具。上述免疫层析试验用具最好具备添加可能含有RSV的试样的加样垫、吸附抗RSV单克隆抗体的标记附着垫和层析用膜载体(以下称"层析膜，，)。在上述免疫层析试验用具，最好加样垫和标记附着垫接触。加样垫和层析膜最好接触。加样垫最好在层析膜的试样展开方向上游与层析膜接触。标记附着垫最好配置在层析膜的试样展开方向上游。标记附着垫可以与层析膜接触，也可以不接触。在本说明书，所谓"试样展开方向上游"和"试样展开方向下游"指对于免疫层析试验用具的长边方向，当将加样一侧当作上游，试样展开(流动)方向作为下游时的相对方向。(试验用具的抗体)在上述免疫层析试验用具中，吸附在标记附着垫的抗体最好用上述标记物标记。作为该标记物要能够用肉眼便捷地观察到颜色变化，因此最好是非溶性粒状物，尤以显色合成高分子粒子或金属胶体粒子为宜。在上述免疫层析试验用具，用标记物标记的抗体以不与有序列号2所示氨基酸序列的蛋白质结合的抗RSV单克隆抗体为宜，最好是1565抗体。固定在上述判断区的抗RSV单克隆抗体应至少有一种选自412抗体和255抗体，最好是这二种抗体。(加样垫)上述加样垫可以是棉花、玻璃纤维、多孔聚乙烯、多孔聚丙烯等多孔合成树脂和纤维素纤维等材质。加样垫可以是这些材料构成的布、无纺布、滤纸、条或膜。(标记附着垫)上述标记附着垫可以是玻璃纤维、纤维素纤维、塑料(如聚酯、聚丙烯、聚乙烯等)纤维等材质的东西。上述标记附着垫最好还附着用于确认试样是否适当展开的质控用标记物。质控用标记物最好对试样中的成份实际上没有反应。该质控用标记物可以与下述能与质控用标记物结合的物质成对使用。即，质控用标记物和能结合到质控用标记物的物质是二个能特异性结合的物质的组合，其中，以哪个为质控用标记物均可。作为这种能特异性结合的二个物质的组合可以列举出半抗原和能与之结合的蛋白质，如生物素与链霉亲和素或亲和素、2，4一二硝基酚或异羟洋地黄毒苷与蛋白质(如清蛋白、酪蛋白、纤维蛋白原等)等。这些质控用标记物的组合最好使用试样中没有的组合。作为上述质控用标记物的标记可以使用与上述标记物同样的标记。质控用标记物可用与抗体相同的标记成份标记，也可以不同标记成份标记。(层析膜)上述层析膜可以是靠静电作用和疏水相互作用等物理作用能与蛋白质结合且能通过毛细管现象展开试样的材质。作为层析膜，可以列举出硝化纤维、尼龙(如也可以羧基和垸基作为置换基的导入了氨基的修饰尼龙)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纤维素等。上述层析膜最好有固定了可与质控用标记物结合的物质的质控区，用于确认试样是否适当展开。可与上述质控用标记物结合的物质如以上关于质控用标记物的叙述。(其他部件)上述免疫层析试验用具还可以有吸收垫。吸收垫可以用纤维素、玻璃纤维、聚乙烯、聚丙烯等多孔塑料等材质的织物、无纺布等。该吸收垫最好配置在比层析膜靠近试样展开方向下游的位置，并与层析膜接触。在这种位置上配置吸收垫可以加快试样的展开速度。上述免疫层析试验用具为了将上述加样垫、标记附着垫和层析膜以及吸收垫任意地组装在一起，最好有衬底。衬底只要可以作为普通免疫层析试验用具的衬底使用即可，无特别限定。作为衬底比如可以使用塑料、纸张、玻璃等。该衬底为了组装上述各部件，最好表面具有粘性。(试验用具的制作方法)本发明的免疫层析试验用具可以与众所周知的免疫层析试验用具用一样的方法制作。即通过将标记附着垫浸泡在含有抗体、最好是标记抗体的适当缓冲液中，再干燥，即可制作出标记附着垫。或者在标记附着垫中添加该缓冲液，再干燥，也可制作出标记附着垫。层析膜为了使该抗体固定在判断区，可通过在判断区添加适当抗体并干燥来制作。这些标记附着垫和层析膜与加样垫适当组合裁剪，即可获得上述免疫层析试验用具。(试验用具的优选实施方式)图1为本发明的一个实施方式所涉及的免疫层析试验用具的截面图。此免疫层析试验用具1在由表面有粘附层的塑料板构成的衬底2上有由棉质无纺布构成的加样垫3、由玻璃纤维无纺布构成的标记附着垫4、由硝化纤维等多孔物质构成的层析膜5和由纤维无纺布构成的吸收垫6。衬底2为适当地配置加样垫3和标记附着垫4等上述部件而设。衬底2可以为纸或玻璃等材质。加样垫3上添加试样。试样只要可能含有RSV，没有特别限定。作为试样尤以鼻腔提取液、鼻腔擦拭液或咽喉擦拭液为佳。试样也可以用缓冲液等适当溶剂稀释后添加。在本实施方式中，标记附着垫4与加样垫3接触配置，吸附有被标记物标记的第一抗体(1565抗体)。在本实施方式中，层析膜5不直接与标记附着垫4接触。层析膜5有固定了与待测物发生抗原抗体反应的第二抗体的判断区5A。第二抗体只要是与上述第一抗体不同的抗体即可。在本实施方式中，使用412抗体和255抗体作为第二抗体。如果标记附着垫或判断区的某一个含有412抗体的话，也可以在本发明的抗RSV单克隆抗体以外组合其他抗RSV单克隆抗体使用。吸收垫6与层析膜5接触配置，用于吸收过剩试样。吸收垫6只要能迅速吸收并保持液体即可。而且，加样垫3的一部分和吸收垫6的表面可以如图l所示用透明条7覆盖。本发明的免疫层析试验用具1比如可如下制作。(1)将层析膜5贴在衬底2的中部。(2)在衬底2的上游一侧、层析膜5的试样展开开始处(即图1的左侧，以下称为"上游侧")与层析膜5末端不接触、间隔地粘贴标记附着垫4。(3)将加样垫3上游部分贴在衬底2的最上游部分。(4)将加样垫3的试样展开结尾处(即图1的右侧，以下称"下游侧")部分放在标记附着垫4和层析膜5的上游侧上面。(5)在标记附着垫4和层析膜5之间的衬底2贴上加样垫3。(6)将吸收垫6的上游侧部分放在层析膜5的下游侧上面。(7)将吸收垫6的下游侧部分贴在衬底2的最下游侧处。(8)用透明条7覆盖加样垫3下游侧部分和吸收垫6的表面。试样根据需要与适当的溶剂混合，制成可层析展开的混合液。再将上述免疫层析试验用具1的上游(加样垫3)浸入该混合液，或将该混合液添加到加样垫。这样，该混合液通过加样垫3在标记附着垫4与标记的第一抗体混合。如果上述混合液中存在RSV抗原，则在抗原抗体反应的作用下，RSV抗原与第一抗体结合，形成复合物。此复合物在层析膜5中移动，到达判断区5A。复合物与固定在判断区5A的第二抗体发生抗原抗体反应，被判断区5A捕捉。此时，如果作为标记物使用的是蓝色乳胶粒子等显色合成高分子粒子的话，判断区5A会因该粒子的聚集显现为蓝色。这样就可以马上目测确认RSV的存在。层析膜5也可以不止有一个，而是有二个以上判断区。层析膜5也可以有质控区。当有质控区时，只要在标记附着垫4上可移动地附着用标记物比如红色乳胶粒子标记的亲和素，在层析膜5的质控区固定与亲和素特异性结合的生物素即可。使用本发明的RSV检测用试剂盒和免疫层析试验用具，比传统的RSV检测方法更能提高RSV检测灵敏度。因此，能够更准确、便捷地检测出RSV，得以为更准确地诊断RSV感染提供指标。实施例下面通过以下实施例更详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。杂交瘤的制备(小鼠免疫)在市场销售的Capricon公司制的含有RSV抗原的磷酸缓冲液(PBS)100pL中加入10(^l福氏完全佐剂(FCA)混合、乳化，制作FCARSV抗原溶液200^1。再以上述同样的方法不使用FCA，而使用福氏不完全佐剂(FIA)制作200(J的FIARSV抗原溶液。用200pl的FCARSV抗原溶液向7~8周龄的BALB/C雌鼠进行腹腔内注射，进行首次免疫。首次免疫后，隔2~3周用FIARSV抗原溶液200^1进行追加免疫。在分离脾细胞10天前和3天前静脉注射200^1RSV抗原(Capricon公司制)。最后一次注射结束三天后，分离脾细胞，用PEG法融合脾细胞和P3X63—Ag8，653鼠骨髓瘤细胞，制备杂交瘤。(杂交瘤培养)将杂交瘤悬浮于HAT培养基，浓度至2.5xl(^细胞/ml，向96孔微孔板(Coming康宁公司制；以下称培养板)各孔分装2.5><105细胞/孔。培养板在37°C、8%C02的恒温槽内静置，开始杂交瘤的培养。培养十天以上，出现杂交瘤集落时筛选产生单克隆抗体的杂交瘤。(杂交瘤筛选)在含有O.lw/v%NaN3的0.1M磷酸缓冲液(PBSpH7.5)中添加RSV抗原，直至RSV抗原(Capricon公司制)浓度为0.5吗/ml，调制固定用RSV抗原溶液。将此固定用RSV抗原溶液lOOpl分装到免疫模块(NUNC公司制)各孔(以下称抗原固定板)。抗原固定板4。C过夜后，在浓度为0.05。/。时用含有Tween20的PBS缓冲液(以下称缓冲液A)洗涤三次。洗涤后，在浓度为lw/VM)时将含BSA的PBS缓冲液(以下称缓冲液B)30(^1分装到抗原固定板各孔，28t:静置存放4小时以上。抗原固定板在使用前一直在28"C保存。除去抗原固定板中的缓冲液B。除去后，向抗原固定板各孔分别分装75^1缓冲液B。再将上述杂交瘤培养上清从培养板各孔取出，并向抗原固定板各孔分别添加25^1。添加缓冲液B和培养上清后，室温搅拌一小时。搅拌后用缓冲液A洗涤抗原固定板各孔三次。洗涤后，向抗原固定板各孔分别添加用缓冲液B稀释了10000倍的辣根过氧化物酶(POD)标记抗小鼠Ig多克隆抗体(DAKO公司制；编号No.P0447)各100^1，室温反应30分钟。反应后，用缓冲液A洗涤抗原固定板各孔三次。洗涤后，每孔各加10(^1含POD的底物即邻苯二胺(OPD)的底物液，室温中静置10分钟。再加含2HH2S04的反应终止液于抗原固定板各孔，每孔100|_il。对于各孔中的反应液，用酶标仪(分子仪器公司制)测定492nm处的吸光度。所得三个杂交瘤RSF1—1565、RSF2—412、RSF6—255委托国际保藏(保藏号FERMBP-11119号、保藏号MTE601号、和保藏号NITE602号)。抗RS病毒一F蛋白质单克隆抗体的反应性的确认(1565抗体、412抗体和255抗体的反应性的确认)RS病毒一F抗原使用的是Long株(10[6.7]TCID(50)/ml)、A2株(10[5.5]TCID(50)/ml)、9320株(10[5.5]TCID(50)/ml)和Bl野生型(wild-type)(BWV)株(10[4.5]TCID(50)/ml)的RSV。这些RSV4株可从美国标准生物品收藏中心(ATCC)购得。用含牛血清白蛋白(BSA)的磷酸缓冲液(以下称为第一缓冲液)将上述RSV稀释到1/10。已稀释的各抗原液和样本萃取液(100mM柠檬酸一0.4MNaCl、10mM二硫苏糖醇、0.1(v/v)。/。聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethyleneoctylphenylether))等量混合，萃取处理5分钟，制备各种抗原萃取液。制备含市面上出售的抗鼠抗体IgG与琼脂糖凝胶珠(安玛西亚生物科学(AmershamBiosciences)公司制)结合而成的珠体浓度为15v/v。/。的琼脂糖凝胶溶液。混合琼脂糖凝胶溶液、上述各抗原萃取液和第一缓冲液，制备各种抗原试样。各抗原试样中的琼脂糖凝胶溶液和各抗原萃取液的混合量例示如表1。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>抗原试样加入96孔V底板(三博特(sanplatec)公司制)各孔，每孔60pL。再将1565抗体、412抗体和255抗体分别用第一缓冲液稀释到l吗/ml，制备1565抗体液、412抗体液和255抗体液。将制备的各抗体液分别加入各孔，每孔30pL。然后，室温搅拌96孔V底板60分钟。搅拌后，96孔V底板静置10分钟。在免疫模块(能肯(NUNC)公司制)各孔分别加入100pL的用0.1M磷酸纳缓冲液稀释到浓度10|ig/ml的133—1H抗体(CHEMICON公司制；抗RSV的抗体)溶液。再用含(Tween20)吐温20的磷酸缓冲液(以下称第二缓冲液)洗涤三次各孔。洗涤后，在各孔分别注入30(HiL第一缓冲液封闭(称此免疫模块为133—1H抗体致敏板)。清除133—1H抗体致敏板中的第一缓冲液。清除后，在133—1H抗体致敏板各孔添加上述静置IO分钟的96孔V底板各孔的上清50pL。133—1H抗体致敏板室温中搅拌30分钟后，用第二缓冲液洗涤三遍133—1H抗体致敏板。在洗净后的133—1H抗体致敏板各孔添加100pl含生物素标记的B016抗体(Serotec公司制；最终浓度2pg/ml)和用链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(POD;最终浓度50mU/ml)的第一缓冲液。室温中搅拌133—1H抗体致敏板60分钟。然后，用第二缓冲液洗涤133—1H抗体致敏板三将含POD的底物即邻苯二胺(OPD)的底物液分别添加至133—1H抗体致敏板各孔各10(^1，室温中静置10分钟。再在133—1H抗体致敏板各孔各添加100nl含2NH2S04的反应终止液，用酶标仪(美国分子仪器(MolecularDevices)公司制)测定各孔中反应液在492nrn处的吸光度(吸光度A)。作为质控试验，将抗体液换为第一缓冲液制备质控试样，进行同样的试验，测定吸光度(吸光度B)。作为质控试验，还用第一缓冲液代替抗体液和抗原试样，制备质控试样，进行同样的试验，测定吸光度(吸光度C)。用所得吸光度AC以下述(1)式求使用各来源于杂交瘤的抗RS病毒一F蛋白单克隆抗体的测定试样的吸收率。吸收率(％)=[1—(A—C)/(B—C)]x100(1)各抗RSV—F蛋白单克隆抗体的反应性评价结果如表2所示。在表2中，"+++，，表示(i)式所求吸收率为90%以上，"++"表示50%以上，"+"表示30%以上，"一"表示不到30%。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>从表2的结果明显看出，1565抗体、412抗体和255抗体对Long株、A2株、9320株及BWV株的任何一种抗原均显示反应性。[实施例3]抗RS病毒一F蛋白单克隆抗体的抗原识别部位的确认(对B016抗体的抑制试验)A2株(10[5.5]TCID(50)/ml)用第一缓冲液稀释到1/10。等量混合稀释的抗原液和样本萃取液，进行5分钟的萃取处理，制备A2株抗原萃取液。再将A2株抗原萃取液用第一缓冲液稀释到1/20，制备抗原试样。用0.1M磷酸纳缓冲液稀释到浓度10pg/mL的133—1H抗体(DHEMICON公司)溶液在免疫模块(NUNC公司制)各孔分别加入100pL。用第二缓冲液洗涤各孔三次。洗涤后各孔各加300|aL第一缓冲液封闭(以下称此免疫模块为133—1H抗体致敏板)。除去133—1H抗体致敏板中的第一缓冲液。除去后在133—1H抗体致敏板各孔中加100pL抗原试样，搅拌30分钟。再用第二缓冲液洗涤抗体致敏板各孔三遍。1565抗体、412抗体和255抗体分别用第一缓冲液稀释为10pg/ml，制备1565抗体液、412抗体液和255抗体液。将制备的各抗体液各加50pL于133—1H抗体致敏板各孔中。再在133—1H抗体致敏板各孔中加入50pL含生物素标记的B016抗体(UK—Serotec公司制；最终浓度2pg/ml;针对RSV的抗体)和链霉亲和素标记的POD(最终浓度40mU/ml)的第一缓冲液，之后，室温中搅拌133—1H抗体致敏板60分钟，再用第二缓冲液洗涤B3—1H抗体致敏板三遍。在133—1H抗体致敏板各孔中分别加入100pL含OPD的底物液，室温中静置IO分钟。再在133—1H抗体致敏板各孔中各加100pL含2NH2S04的反应终止液，对各孔中的反应液用酶标仪测定在492nm处的吸光度(吸光度A)。作为质控试验，将抗体液换为第一缓冲液制备质控试样，进行同样的试验，测定吸光度(吸光度B)。作为质控试验，还用第一缓冲液代替抗体液和抗原试样，制备质控试样，进行同样的试验，测定吸光度(吸光度C)。用所得吸光度AC以下述(2)式求出使用各来源于杂交瘤的抗RS病毒一F蛋白质单克隆抗体的测定试样的抑制率。抑制率(％)=[1—(A—C)/(B—C)]xl00(2)(对133—1H抗体的抑制试验)试验除使用将B016抗体在免疫模块各孔致敏的B016抗体致敏板取代133—1H抗体致敏板、和用生物素标记的133—1H抗体取代生物素标记的B016抗体外，均与上述对B016抗体的抑制试验相同。各抗RS病毒一F蛋白单克隆抗体对133—1H抗体和B016抗体的抑制结果如表3所示。在表3中，"+++"表示(2)式所求抑制率为90%以上，"++"表示50%以上，"+"表示30%以上，"一"表示不到30°/。。克隆抗体名对133-1H抗体的抑制对B016抗体的抑制RSF1-1565+++—RSF2-"2一RSF6-255—+++从表3的结果看，显然412抗体与133—1H抗体和B016抗体有不同的抗原识别部位。通过RS病毒一F蛋白单克隆抗体组合检测RSV抗原的试验用第一缓冲液将Long株(10[6.7]TCID(50)/ml)稀释到1/10。等量混合已稀释的各抗原液和样本萃取液，萃取处理5分钟，制备Long株抗原萃取液。向免疫模块各孔分别加入各100pL的用0.1M磷酸纳缓冲液稀释到浓度5昭/mL的1565抗体、412抗体和255抗体。用第二缓冲液洗涤各孔三次。洗涤后各孔分别各加300pL第一缓冲液封闭，制作1565抗体致敏板、412抗体致敏板和255抗体致敏板。除去各抗体致敏板中的第一缓冲液。除去后，向各抗体致敏板各孔中按照50pL/孔添加Long株抗原萃取液。在室温中搅拌30分钟后，用第二缓冲液洗涤三遍。按众所周知的方法分别对1565抗体、412抗体和255抗体进行生物素标记，以此制备生物素标记RSF1—1565抗体、生物素标记RSF2~412抗体和生物素标记RSF6—255抗体。向各抗体致敏板按照100nL/孔添加含所制各生物素标记抗体(最终浓度2吗/ml)和链霉亲和素标记的POD(最终浓度40mU/ml)的第一缓冲液。室温中搅拌各抗体致敏板60分钟后，用第二缓冲液洗涤三遍。在各抗体致敏板各孔中各加入lOO^L含OPD的底物液，室温中静置10分钟。再在各抗体致敏板各孔中各加100pL含2NH2S04的反应终止液。对各孔中的反应液用酶标仪测定492nm处的吸光度。测定结果见表4。固相一侧RSF1-1565RSF2-412RSF6-255标记一侧RSF2-"2RSF1-1565RSF6-255从表4的结果得知，1565抗体、412抗体和255抗体只要固相一侧和标记一侧的抗体不用同一种抗体，通过各种组合均可用夹心免疫检测法检出RSV抗原。1565抗体的表位分析(1565抗体逃逸株的制备)将RSV感染细胞Hep2用添加了10%胎牛血清的EagleMEM(SIGMA公司制)在24孔板(康宁(Corning)公司制)中培养。Hep2细胞形成集落时，将培养液换成含1%胎牛血清的EagleMEM，以MOI=0.0005感染Long株(10[6.7]TCID(50)/ml)。感染后，在37。C、5%C02中培养1小时。经一小时培养后，按照20pg/孔添加1565抗体。添加抗体后，在37"、5。/。C02培养34天。除去另用含10%胎牛血清的EagleMEM培养的Hep2细胞的培养液，添加培养3~4天的上述细胞培养上清的1/2量。再添加与细胞培养上清等量的含1%胎牛血清的EagleMEM。添加后37。C、5%032培养1小时。培养1小时后，力Q1565抗体20)ig/孔。添加抗体后，在37°C、5%(302培养34天。此操作再进行五次。在1565抗体存在的情况下进行共计七次RSV感染继代培养后，观察细胞病变效应。根据观察的细胞病变效应得以确认出现1565抗体逃逸株，因此将此细胞培养液全部回收，冻结保存。(1565抗体逃逸株的RS病毒-F蛋白质基因序列分析及氨基酸序列分析)用ReverTraAce-a-(东洋纺公司制，产品代码FSK-101)和引物[序列ATGGAGTTGCCAATCCTCAAAGC(序列号3)]从1565抗体逃逸株的培养上清和Long株合成cDNA。用PrimeStar(TAKARA公司制产品代码R010A)和引物[序列ATGGATCCATGGAGTTGCCAATCCTCAAAGC(序歹U号4)、GCATT(序列号5)]从合成的各cDNA进行聚合酶链式反应(PCR)。PCR在95'C反应2分钟后，以95"C反应30秒、55。C反应20秒和72'C反应100秒为一个循环，重复这样的循环35次。反应结束后，冰结保存PCR产物。用MinElutePCR纯化试剂盒(QIAGEN公司制)从PCR产物除去引物。用BigDyeTerminatorv3.1循环测序试剂盒(美国生物应用系统(AppliedBiosystems)公司制)及引物[序歹U:ATGGATCCATGGAGTTGCCAATCCTCAAAGC(序歹lj号4)、TTTCTTGGTTTTTTGTTAGGTGTTGG(序歹lj号6)、TTTAACATTACCAAGTGAAATAAATCT(序歹ij号7)、TCTTCTTTTCCTTTTCTTGCTTAATG(序歹U号8)]从弃弓l物的PCR产物进行循环测序反应。反应后，除去标记核苷，用测序仪(美国生物应用系统公司制)和序列分析软件(日立软件公司制)进行基因序列分析和预测氨基酸序列分析。1565抗体逃逸株的RS病毒^F蛋白质的氨基酸序列见序列号2。Long株的RS病毒一F蛋白质的氨基酸序列见序列号1。从序列号1和序列号2可以看出，RSF1—1565抗体逃逸株的RS病毒一F蛋白质第421赖氨酸(K)变为苏氨酸(T)。(对1565抗体逃逸株的反应性分析)1565抗体逃逸株的培养上清液和Long株用第一缓冲液稀释到1/10。等量混合稀释的各抗原液和样本萃取液，萃取处理5分钟，制备各抗原萃取液。再将各抗原萃取液用第一缓冲液稀释到1/5，制备抗原试样。向免疫模块(NUNC公司制)各孔中分别添加lOOpL的用0.1M磷酸纳缓冲液稀释到浓度10吗/mL的B016抗体(UK—Serotec公司制)溶液。用含Tween20的磷酸缓冲液(以下称第二缓冲液)洗涤各孔三次。洗涤后，在各孔中分别添加第一缓冲液30(HiL并封闭(以下称此免疫模块为B016抗体致敏板)。除去B016抗体致敏板中的第一缓冲液。除去后向B016抗体致敏板各孔添加100pL抗原试样，搅拌30分钟。然后用第二缓冲液洗涤B016抗体致敏板各孔三次。按众所周知的方法对1565抗体进行生物素标记，制备生物素标记RSF1—1565抗体。向B016抗体致敏板各孔分别添加100pL的含有制备的1565生物素标记抗体(最终浓度2吗/mL)和链霉亲和素标记POD(最终浓度40mU/ml)的第一缓冲液后，B016抗体致敏板在室温中搅拌60分钟。再用第二缓冲液洗涤B016抗体致敏板三次。B016抗体致敏板各孔分别添加100pL含OPD的底物液，室温中静置IO分钟。向B016抗体致敏板各孔分别添加100pl的含2HH2S04的反应终止液后，对各孔中的反应液，用酶标仪测定492nm处的吸光度。吸光度的测定结果如表5所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>从表5可以看出，1565抗体不识别1565抗体逃逸株的RS病毒一F蛋白质。制作检测RSV用免疫层析试验用具(本发明试验用具的制作)将1565抗体作为标记物标记的第一抗体使用，将412抗体和255抗体作为固定在层析膜上的第二抗体使用，按以下方法制作图1所示免疫层析试验用具l(以下称试验用具)。首先，用磷酸缓冲液(pH7.0)将412抗体和255抗体最终浓度稀释到1.0mg/mL，制备412抗体'255抗体混合液。再用抗体涂敷机(Bio-Dot公司产品)将412抗体'255抗体混合液在硝化纤维膜制层析膜判断区5A涂lmm宽，5(TC干燥30分钟。将干燥后的层析膜5浸入封闭液(含BSA的磷酸缓冲液(pH7.0))进行封闭。再用洗涤液(含有SDS的磷酸缓冲液(pH7.0))洗涤，于40。C下干燥120分钟，获得层析膜5。然后，使1565抗体对蓝色显色聚苯乙烯乳胶粒子(粒径0.3pm)发生致敏作用，悬浮于分散用缓冲液(含BSA和蔗糖的磷酸缓冲液(pH7.0))，制备1565抗体致敏乳胶粒子。致敏时的抗体浓度为每lmLl。/。乳胶粒子200吗IgG。将此1565抗体致敏乳胶粒子加入玻璃纤维制衬垫后，用真空干燥机干燥，获得标记附着垫4。用上述层析膜5和标记附着垫4得到本发明的试验用具。(质控试验用具的制备)制备方法除用B016抗体作为第一抗体、用133-lH抗体作为第二抗体和用稀释到最终浓度为2.0mg/mL的B016抗体代替412抗体和255抗体混合液以外其他均与上述本发明试验用具的制作相同，制备质控试验用具。确认本发明试验用具和传统试验用具对RSV的反应性(用本发明试验用具检测RSV)用实施例6制备的本发明试验用具按下述步骤确认对RSV的反应性。(1)用Vero细胞培养表6所示三种RSV(Long株、BWV株及9320株)，用生理盐水按表6所示稀释倍率稀释所得病毒，制备病毒液。(2)向800pL样本萃取试剂(含0.3w/v%NP—40(乙基苯基聚乙二醇)的磷酸缓冲液pH7.3)中添加150)iL上述(1)制备的一定稀释倍率的病毒液进行混合，制备测定用试样。(3)将约200pL上述(2)制备的测定用试样滴入玻璃试管，本发明试验用具的上游(加样垫3)浸入其中放置约IO分钟后，用肉眼判断判断区5A显色情况。当确认显色时评价为(+)，未确认显色时评价为(一)。结果见表6。(用传统试验用具检测RSV)作为传统试验用具，使用了质控试验用具，市面上出售的试验用具使用的是checkRSV(AlfresaPharma公司制)和BDRSVexamen(BectoivDickinson公司制)，用此确认其对RSV的反应性。质控试验用具按与上述本发明试验用具同样的步骤确认了其对RSV的反应性。市面上出售的试验用具用上述病毒液按各市面上出售的试验用具附带的资料所记操作步骤确认了其对RSV的反应性。反应性的确认结果见表6。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>NT:未试验从表6可以看出，本发明的试验用具对RSV显示出比传统试验用具更高的反应性。序列表<110〉<120〉<130〉<勝<170〉<210〉<211><212><213>希森美康株式会社使用抗RSV单克隆抗体的RSV检测试剂盒、免疫层析试验用具和新型抗RSV单克隆抗体08-0078Patentlnversion3.11574PRT呼吸道合胞病毒<400>1MetGluLeuProlieLeuLysAlaAsnAlalieThrThrlieLeuAla151015AlaValThrPheCysPheAlaSerSerGinAsnlieThrGluGluPhe202530TyrGinSerThrCysSerAlaValSerLysGlyTyrLeuSerAlaLeu354045ArgThrGlyTrpTyrThrSerVallieThrlieGluLeuSerAsnlie505560LysGluAsnLysCysAsnGlyThrAspAlaLysValLysLeulieLys65707580GinGluLeuAspLysTyrLysAsnAlaValThrGluLeuGinILeuLeu859095MetGinSerThrProAlaAlaAsnAsnArgAlaArgArgGluLeuPro100105110ArgPheMetAsnTyrThrLeuAsnAsnThrLysLysThrAsnValThr115120125LeuSerLysLysArgLysArgArgPheLeuGlyPheLeuLeuGlyVal130135140GlySerAlalieAlaSerGlyThrAlaValSerLysValLeuHisLeu145150155160GluGlyGluValAsnLyslieLysSerAlaLeuLeuSerThrAsnLys165170175AlaValValSerLeuSerAsnGlyValSerValLeuThrSerLysVal180185190LeuAspLeuLysAsnTyrlieAspLysGinLeuLeuProlieValAsn195200205LysGinSerCysArglieSerAsnlieGluThrVallieGluPheGin210215220GinLysAsnAsnArgLeuLeuGlulieThrArgGluPheSerValAsn225230235240AlaGlyValThrThrProValSerThrTyrMetLeuThrAsnSerGlu245250255LeuLeuSerLeulieAsnAspMetProlieThrAsnAspGinLysLys260265270LeuMetSerAsnAsnValGinlieValArgGinGinSerTyrSerlie275280285MetSerlielieLysGluGluValUuAlaTyrValValGinLeuPro290295300LeuTyrGlyVallieAspThrProCysTrpLysLeuHisThrSerPro305310315320LeuCysThrThrAsnThrLysGluGlySerAsnlieCysLeuThrArg325330335ThrAspArgGlyTrpTyrCysAspAsnAlaGlySerValSerPhePhe340345350ProGinAlaGluThrCysLysValGinSerAsnArgValPheCysAsp355360365ThrMetAsnSerLeuThrLeuProSerGluValAsnLeuCysAsnVal370375380AspliePheAsnProLysTyrAspCysLyslieMetThrSerLysThr385390395400AspValSerSerSerVallieThrSerLeuGlyAlalieValSerCys405410415TyrGlyLysThrLysCysThrAlaSerAsnLysAsnArgGlylielie420425430LysThrPheSerAsnGlyCysAspTyrAlaSerAsnLysGlyValAsp435440445ThrValSerValGlyAsnThrLeuTyrTyrValAsnLysGinGluGly450455460LysSerLeuTyrValLysGlyGluProlielieAsnPheTyrAspPro465470475480LeuValPheProSerAspGluPheAspAlaSerlieSerGinValAsn485490495GluLyslieAsnGinSerLeuAlaPhelieArgLysSerAspGluLeu500505510LeuHisHisValAsnAlaGlyLysSerThrThrAsnlieMetlieThr515520525ThrlielielieVallielieVallieLeuLeuSerLeulieAlaVal530535540GlyLeuLeuLeuTyrCysLysAlaArgSerThrProValThrLeuSer545550555560LysAspGinLeuSerGlylieAsnAsnlieAlaPheSerAsn565570<210〉2<211>574<212〉PRT<213>呼吸道合胞病毒<400>2MetGluLeuProlieLeuLysAlaAsnAlalieThrThrlieLeuAla151015AlaValThrPheCysPheAlaSerSerGinAsnlieThrGluGluPhe202530TyrGinSerThrCysSerAlaValSerLysGlyTyrLeuSerAlaLeu354045ArgThrGlyTrpTyrThrSerVallieThrlieGluUuSerAsnlie505560LysGluAsnLysCysAsnGlyThrAspAlaLysValLysLeulieLys65707580GinGluLeuAspLysTyrLysAsnAlaValThrGluLeuGinLeuLeu859095MetGinSerThrProAlaAlaAsnAsnArgAlaArgArgGluLeuPro100105110ArgPheMetAsnTyrThrLeuAsnAsnThrLysLysThrAsnValThr115120125LeuSerLysLysArgLysArgArgPheLeuGlyPheLeuLeuGlyVal130135140GlySerAlalieAlaSerGlyThrAlaValSerLysValLeuHisLeu145150155160GluGlyGluValAsnLyslieLysSerAlaLeuLeuSerThrAsnLys165170175AlaValValSerLeuSerAsnGlyValSerValLeuThrSerLysVal180185190LeuAspLeuLysAsnTyrlieAspLysGinLeuLeuProlieValAsn195200205LysGinSerCysArglieSerAsnlieGluThrVallieGluPheGin210215220GinLysAsnAsnArgLeuLeuGlulieThrArgGluPheSerValAsn225230235240AlaGlyValThrThrProValSerThrTyrMetLeuThrAsnSerGlu245250255LeuLeuSerLeulieAsnAspMetProlieThrAsnAspGinLysLys260265270LeuMetSerAsnAsnValGinlieValArgGinGinSerTyrSerlie275280285MetSerlielieLysGluGluValLeuAlaTyrValValGinLeuPro290295300LeuTyrGlyVallieAspThrProCysTrpLysLeuHisThrSerPro305310315320LeuCysThrThrAsnThrLysGluGlySerAsnlieCysLeuThrArg325330335ThrAspArgGlyTrpTyrCysAspAsnAlaGlySerValSerPhePhe340345350ProGinAlaGluThrCysLysValGinSerAsnArgValPheCysAsp355360365ThrMetAsnSerLeuThrLeuProSerGluValAsnLeuCysAsnVal370375380AspliePheAsnProLysTyrAspCysLyslieMetThrSerLysThr385390395400AspValSerSerSerVallieThrSerLeuGlyAlalieValSerCys405410415TyrGlyLysThrThrCysThrAlaSerAsnLysAsnArgGlylielie420425430LysThrPheSerAsnGlyCysAspTyrAlaSerAsnLysGlyValAsp435440445ThrValSerValGlyAsnThrLeuTyrTyrValAsnLysGluGluGly450455460LysSerLeuTyrValLysGlyGluProlielieAsnPheTyrAspPro465470475480LeuValPheProSerAspGluPheAspAlaSerlieSerGinValAsn485490495GluLyslieAsnGinSerLeuAlaPhelieArgLysSerAspGluLeu500505510LeuHisHisValAsnAlaGlyLysSerThrThrAsnlieMetlieThr515520525ThrlielielieVallielieVallieLeuLeuSerLeulieAlaVal530535540GlyLeuLeuLeuTyrCysLysAlaArgSerThrProValThrLeuSer545550555560LysAspGinLeuSerGlylieAsnAsnlieAlaPheSerAsn565570<210>3〈211〉23<212>DNA<213>人工序列<220><223>反转录引物<400>3atggagttgccaatcctcaaage<2i0>4《211>31<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>4atggatccatggagttgccaatcctcaaagc<210>5<211>522331<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉PCR引物<400>5tag幼ttctagtgatggtgatggtgatgatttgtggtggatttaccagcatt52<210〉6<211〉26<212>腿<213>人工序列<220〉<223〉循环测序引物<400>6tttcttggttttttgttaggtgttgg26<210>7<211>27<212>腿<213〉人工序列<220〉<223>循环测序引物<400〉7tttaacattaccaagtgaaataaatct27<210〉8<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><223>循环测序引物<400〉8tcttcttttccttttcttgcttaatg2权利要求1.一种检测RSV用试剂盒，包括由杂交瘤RSF2-412培育的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体。2.权利要求1所述试剂盒，还包括由杂交瘤RSF1—1565和杂交瘤RSF6—255培育出的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体中的至少其中——禾中。3.权利要求1所述试剂盒，其特征在于用于试剂盒的所述抗RSV单克隆抗体中至少一种用标记物标记。4.权利要求3所述试剂盒，其特征在于被标记物标记的抗RSV单克隆抗体为由杂交瘤RSF1—1565培育出的抗RSV单克隆抗体。5.权利要求1所述试剂盒，其特征在于抗RSV单克隆抗体中至少一种固定在固相上。6.权利要求5所述试剂盒，其特征在于固定在固相上的抗RSV单克隆抗体是选自杂交瘤RSF2—412和杂交瘤RSF6—255培育的抗RSV单克隆抗体中的至少一种。7.—种RSV检测用免疫层析试验用具，至少包括，由杂交瘤RSF2—412培育的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体。8.权利要求7所述免疫层析试验用具，还包括，由杂交瘤RSF1—1565和杂交瘤RSF6—255培育出的识别RS病毒F蛋白质的抗RSV单克隆抗体中的至少一种。9.权利要求7所述免疫层析试验用具，其特征在于具有添加可能含RSV的试样的加样垫，固定抗RSV单克隆抗体的标记附着垫，有固定与标记附着垫所固定的抗体不同的抗RSV单克隆抗体的判断区的层析膜；固定在标记物吸附垫的抗体被标记物标记。10.权利要求9所述免疫层析试验用具，其特征在于被标记物标记的抗体是由杂交瘤RSF1—1565培育出的抗RSV单克隆抗体。11.权利要求9所述免疫层析试验用具，其特征在于标记物为非溶性颗粒状物质。12.权利要求11所述免疫层析试验用具，其特征在于非溶性颗粒状物质为显色合成高分子粒子或胶体金属粒子。13.权利要求9所述免疫层析试验用具，其特征在于固定在判断区的抗RSV单克隆抗体是选自由杂交瘤RSF2—412和杂交瘤RSF6—255培育的抗RSV单克隆抗体中的至少一种。14.一种抗RSV单克隆抗体，其特征在于由从杂交瘤RSF2—412、杂交瘤RSF1—1565和杂交瘤RSF6—255构成的群中选择的至少一种杂交瘤培育，识别RS病毒F蛋白质。全文摘要本发明公开一种RSV检测用试剂盒以及免疫层析试验用具。至少包括由杂交瘤RSF2-412培育的识别RS病毒(RSV)F蛋白的抗RSV单克隆抗体。同时，本发明还公开了一种抗RSV单克隆抗体，由从杂交瘤RSF2-412、杂交瘤RSF1-1565和杂交瘤RSF6-255构成的群中选择的至少一种杂交瘤培育，识别RS病毒F蛋白质。文档编号G01N33/577GK101629959SQ20091016063公开日2010年1月20日申请日期2009年7月17日优先权日2008年7月18日发明者坂口晃司,朝枝步,沖津直哉,长谷川武宏,隈元裕司申请人:希森美康株式会社