专利名称：一种测定维d2果糖酸钙注射液中维生素d2含量的方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2 含量的方法。
背景技术：
维D2果糖酸钙注射液临床上用于缺乏维生素D2所引起的钙质代谢障碍。 对维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量及有关物质进行测定，现为广东省药品
标准，"维丁胶性钙注射液"的质量标准中规定的维生素D2测定法，该法采用经皂化、抽提后
用分光光度法定量。而目前中国药典2005年版有关原料维生素D2含量测定是正相色谱，
复方制剂也需经皂化，抽提后正相色谱定量，方法同样十分繁琐，在测定注射液中维生素D2
的含量时，检验员整天不停操作一天只能检测两批样品，结果误差大，重现性差，采用大量
有机溶剂对环境造成污染，浪费大量人力、物力和时间。
发明内容
本发明的目的是提供一种测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量的方法，是 直接采用反相高效液相色谱法测定维生素D2的含量，结果专属性和线性良好，本发明简 便、准确和快捷，安全且环保。 本发明的技术解决方案是先使待测样品溶解，令待测样品中维生素D2的浓度能 达到检测线性范围，然后用反相高效液相色谱法测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含 采用HPLC法进行含量测定 ①色谱条件色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶C18，流动相是甲醇、乙腈、乙腈/水、 乙腈/甲醇或者是乙腈/异丙醇，检测波长265nm。 ②对照品溶液的制备，取维生素D2适量用流动相溶解成每毫升含12. 5ug溶液，使 达到1. 4-20ug/ml的检测线性范围。 ③供试品溶液的制备，取所述维D2果糖酸钙注射液1毫升，置10毫升量瓶中，加 流动相稀释至刻度并摇匀。 ④分别取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪记录色谱图，按外标 法以峰面积计算所述维D2果糖酸钙注射液中维生素D的含量。
⑤有关物质含量测定 取上述制备的供试品溶液1毫升，置100毫升棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀， 作为维生素D2物质测定的对照液，量取20ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使维生素 D2色谱峰为满量程的20% 。 本发明所述取供试品溶液与对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图 至供试品溶液中维生素D2峰保留时间的两倍。 测定维D2果糖酸钙注射液中有关物质的方法，是供试品溶液的色谱图如显杂峰，
3可将单个杂峰与各杂峰的面积的和与对照溶液主峰面积比计算有关物质含量。
经专属性研究和线性试验，结果专属性和线性良好，线性范围为1. 4ug-20ug/ml r =0. 99998，平均回收率100. 3X，重现性RSDX二 0. 29，稳定性RSDX二 0. 55，最小检测限 为6. 307ng/ml。 本发明的优点是直接采用反相高效液相色谱法测定维生素D2的含量，结果专属 性和线性良好，本发明简便、准确和快捷，安全且环保。
图1本发明含量测定_对照品溶液图谱；
图2本发明含量-供测试品溶液图谱；
图3空白溶液的图谱；
图4有关物质_供试品溶液图谱；
图5有关物质_对照溶液图谱。
具体实施例方式
实施例1 1 、含量测定(HPLC法) 1. 1色谱条件色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶C18，流动相乙腈/甲醇，检测波 长265nm。 1. 2对照品溶液的制备，精密称取维生素D2适量，用流动相溶解和稀释制成每ml 含12. 5ug的溶液，使达到1. 4-20ug/ml的检测线性范围。 1. 3供试品溶液的制备，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度， 摇匀。 1.4分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入液相色谱仪记录色谱图， 按外标法以峰面积计算药品中维生素D2的含量。见图(1)图(2)
2、有关物质测定(主成分自身对照法法) 2. l对照溶液制备精密吸取(1.3)的供试品溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流 动相至刻度，摇匀，作为有关物质测定的对照溶液，精密量取20ul，注入液相色谱仪，调节检 测灵敏度，使主成分色谱峰为满量程的20%。 2. 2取(1. 3)的供试品溶液与对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图
至供试品溶液中维生素D2峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图如显杂峰，可将单个杂
峰与各杂峰的面积的和与对照溶液主峰面积比计算有关物质含量。见图(4)图(5) 2. 3取处方比例的辅料配制空白溶液，同法测定本品在Rt = 2. 7前有辅料峰，在计
算有关物质时应不计。见图(3) 实施例2 1 、含量测定(HPLC法) 1. 1色谱条件色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶C18，流动相乙腈，检测波长 265nm。 1. 2对照品溶液的制备，精密称取维生素D2适量，用流动相溶解和稀释制成每ml含12. 5ug的溶液，使达到1. 4-20ug/ml的检测线性范围。 1. 3供试品溶液的制备，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度， 摇匀。 1.4分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入液相色谱仪记录色谱图， 按外标法以峰面积计算药品中维生素D2的含量。
2、有关物质 2. 1供试品溶液制备，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇 匀。 对照溶液的制备，精密吸取供试溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流动相至刻度，
摇匀。取对照溶液20ul注入液相色谱仪调节检测灵敏度使主成分色谱峰为满量程的20% 。
精密量取供试品溶液和对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至供试品溶液
的维生素D2峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中如显杂峰，将最大杂峰面积与各杂
峰面积的和同对照溶液主峰面积的比计算有关物质含量。 实施例3 1、含量测定(HPLC法) 1. 1色谱条件色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶C18，流动相乙腈/异丙醇，检测 波长265nm。 1. 2对照品溶液的制备，精密称取维生素D2适量，用流动相溶解和稀释制成每ml 含12. 5ug的溶液，使达到1. 4-20ug/ml的检测线性范围。 1. 3供试品溶液的制备，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度， 摇匀。 1.4分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入液相色谱仪记录色谱图， 按外标法以峰面积计算药品中维生素D2的含量。
2、有关物质(主成分自身对照法法) 2. l供试品溶液制备，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇 匀。 对照溶液的制备，精密吸取供试溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流动相至刻度，
摇匀。取对照溶液20ul注入液相色谱仪调节检测灵敏度使主成分色谱峰为满量程的20% 。
精密量取供试品溶液和对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至供试品溶液
的维生素D2峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中如显杂峰，将最大杂峰面积与各杂
峰面积的和同对照试液主峰面积的比计算有关物质含量。 实施例4 1、含量测定(HPLC法) 1. 1色谱条件色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶C18，流动相乙腈/水，检测波长 265nm。 1. 2对照品溶液的制备，精密称取维生素D2适量，用流动相溶解和稀释制成每ml 含12. 5ug的溶液，使达到1. 4-20ug/ml的检测线性范围。 1. 3供试品溶液的制备，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度， 摇匀。
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1.4分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入液相色谱仪记录色谱图， 按外标法以峰面积计算药品中维生素D2的含量。
2、有关物质(主成分自身对照法法) 2. l供试品溶液制备，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇 匀。 对照溶液的制备，精密吸取供试溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流动相至刻度， 摇匀。取对照溶液20ul注入液相色谱仪调节检测灵敏度使主成分色谱峰为满量程的20% 。 精密量取供试品溶液和对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至供试品溶液 的维生素D2峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中如显杂峰，将最大杂峰面积与各杂 峰面积的和同对照试液主峰面积的比计算有关物质含量。
权利要求
一种测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量的方法，其特征是先使待测样品溶解，令待测样品中的维生素D2的浓度能达到12.5ug/ml，使检测浓度在1.4-20ug/ml的线性范围，然后用反相高效液相色谱法测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量采用HPLC法进行含量测定①色谱条件色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶C18，流动相是甲醇、乙腈、乙腈/水、乙腈/甲醇或者是乙腈/异丙醇，检测波长265nm；②对照品溶液的制备，取维生素D2用流动相溶解成每毫升含12.5ug溶液；③供试品溶液的制备，取所述维D2果糖酸钙注射液1毫升，置10毫升量瓶中，加流动相稀释至刻度并摇匀；④分别取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪记录色谱图，按外标法以峰面积计算所述维D2果糖酸钙注射液中维生素D2的含量。
2. 根据权利要求1所述的色谱条件测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量的方 法，其特征是所述待测样品中测定有关物质的方法是对照溶液的制备，取供试品溶液1毫 升，置100毫升棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作对照液，量取20ul，注入液相色谱仪， 调节检测灵敏度，使维生素D2色谱峰为满量程的20%。
3. 根据权利要求2所述的一种测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量的方法，其 特征是取精密量取供试品溶液和对照品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至 供试品溶液的维生素D2峰保留时间的两倍。
4. 根据权利要求3所述的一种测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量的方法，其 特征是供试品溶液的色谱图如显杂峰，可将单个杂峰与各杂峰的面积的和与对照溶液主峰 面积比计算有关物质含量。
全文摘要
本发明涉及一种测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量的方法，用于所述注射液中维生素D2含量的检测，本发明公开了所述注射液中维生素D2含量的测定，是先使待测样品溶解，令待测样品中的维生素D2的浓度能达到检测线性范围，然后用反相高效液相色谱法测定维D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量及有关物质的方法。本发明是直接采用反相高效液相色谱法测定维生素D2，简便、准确和快捷，安全且环保。
文档编号G01N30/02GK101776658SQ20101010362
公开日2010年7月14日 申请日期2010年1月28日 优先权日2010年1月28日
发明者傅红燕, 张旭途, 林宝儿, 黄粤东 申请人:广州白云山天心制药股份有限公司