专利名称：纤维化生物标志物的测定的制作方法
纤维化生物标志物的测定本发明涉及对生物标志物的测定，其可用于纤维化疾病的诊断和其发展的预后，包括指示慢性损伤后发生纤维化之风险的生物标志物。特别地，根据本发明，发现如下所述生物标志物是可用的 与1、II1、IV、V和VI型胶原、弹性蛋白、C-反应蛋白，以及蛋白聚糖，包括双糖链蛋白聚糖(Biglycan)、饰胶蛋白聚糖(Decorin)、多功能蛋白聚糖(Versican)和基底膜蛋白聚糖(Perlecan)的降解片段有关的生物标志物。纤维化疾病(包括表I中列出的那些疾病)是发病和死亡的一个主要原因，例如，在全世界范围内，每年有800，000人死于肝硬化1。表1.不同的纤维化疾病权利要求
1.纤维化的诊断或定量方法，其包括获取患者生物流体样品，进行免疫测定以测量所述样品中天然存在的含新表位的蛋白质片段，以及将在所述患者中所述测量相比于正常水平的升高与纤维化的存在情况或程度相关联，其中所述免疫测定通过包括以下步骤的方法进行 将所述样品中天然存在的蛋白质片段与免疫结合伴侣相接触，所述免疫结合伴侣与由蛋白酶切割蛋白质形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是III型胶原、I型胶原、IV型胶原、V型胶原或VI型胶原、弹性蛋白、双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、波形蛋白或C-反应蛋白，前提是当切割I型胶原形成所述新表位时，所述切割不是在I型胶原被组织蛋白酶K切割的位点处。
2.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合具有N-末端序列KNGETG...的III型胶原片段。
3.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合具有N-末端序列KAFVFP. · · (SEQ ID NOl 167)的 CRP 片段。
4.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割III型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列
5.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割III型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列:
6.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割I型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列
7.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割I型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列:___
8.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割IV型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列
9.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割IV型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列
10.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖或基底膜蛋白聚糖所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列
11.权利要求1中要求的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖或基底膜蛋白聚糖所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列:
12.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割C-反应蛋白所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序___
13.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割C-反应蛋白所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列I
14.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割弹性蛋白所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列 弹性蛋白^^
15.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割弹性蛋白所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列:
16.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割V型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列
17.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割V型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列___
18.权利要求I的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割VI型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列
19.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割VI型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列___
20.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割波形蛋白所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列;___
21.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割波形蛋白所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列:__
22.权利要求1的方法，前提是当通过切割I型胶原形成所述新表位时，所述切割不在I型胶原被胰蛋白酶切割的位置。
23.测量包含新表位的蛋白质片段的免疫测定方法，所述蛋白质片段在体液样品中天然存在，其中所述免疫测定通过包括如下步骤的方法进行:衍尸/Tidi忏热仔仕观/I枚勺兄坟闭甘1干1日相按删，干1日勺苗白酶切割蛋白质形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、弹性蛋白、I型胶原、IV型胶原、V型胶原或VI型胶原、CRP或波形蛋白，前提是当通过切割I型胶原形成所述新表位时，所述切割不在I型胶原被组·织蛋白酶K切割的位点处。
全文摘要
对纤维化进行诊断或定量的方法，所述方法包括进行免疫测定来测量生物流体样品中天然存在的包含新表位的蛋白质片段，以及将所述患者中所述测量相对于正常水平的升高与纤维化的存在或程度相关联。通过包括如下步骤的方法来进行所述免疫测定将所述样品中天然存在的蛋白质片段与免疫结合伴侣相接触，所述免疫结合伴侣与蛋白酶切割蛋白质形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是III型胶原、I型胶原、IV型胶原、V型胶原或VI型胶原、弹性蛋白、双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、波形蛋白或C-反应蛋白。
文档编号G01N33/68GK103238071SQ201080014281
公开日2013年8月7日 申请日期2010年3月29日 优先权日2009年3月30日
发明者桑内·S·韦达尔, 莫滕·A·卡尔斯达尔, 戴安娜·J·利明, 娜塔莎·巴拉斯丘克, 海伦妮·斯克若-阿尔基尔, 安东尼奥·塞戈维亚-西尔韦斯特雷, 埃夫斯塔西奥斯·瓦西利亚迪斯 申请人:北欧生物科技公司, 诺瓦提斯公司