专利名称：系统性红斑狼疮(sle)的诊断的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于诊断受试者的系统性红斑狼疮(SLE)的方法和试剂盒。尤其是，本发明涉及可用于诊断受试者的SLE的特异性抗体谱(specific antibody profile)。
背景技术：
系统性红斑狼疮(SLE )是自体免疫病因学(auto immune etiology)的炎症性紊乱，主要发生在年轻女性中。SLE能影响许多的身体器官系统，包括肾、皮肤、关节、神经系统、浆膜、血细胞和脉管。虽然不清楚SLE的具体诱因，但许多因素与疾病的发展有关，包括基因、种族、激素和环境因素。SLE病程通常是慢性的、复发性的和无法预测的。未经治疗的SLE能够致命，因为其从攻击皮肤和关节发展到内脏，包括肺、心和肾，因此进行SLE发展的早期和准确诊断和 /或风险评估是尤其关键的。SLE主要出现一系列的发作(flare-ups)，伴随轻微或没有疾病现象的间隔时期。由尿中的蛋白量测定的肾损害是与SLE的致病性有关的损害最严重的区域之一,并占该疾病的死亡率和发病率的至少50%。SLE的特点是在血液中产生异常的自身抗体。在不同患者中已发现超过100种的不同的自身分子(self-molecules)与自身抗体(autoantibodies)结合(Sherer et al.,2004, Semin. Arthritis. Rheum. 34:501-37),形成在血液中循环并最终沉积在组织中的免疫复合物。这些免疫复合物沉积引发慢性炎症，并最终引起组织损伤。自身抗体还有直接的致病作用，促发溶血性贫血和血小板减少。通常,可以基于由美国风湿病学会(ACR)定义的^ 个标准(criteria)来诊断SLE。这些标准包括面颊疹、盘状红斑、光过敏、口腔溃疡、关节炎、浆膜炎、肾功能异常、神经疾病(neurologic disorder)、血液疾病(hematologic disorder)(例如白细胞减少症、淋巴球减少症、溶血性贫血或血小板减少)、免疫学疾病和抗核抗体(ANA) (Tan etal.，1997，Arthritis Rheum 1997,40:1725)。如果达到4^一个标准中的至少四个，可以临床诊断受试者患有SLE。然而，即使在出现少于四个标准时，SLE仍然是可能的。尽管针对dsDNA、磷脂以及Sm蛋白的抗核抗体和自身抗体是用于诊断SLE的十一个标准之一 (Tan et al. , 1997, Arthritis Rheum 1997，40:1725),但经诊断患有 SLE 的许多患者却缺乏这些自身抗体,特别是在他们处于临床缓解(clinical remission)时。临床治疗复杂的自身免疫性疾病(如SLE)的最艰巨的挑战之一是患者的疾病的准确和早期鉴别。此外，没有鉴别出使临床医师或其他人能够准确地确定SLE的病理生理表现、临床活动、对治疗的响应或预后的可靠性诊断标记。杭原芯片抗原微阵列最近被开发成用于高通量鉴定免疫响应的工具(Robinson etal. , 2002, Nat Med 8，295-301)，并且已用于在疫苗接种和自身免疫疾病中分析免疫响应(Robinson et al. , 2002;Robinson et al. , 2003, Nat Biotechnol. 21，1033-9;Quintanaet al. , 2004;Kanter et al.，2006，Nat Med 12,138-43)。已假设，在健康和疾病中，多反应性的模式可能比单个抗原-抗体关系更具启迪作用(Quintana et al. , 2006, Lupus15，428-30),如先前对老鼠(Quintana et al. , 2004; Quintana et al. , 2001, J Autoimmun17，191-7et al. , 2007, J Clin Invest 117，712-8;Quintana et al. , 2003, JAutoimmun 21,65-75)的自体免疫组(repertoires)的分析。因此，自身抗体组有提供对疾病的发病机制的新理解和用作疾病过程的免疫生物标记(Cohen，2007，Nat RevImmunol. 7, 569-74)的潜力。本发明一些发明人的PCT公开No. WO 02/08755，涉及用于聚集(cluster)而由此鉴定出与来自需要诊断疾病或监控治疗的患者受试者的血清中未确定的免疫球蛋白有反应性的预定义的抗原。755公开内容披露了抗原阵列的应用，其用于确定与来自患有各种疾病的受试者中的血清的免疫球蛋白有反应性的抗原。进一步地公开了诊断方法和可用于这些方法的系统，采用以下步骤聚集多种抗原的抗原子集合，所述抗原子集合与来自存在免疫系统损伤并患有疾病的多个患者的多种抗体有反应性，然后将受试者的这些抗体与获得的聚集簇(cluster)结合或分开。
对于本发明的一些发明人，美国专利公开NO. 2005/0260770公开了抗原阵列系统以及其诊断应用。该申请提供诊断受试者中的免疫疾病，尤其是I型糖尿病，或对此病的易患性的方法，包括确定该受试者的免疫球蛋白与抗原探针集合的每种抗原探针特异性结合的能力。对于本发明的一些发明人，PCT公开No. WO 10/128506涉及鉴定个体中的心血管疾病的发展的方法，用于鉴别个体中急性心肌梗塞(AMI)过程的发展。现有技术中没有公开可以特异、可靠、准确、并有辨别力地诊断SLE的分析方法。这样有辨别力的分析在鉴定患者中SLE的存在或确定对发展该疾病的易患性(敏感性)以及设计(定制，tailoring)对于每个患者的适当治疗方法中将是高度有价值的。对于可用于诊断受试者的SLE的改进的诊断方法和试剂盒仍然存在需求。
发明内容
本发明提供用于诊断受试者的系统性红斑狼疮(SLE)的方法和试剂盒、用于实施这样的诊断的抗原探针阵列、以及用于生成这样的阵列的抗原探针集合(antigen probesets)。本发明部分基于在利用抗原阵列测试SLE患者的抗体反应性时获得的意外结果。该分析导致鉴别出独特的自身抗体反应性模式。意外地，独特的自身抗体模式持续独立于疾病活动性，并且还存在于有长期临床缓解的受试者中(例如有肾脏缓解的受试者)。有利地，反应性模式显著地显示出对SLE的高灵敏度和高特异性。而且，过后发现存在SLE抗体模式的健康对照受试者发展为临床SLE。因此，本发明提供与SLE有关的独特抗原自身抗体反应性模式。尽管确定若干单个抗原(例如透明质酸)足以独立地充分诊断SLE，这些抗原的特定组合(在本文下面表I中详细说明)在识别SLE患者和对照受试者中比单独每种抗原更准确和可靠。表I-区别SLE和健康对照的抗原
权利要求
1.一种诊断受试者中的系统性红斑狼疮(SLE)的方法，所述方法包括 (i)测定从所述受试者获得的样品中的IgG和IgM抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的反应性IGFBP1、CD99、透明质酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MPO、心磷脂、胶原III、胶原 IV、肌动蛋白、BMP4、CMV、F50、HGF、HRP、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 FHIT，从而确定所述样品对所述多种抗原的反应性模式；以及 (ii)将所述样品的反应性模式与对照反应性模式进行比较； 其中，从所述受试者获得的所述样品的反应性模式与对照样品的反应性模式相比的显著性差异是所述受试者患有SLE的指征。
2.根据权利要求I所述的方法，其中，所述多种抗原包括至少三种抗原。
3.根据权利要求I所述的方法，其中，所述多种抗原包括至少四种抗原。
4.根据权利要求I所述的方法，其中，所述多种抗原包括至少五种抗原。
5.根据权利要求I所述的方法，其中，所述多种抗原包括至少六种抗原。
6.根据权利要求I所述的方法，其中，所述多种抗原包括至少七种抗原。
7.根据权利要求I所述的方法，其中，所述多种抗原包括至少八种抗原。
8.根据权利要求I所述的方法，其中，所述多种抗原由IGFBP1、CD99、透明质酸、EBV,ssDNA、dsDNA、MP0、心磷脂和胶原III组成。
9.根据权利要求I所述的方法，包括测定所述样品中的多种IgG抗体和多种IgM抗体对所述多种抗原的反应性。
10.根据权利要求I所述的方法，包括测定从所述受试者获得的样品中的IgG抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的反应性透明质酸、BMP4、EBV、ssDNA、dsDNA、F50、HGF和 HSP60pl8。
11.根据权利要求10所述的方法，包括测定从所述受试者获得的样品中的IgG抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的反应性透明质酸、EBV、ssDNA和dsDNA。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中，从所述受试者获得的所述样品的反应性模式与对照样品的反应性模式相比的显著上调是所述受试者患有SLE的指征。
13.根据权利要求I所述的方法，包括测定从所述受试者获得的样品中IgM抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的反应性⑶99、IGFBPU MP0、心磷脂、胶原III、胶原IV、肌动蛋白、CMV、辣根过氧化物、RV、S100A4、CITEDl和Π1ΙΤ。
14.根据权利要求13所述的方法，包括测定从所述受试者获得的样品中IgM抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的反应性⑶99、IGFBPl、MP0、心磷脂和胶原III。
15.根据权利要求13所述的方法，包括测定从所述受试者获得的样品中IgM抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的反应性⑶99、IGFBPUMPO和心磷脂。
16.根据权利要求13-15中任一项所述的方法，其中，从所述受试者获得的所述样品的反应性模式与对照样品的反应性模式相比的显著下调是所述受试者患有SLE的指征。
17.根据权利要求13所述的方法，包括测定从所述受试者获得的样品中IgM抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的反应性CD99、MP0和胶原III。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，从所述受试者获得的所述样品的反应性模式与对照样品的反应性模式相比的显著下调是所述受试者患有肾缓解中的SLE的指征。
19.一种在受试者中诊断SLE的方法，所述方法包括(i)测定从所述受试者获得的样品中的抗体对选自由以下所组成的组中的多种抗原的发应性IGFBP1、⑶99、透明质酸、MPO、和胶原III，从而确定所述样品对所述多种抗原的反应性模式，以及 (ii)将所述样品的反应性模式与对照反应性模式进行比较，其中，从所述受试者获得的所述样品的反应性模式与所述对照反应性模式相比的显著性差异是所述受试者患有SLE的指征。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，测定样品中的抗体的反应性包括测定所述样品中的I gG和I gM抗体的反应性。
21.根据权利要求19所述的方法，其中，所述多种抗原进一步包括选自dsDNA、ssDNA、EBV和心磷脂中的至少一种抗原。
22.根据权利要求I或19中任一项所述的方法，其中，所述样品是血清样品。
23.根据权利要求I或19中任一项所述的方法，其中，所述对照选自由来自至少一个健康个体的样品、来自一组健康个体的一组对照样品、以及来自对照个体的储存的成组数据所组成的组。
24.根据权利要求I或19中任一项所述的方法，进一步包括在测定所述样品中抗体的反应性之前以1:10稀释所述样品。
25.根据权利要求I或19中任一项所述的方法，其中，所述多种抗原以抗原阵列的形式使用。
26.一种用于诊断受试者的SLE的试剂盒，包括选自由以下所组成的组中的多种抗原IGFBP1、CD99、透明质酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MP0、心磷脂、胶原III、胶原IV、肌动蛋白、BMP4、CMV、F50、HGF、辣根过氧化物、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 ΠΠΤ。
27.根据权利要求26所述的试剂盒，其中，所述试剂盒是抗原阵列的形式。
28.根据权利要求26所述的试剂盒，进一步包括用于测定样品中抗体对所述多种抗原的反应性的装置。
29.根据权利要求26所述的试剂盒，进一步包括用于比较不同样品中抗体对所述多种抗原的反应性模式的装置。
30.一种抗原探针集合，包括选自由以下所组成的组中的多种抗原探针IGFBP1、CD99、透明质酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MPO、心磷脂、胶原III、胶原IV、肌动蛋白、BMP4、CMV,F50、HGF、HRP、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 FHIT。
31.一种包括任何权利要求30所述的抗原探针集合的制品。
32.抗原探针集合在制备用于诊断SLE的诊断组合物中的应用，所述抗原探针集合包括选自由以下所组成的组中的多种抗原IGFBP1、⑶99、透明质酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MPO、IGFBP1、心磷脂、胶原III、胶原IV、肌动蛋白、BMP4、CMV、F50、HGF、辣根过氧化物、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 FHIT0
33.根据权利要求32所述的应用，其中所述诊断组合物用于测定样品中抗体的反应性，从而确定所述样品对所述多种抗原的反应性模式，其中所述样品的反应性模式与对照样品的反应性模式相比的显著性差异是SLE的指征。
全文摘要
本发明涉及用于诊断受试者的系统性红斑狼疮(SLE)的方法和试剂盒。尤其是，本发明涉及可用于诊断受试者的SLE的特异性抗体谱。
文档编号G01N33/564GK102762983SQ201180009356
公开日2012年10月31日 申请日期2011年2月13日 优先权日2010年2月12日
发明者伊伦·R·柯亨, 伊泰·法塔尔, 艾坦·多马尼, 诺姆·申塔尔 申请人:特尔汗什莫尔医学基础设施研究和服务公司, 耶达研究及发展有限公司