一种系统性红斑狼疮的诊断标志的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及疾病的诊断技术领域，尤其涉及一种系统性红斑狼疮的诊断标志及其 应用。
【背景技术】
[0002] 系统性红斑狼疮（SLE)是一种弥漫性、全身性自身免疫病。它有多种临床症状，会 牵涉到皮肤粘膜、骨骼肌肉、肾脏及中枢神经系统性疾病，有时还会引发肺、心脏等多个其 他器官和系统功能紊乱，SLE好发于青年女性，发病高峰为15~40岁，男女发病比例为1 :9 左右，尽管研究发现其发病有一定的家庭聚集倾向，但是其发病机制并非单一的遗传因素。 目前系统性红斑狼疮的发病机制尚不明确。
[0003] 研究发现，在系统性红斑狼疮患者的血清中，可检测到多种自身抗体和免疫学异 常。目前对于系统性红斑狼疮的检测也通常借助于一些辅助检查，如常规检查中的血常规、 尿常规等以及免疫系统的检查和自身抗体的检查可以做出诊断。目前参照的标准仍然是 1997年美国风湿病学会修订的的系统性红斑狼疮分类标准。但是，该标准对早期、不典型病 例容易漏诊，因此继续发现一种新的诊断标志物来作为这种疾病早期诊断和后期治疗的指 导。
[0004] 蛋白质糖基化修饰是一种最普遍和最多变的翻译后修饰，是特异糖链在细胞内质 网中添加到蛋白质上形成寡糖链的过程，具有酶定向和位点特异性。根据与蛋白质部分连 接方式的不同，蛋白质糖基化修饰分为N-糖基化和0-糖基化两种形式。N-糖链一般分为 高甘露糖型、复杂型和杂合型三种。多年来，人们已对多种蛋白的糖基化修饰进行了广泛深 入的研究，并清楚地认识到蛋白糖基化修饰在很多疾病的发生发展中扮演着重要角色，例 如肝细胞癌中甲胎蛋白的高岩藻糖基化等。
[0005] 免疫球蛋白是可溶性血清糖蛋白，可为高等脊椎动物提供针对已暴露抗原的长期 保护。IgG是血清中含量最多的免疫球蛋白种类，占人血清免疫球蛋白的80%，是再次免疫 应答后形成抗体的主要组分，在机体中发挥重要作用。糖基化在免疫球蛋白的结构和功能 中扮演着重要角色。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提出血清抗体中高甘露糖型N糖链水平可作为系统性红斑狼 疮（SLE)的诊断标志，并具体提出用于特异性检测该诊断标志物的试剂在制备用于系统性 红斑狼疮的诊断和/或预后评估的诊断工具中的应用；本发明所提出的系统性红斑狼疮的 诊断标志的水平与系统性红斑狼疮的发生密切相关，可用于系统性红斑狼疮的早期诊断和 /或预后评估，进而用于指导系统性红斑狼疮的治疗。
[0007] 具体地，一方面，本发明提供了一种特异性检测血清抗体中高甘露糖型N糖链水 平的试剂在制备用于系统性红斑狼疮的诊断和/或预后评估的诊断工具中的应用。
[0008] 上述应用中，作为优选，所述血清抗体为血清IgG型抗体。
[0009] 作为优选，所述高甘露糖型N糖链为结构式分别如I、II和III所示糖链的任意一 种或几种的混合物；
[0010] 其中，结构式I为：
[0011] Asn-GlcNAc-GlcNAc-Man-(Man-Man)Man-Man-Man ；
[0012] 结构式II为：
[0013] Asn-GlcNAc-GlcNAc-Man- (Man) 2 (Man) 2G1cNAc (Man) 3 (Man) 2 ；
[0014] 结构式III为：
[0015] Asn-GlcNAc (Fuc) -GlcNAc-Man- (Man) 4 (GlcNAc-Gal) (Man-GlcNAc-Gal)。
[0016] 上述结构式中，Asn表示天冬氨酸，GlcNAc表示葡萄糖胺，Man表示甘露糖，Gal表 示半乳糖，Fuc表示岩藻糖。
[0017] 作为优选，通过免疫测定法检测血清抗体中高甘露糖型N糖链的水平；优选地， 所述免疫测定法为酶免疫测定法、免疫比浊测定法、乳胶免疫凝集法、电化学发光法或荧光 法；更优选地，所述免疫测定法为酶联免疫吸附测定法。
[0018] 作为优选，所述特异性检测血清抗体中高甘露糖型N糖链水平的试剂包括特异性 识别高甘露糖型N糖链的抗体或配体。
[0019] 更优选地，所述抗体为单克隆抗体或抗原结合片段；最优选地，所述抗体为鼠抗人 单克隆抗体。
[0020] 所述诊断工具为诊断试剂、试剂盒、蛋白芯片或免疫检测试纸。
[0021] 作为优选,通过质谱法检测血清抗体中高甘露糖型N糖链的相对丰度；这种糖链 的鉴定方法需要借助质谱仪。
[0022] 上述应用中，通过检测待测个体的血清抗体中高甘露糖型N糖链的水平，将其与 相同检测条件下的正常个体的血清抗体中高甘露糖型N糖链水平相比的增高，诊断为患有 系统性红斑狼疮。
[0023] 另一方面，本发明提供了一种系统性红斑狼疮的诊断工具，该诊断工具包括特异 性检测血清抗体中高甘露糖型N糖链水平的试剂；
[0024] 优选地，所述诊断工具为诊断试剂、试剂盒、蛋白芯片或免疫检测试纸；
[0025] 优选地，所述特异性检测血清抗体中高甘露糖型N糖链水平的试剂为特异性识别 高甘露糖型N糖链的抗体或配体。
[0026] 本发明发明人基于这样一个发现，即血清抗体中高甘露糖型N糖链的高水平与系 统性红斑狼疮的发生有关,提出了血清抗体中高甘露糖型N糖链水平可作为系统性红斑狼 疮的诊断标志，用于系统性红斑狼疮的早期诊断和/或预后评估，进而用于指导系统性红 斑狼疮的治疗。
【附图说明】
[0027] 图1是质谱检测正常个体和SLE病人血清抗体的N糖链；其中，A为正常个体血清 抗体N糖链的一级质谱图，B为SLE病人血清抗体的N糖链一级质谱图。
[0028] 图2是图1中m/z909. 5峰所对应的糖链的二级质谱分析图。
[0029] 图3是实施例1中所述三种高甘露糖型N糖链在10个SLE病人和10个正常对照 的相对丰度比较；**表示P〈〇. 001，***表示P〈〇. 005。
[0030] 图4是质谱检测正常小鼠和SLE小鼠血清抗体的N糖链；其中，A为正常小鼠血清 抗体N糖链的一级质谱图，B为SLE小鼠血清抗体N糖链的一级质谱图。
【具体实施方式】
[0031] 下面通过具体实施例来进一步说明本发明的技术方案，这些实施例仅用于说明的 目的，而不以任何方式限制本发明的范围。
[0032] 实施例1
[0033] 使用PNGase F酶试剂盒（IBL，德国），按照厂商提供的试剂盒说明书，提取血清抗 体N糖链，并对血清抗体N糖链进行一级及多级质谱分析，其过程如下：
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