专利名称：中药材中邻苯二甲二丁酯的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种在中药材中邻苯二甲酸二丁酯采用气相色谱的检测方法，属于分析测试领域。
背景技术：
邻苯二甲酸酯类(PAEs)是增塑剂的主体。因增大产品的可塑性和柔韧性而广泛地应用于日常生活中。过去一直认为PAEs毒性低，但近年来对动物毒性试验的研究结果表明，PAEs具有生殖毒性、胚胎毒性和遗传毒性等，尤以人体生殖功能异常最为引人注目。由于PAEs在环境中残留期较长，生物对其有富集作用，我国已将PAEs家族中的邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)和邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)确定为环境优先控制污染物。《国家饮用水标准》(GB5749-2006)要求 DEHP < O. 008mg/L，DBP < O. 003mg/L，DEP < O. 3mg/L。目前，国内外对食品塑料包装材料中PAEs分析比较重视，研究的较多，主要以提高检测效率，其中前处理技术主要有固相萃取(SPE)净化、超临界萃取(SFE)，凝胶色谱(GPC)、加速溶剂萃取(ASE)、净化体积阻滞色谱(SEC);测试技术主要采用气相色谱法 (GC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)等。但在中药材化学成分研究中偶见酞酸酯类环境激素的报道，对其来源及限量要求未见阐述。人们长期服用含有此类环境激素的食品或中药材，可能构成潜在的远期危害，由于药品的服务对象还不同于食品，所以更应该引起重视。由于邻苯二甲酸酯类物质具有较高极性、低挥发及不活泼特性，且在模拟迁移介质中的含量较低，给HPLC、LC-MS、GC和GC/MS带来难度；另外，GC-MS和LC/MS，设备昂贵， 成本高，很难在基层实验室推广应用。因此，建立适于基层实验室药材中PAEs的测定方法是非常必要的。本发明采用 GC-FID测定中药材中的DBP，以满足基层实验室检测的需求，扩大样本量，探明其来源及解决办法，及早制定限量标准。本发明利用GC方法的灵敏度高，分离效果好，定量准确，但为克服邻苯二甲酸酯类物质的缺点，本法对样品采用超声辅助提取，进行二次净化的办法，即采用二氯甲烷-水相液液分配净化以除去水溶性杂质，后再经ODS-C18固相柱除去少部分脂溶性杂质的净化方法，并保证了本方法具有良好的精密度和重现性。目前食品包装袋中邻苯二甲酸酯的检测方法及其相关研究较多，而对中药材中邻苯二甲酸二丁酯的研究未见报道。
发明内容
为了检测在中药材中常见增塑剂污染状况，本发明提供一种涉及邻苯二甲酸二丁酯在中药材中采用气相色谱检测方法。该方法简捷、快速，准确、灵敏，检测限和适用范围完全满足目前检测限量的要求。具体检测步骤如下(I)样品溶液的制备
称取粉碎后中药材5.00g(40目)，放入IOOmL圆底烧瓶中后加入二氯甲烷浸泡
0.5h，超声振荡15-35min，然后在60°C下回流，lh，提取2次，合并提取液，浓缩至原体积的 1/4 1/6，加水分散萃取，萃取液经无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩。吸取ImL样品萃取液过预先用二氯甲烷活化过的500mg/3mL0DS固相萃取柱进行浓缩富集，上样完毕后，用3mL 二氯甲烷洗脱，洗脱速率为lmL/min，用IOmL氮吹管收集洗脱液，氮吹浓缩至lmL，过O. 45 μ m 的一次性针筒式微膜过滤器，气相色谱直接进样分析。二氯甲烷体积的加入根据药材的性质，以药材应完全浸入溶剂中为准。⑵色谱条件色谱柱为HP-5，进样口温度为270-290°C，FID温度为290-310°C。柱温采用程序升温，柱箱初始温度150°C保持3. Omin,以20. (TC /min升温到200°C，保持30. Omin。载气=N2，流量为I. 8-2. 2mL/min ;进样方式不分流进样，进样体积为I. Oy L。(3)邻苯二甲酸二丁酯储备液的制备精密称取DBP，至IOmL容量瓶，用二氯甲烷定容，置于冰箱中4°C保存备用。标准储备液可以保存6个月。(4)标准曲线的制备以二氯甲烷为溶剂，采用逐级稀释的方法配制标准使用液，浓度系列为I. OOOO
10.OOOOmg/mL。在选定的色谱条件下，进样I. O μ L，分别以DBP的色谱峰面积⑴与浓度 (X)作标准曲线。标准曲线回归方程为y = I860. 3x+722. 3，相关系数为O. 99993。(5)定性分析按照(I)确定的分析条件，对DBP标准溶液进样测定，以保留时间作为定性依据。(6)精密度试验将同一浓度的标准溶液按(I)的测定方法重复测定5次。结果RSD = I. 21%, η =5，表明本实验使用的仪器精密性良好。(7)稳定性试验取样品溶液，分别于配制后1，3，5，7，9，12h，按上述方法测定DBP的含量，其RSD为
1.47%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。(8)重复性试验取样品溶液，按照(3)的制备方法操作，平行制备5份供试品溶液，依次测定DBP 的含量，其RSD为1.53%。(9)加样回收率试验为了验证方法的准确度，对样品进行了高、中、低三个不同水平的标准添加回收实验，每一水平分别做三份平行实验，计算平均回收率和标准偏差。称取9份(3)中的样品，按照添加水平为的5. 00、10. 00、15. 00mg/L三个浓度水平进行加标回收实验，按照(3)所述前处理方法进行处理，每个浓度平行测定三次计算含量， 其平均回收率为103. 12 %，RSD为6. 73 %，η = 9。表明该方法具有较高的准确度和精密度。试验中应避免使用可能含有环境激素的塑料制品，全部试验用玻璃器皿，试验前对所用试剂、试验用水、玻璃仪器等必须进行净化处理，所用的玻璃器皿需要用洗液超声清洗，再用自来水、重蒸馏水清洗，然后用重蒸的二氯甲烷清洗两次，在玻璃仪器350°C焙烘
2.Oh。并且测定试剂进行空白校正。
本发明的优点为(I)本文以中药材为研究对象，采用GC技术，对有可能造成中药污染的邻苯二甲酸二丁酯(DBP)增塑剂进行了定性和定量分析，该方法的灵敏度高、准确度和精密度好、专属性及确证性可靠。目前国内未见有关中药材中邻苯二甲酸二丁酯(DBP)检测的报道。(2)本方法采用了对提取样品进行二次净化的办法，即采用二氯甲烷-水相液液分配净化以除去水溶性杂质后，再经ODS-C18固相柱除去少部分油脂和色素的净化方法，提高了检测的准确度，保证了本方法具有良好的精密度和重现性。(3)中药材中存在的邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的来源，可以认为是中药材二次污染所致，如栽培过程中所使用的土壤已经被污染，或者在运输储存过程中被塑料制品所污染。由于邻苯二甲酸酯类具有一般毒性和特殊毒性，所以对中药材的栽培、运输和储存需提出更高的要求。人群长期服用含有此类环境激素的食品或药品可能构成潜在的远期危害。 因此，加强药材中环境激素DBP的监测和预警具有一定的实用性，是十分迫切的。
具体实施例方式实施例II样品溶液的制备称取粉碎后玉米须柱头和花柱各5. OOg (40目)，放入IOOmL圆底烧瓶中后加入二氯甲烷浸泡O. 5h，超声振荡15-35min，然后在60°C下回流lh，提取2次，合并提取液，浓缩至原体积的1/4 1/6，加水分散萃取，萃取液经无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩。吸取ImL样品萃取液过预先用二氯甲烷活化过的500mg/3mL0DS固相萃取柱进行浓缩富集，上样完毕后， 用3mL 二氯甲烷洗脱，洗脱速率为lmL/min，用IOmL氮吹管收集洗脱液，氮吹浓缩至lmL，过 O. 45 μ m的一次性针筒式微膜过滤器，气相色谱直接进样分析。2色谱条件进样口温度为280°C，FID温度为300°C。柱温采用程序升温，柱箱初始温度150°C 保持3. Omin,以20. (TC /min升温到200。。，保持30. Omin0载气氮气，流量为2. OmL/min ； 进样方式不分流进样，进样体积为I. Ομ L。3样品测定结果玉米须花柱样品含DBP :玉米须在生长过程中没有裸露在外颜色呈浅灰色的部分 42. 06mg/kg ;玉米须柱头样品含DBP :玉米须在生长过程中裸露在外颜色程棕灰色的部位 15. 09mg/kg ;玉米须中DBP的含量在花柱中最多，柱头比花柱少。实施例2I样品溶液的制备称取粉碎后两头尖5. 00g(40目)，放入IOOmL圆底烧瓶中后加入二氯甲烷浸泡
O.5h，超声振荡15-35min，然后在60°C下回流lh，提取2次，合并提取液，浓缩至原体积的 1/4 1/6，加水分散萃取，萃取液经无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩。吸取ImL样品萃取液过预先用二氯甲烷活化过的500mg/3mL0DS固相萃取柱进行浓缩富集，上样完毕后，用3mL 二氯甲烷洗脱，洗脱速率为lmL/min，用IOmL氮吹管收集洗脱液，氮吹浓缩至lmL，过O. 45 μ m 的一次性针筒式微膜过滤器，气相色谱直接进样分析。2色谱条件
进样口温度为280°C，FID温度为300°C。柱温采用程序升温，柱箱初始温度150°C 保持3. Omin,以20. (TC /min升温到200。。，保持30. Omin0载气氮气，流量为2. OmL/min ； 进样方式不分流进样，进样体积为I. Ομ L。3样品测定结果两头尖样品含DBP :40. 14mg/kg以上实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，本领域的普通技术人员应当知道，可以对本发明的检测方法进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
权利要求
1.气相色谱法测定中药材中邻苯二甲酸二丁酯，包括如下步骤称取粉碎后中药材5. OOg(40目)，放入IOOmL圆底烧瓶中后加入二氯甲烷浸泡O. 5h， 超声振荡15-35min，然后在60°C下回流lh，提取2次，合并提取液，浓缩至原体积的1/4 1/6，加水分散萃取，萃取液经无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩。吸取ImL样品萃取液过预先用二氯甲烷活化过的500mg/3mL0DS固相萃取柱进行浓缩富集，上样完毕后，用3mL 二氯甲烷洗脱，洗脱速率为lmL/min,用IOmL氮吹管收集洗脱液,氮吹浓缩至ImL,过O. 45 μ m的一次性针筒式微膜过滤器，气相色谱直接进样分析。气相色谱色谱柱为HP-5，进样口温度为270-290°C，FID温度为290-310°C。柱温采用程序升温，柱箱初始温度150°C保持3. Omin，以20. (TC /min升温到200°C，保持30. Omin。 载气=N2，流量为I. 8-2. 2mL/min ;进样方式不分流进样，进样体积为I. Oy L。
2.根据权利要求I所述的邻苯二甲酸二丁酯的检测方法，其特征在于，待检样品为中药材。
3.根据权利要求I所述的邻苯二甲酸二丁酯的检测方法，其特征在于，提取、萃取、洗脱和含测溶剂为二氯甲烷。
4.根据权利要求I所述的邻苯二甲酸二丁酯的方法，其特征在于，二氯甲烷浸泡后0.5h，超声振荡15-35min，然后在60°C下回流lh，提取2次，浓缩至原体积的1/4 1/6。
5.吸取ImL样品萃取液过预先用二氯甲烷活化过的500mg/3mL固相萃取柱进行浓缩富集，上样完毕后，用3mL 二氯甲烷洗脱，洗脱速率为lmL/min，用IOmL氮吹管收集洗脱液，氮吹浓缩至lmL，过O. 45 μ m的一次性针筒式微膜过滤器，气相色谱直接进样分析。
6.根据权利要求I所述的所述的邻苯二甲酸二丁酯的检测方法，色谱柱为HP-5，检测器为氢火焰离子化检测器。
7.根据权利要求I所述的所述的邻苯二甲酸二丁酯的检测方法，载气为N2，流量为1.8-2. 2mL/min。
全文摘要
本发明涉及一种中药材中环境激素邻苯二甲二丁酯的检测方法，属分析检测技术领域，主要内容如下本发明对中药材采用超声辅助提取，并进行二次净化的办法，即采用二氯甲烷-水相液液分配纯化以除去水溶性杂质，再经ODS-C18固相柱除去脂溶性的杂质的纯化方法，利用GC-FID灵敏度高，分离效果好，定量准确的优点，保证了本发明的准确度、精密度和重现性。人们长期服用含有此类环境激素的食品或中药材，可能构成潜在的远期危害。因此，对中药材的栽培、运输和储存需提出更高的要求，加强药材中DBP的监测和预警具有一定的实用性，是非常有意义的。本检测方法能够准确检测中药材中DBP的含量，且成本低、简便和快速。
文档编号G01N30/88GK102608243SQ201210039969
公开日2012年7月25日 申请日期2012年2月22日 优先权日2012年2月22日
发明者周鸿立, 张扬, 张艳, 郭向明 申请人:吉林化工学院