专利名称：一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及其方法
技术领域：
本发明属于食品检测技术领域，特别是涉及ー种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及其方法。
背景技术：
目前，紫苏叶是一种药食同源的产品，在人们的生活中具有特殊的地位。作为ー种常见的中草药，它可起到作为解表散寒，行气和胃的疗效，主要用于风寒感冒，咳嗽呕恶，妊娠呕吐，鱼蟹中毒；作为稀特菜品种之一，由于紫苏叶主要用于卷生鱼片蘸调料吃，因此对其产品的卫生和农药残留要求非常严格。紫苏叶中常见农药残留量检测显得非常迫切。紫苏生产常用的杀菌剂主要有苯醚甲环唑、嘧菌酷、甲基托布津、腐霉利等农药。为了提高紫苏叶中常用杀菌剂残留量检测的效率，节约检测成本，促进紫苏叶进出口贸易 的健康发展，保护消费者的健康，紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及检测方法成为急需 解决的重要经济和社会问题。
发明内容
本发明为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及其方法。本发明的目的之ー是提供ー种具有价格便宜，容易获得，且用量小，样品处理无需用固相萃取小柱进行样品浄化，检测成本低；试剂盒操作方便舒适，适用于大量干紫苏叶样品的处理，样品前处理的效率高，便于携带和储存等特点的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处
理试剂盒。本发明检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒所采取的技术方案是—种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒，其特点是试剂盒由盒体、试剂管A、试剂管B、试剂管C、试剂管D及过滤器组成；试剂管A中的试剂为こ酸こ腈溶液；试剂管B中的试剂为无水硫酸镁与氯化钠的混合物或无水硫酸镁与醋酸钠的混合物；试剂管C中的试剂为柠檬酸钠与柠檬酸ニ钠倍半水合物的混合物；试剂管D中的试剂为N—丙基こニ胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物。本发明检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒还可以采取如下技术措施所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及其方法，其特点是こ酸こ腈的重量百分比浓度为O. 5-1%。所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及其方法，其特点是过滤器为针管式过滤器。本发明的目的之ニ是提供ー种具有在较短时间内进行目标化合物測定，大大节约了检测时间及检测成本；具有快速、准确、灵敏地检测，操作方便舒适，适用于大量干紫苏叶样品的处理，样品前处理的效率高等特点的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法。本发明检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法所采取的技术方案是
一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法，其特点是前处理的方法包括以下步骤
(I)将紫苏叶放入装有こ酸こ腈溶液的试剂管A中，加入水及试剂管B中的无水硫酸镁与氯化钠的混合物或无水硫酸镁与醋酸钠的混合物，超声提取；(2)加入试剂管C中的柠檬酸钠与柠檬酸ニ钠倍半水合物的混合物，震荡，离心；(3)将步骤⑵中的上清液转移到装有N-丙基こニ胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物的试剂管D中，涡旋，离心；(4)将步骤(3)中的上清液过滤后，进行液相色谱-串联质谱法检测。本发明检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法还可以采取如下技术措施所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法，其特点是步骤(I)中，超声提取时间为5-20min ;步骤(2)中，震荡时间O. 5_2min，离心条件6000-10000r/min时间3_8min ；步骤(3)中，润旋时间O. 5_2min,6000-10000r/min条件下离心3_8min ;步骤(4)中过滤采用针管式过滤器。所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法，其特点是紫苏叶试样及各试剂配比为步骤(I)中，称取粉碎混匀后的紫苏叶试样3_8g于50ml试剂管A中，试剂管A装有O. 5-1%こ酸こ腈溶液10-20ml ;加入6_10mL水及试剂管B中的无水硫酸镁与氯化钠的混合物或无水硫酸镁与醋酸钠的混合物；无水硫酸镁与氯化钠的混合物的重量配比为5g: l_2g，无水硫酸镁与醋酸钠的混合物的重量配比为5g: l-2g。步骤(2)中，试剂管C中柠檬酸钠与柠檬酸ニ钠倍半水合物的混合物重量配比为Ig 0.5-lg ；步骤(3)中，试剂管D中N-丙基こニ胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物重量配比为 200_300mg :200_300mg IOOOmg0本发明具有的优点和积极效果是检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及其方法由于采用了本发明全新的技术方案，与现有技术相比，本发明检测干紫苏叶中常用杀菌剂(苯醚甲环唑、嘧菌酷、甲基托布津、腐霉利)的样品前处理试剂盒，样品前处理所用试剂价格便宜，容易获得，且用量小，样品处理无需用固相萃取小柱进行样品浄化，从而大大节约了检测成本；该试剂盒操作方便舒适，适用于大量干紫苏叶样品的处理，从而大大提高了样品前处理的效率；该试剂盒将所需试剂整合于ー个前处理盒内便于携带和储存。经本前处理试剂盒处理后的样品中杀菌剂(苯醚甲环唑、嘧菌酷、甲基托布津、腐霉利)的检测方法，流动相配置简单，能在较短时间内进行目标化合物測定，从而大大节约了检测时间及检测成本。从使用该前处理试剂盒和检测方法的效果来看，样品中杂质能够处理干净。该方法是ー种能够快速、准确、灵敏地检测利用本前处理试剂盒处理样品的高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)。本发明的优点及特点(I)本发明公开的紫苏叶中常用杀菌剂多残留前处理试剂盒生产过程简单、无污染、室温保存，所用试剂量少。(2)前处理过程无需用固相萃取小柱进行样品浄化，具有速度快、成本低、准确度和可靠性高特点。
(3)试剂盒中加入了柠檬酸钠及倍半水合柠檬酸钠作为缓冲保护剂，可促进对紫苏叶中酸碱敏感农药的分离。(4)检测方法为首次建立，消耗试剂少，分析时间短，能将目标化合物有效分离。
图I是本发明检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒的结构示意图；图2是经本试剂盒处理后的样品，经本检测方法检测后得出的紫苏叶样品中四种杀菌剂的质谱图。图中，I、试剂管A，2、试剂管B，3、试剂管C，4、试剂管D, 5、一次性针管过滤器。
具体实施例方式为能进一歩了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下 參阅附图I至图2。实施例I—种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒，由盒体、试剂管A、试剂管B、试剂管C、试剂管D及针管式过滤器E组成；其中，试剂A装在50mL具塞螺旋盖聚丙烯离心管中，试剂管C装在5mL具塞螺旋盖聚丙烯离心管中，试剂D装在15mL具塞螺旋盖聚丙烯离心管中。试剂盒的制备试剂A的制备配制O. 5-1%冰こ酸混合こ腈溶液10mL，转移至50mL具塞螺旋盖聚丙烯离心管中。试剂B的制备称取2g氯化钠或醋酸钠与5g无水硫酸镁充分混合，转移至密封试剂袋中。试剂C的制备称取Ig柠檬酸钠与O. 5g柠檬酸ニ钠倍半水合物转移至5mL具塞螺旋盖聚丙烯离心管中。试剂D的制备称取为300mg N-丙基こニ胺(PSA)、200mg C18及Ig无水硫酸镁转移至15mL具塞螺旋盖聚丙烯离心管中。实施例2应用实施，一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法I、取紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒，里面配有试剂管A、试剂管B、试剂管C、试剂管D及针管式过滤器E。2、称取粉碎混匀后的紫苏叶试样5. Og于试剂管A中，加入SmL水及试剂管B，超声提取IOmin ;所述的试剂管A为O. 5-1%こ酸こ腈溶液；所述的试剂管B为无水硫酸镁与氯化钠的混合物、无水硫酸镁与醋酸钠的混合物的任意ー种；3、加入试剂管C,剧烈震荡lmin,8000r/min离心5min ;所述的试剂管C朽1檬酸钠与柠檬酸ニ钠倍半水合物的混合物；
4、将上清液转移到试剂管D中，润旋lmin,8000r/min离心5min ;所述的试剂管D为N-丙基こニ胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物；5、上清液经针管式过滤器E过滤后，供UPLCMS/MS检测。实施例3应用实施，一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法I、将应用前处理试剂盒处理后紫苏叶样品按如下液相色谱-串联质谱条件进行測定。 2、优选的色谱条件色谱柱=ACQUITy UPLC BEH C18 柱，2. I X IOmm, I. 7 μ m ;柱温250C ;进样量2 μ L ;流速0. 25mL/min。梯度洗脱条件A相为甲醇，B相为lOmmol/Lこ酸铵，O 3min, 20%A ；3 4min, 90%A ；4 5min, 90%A ；5 6min, 20%A。3、优选的质谱条件离子源电喷雾离子源；扫描方式正离子扫描；采集模式多反应监测模式MRM ;毛细管电压3. 12kV ;脱溶剂气温度400°C;脱溶剂气流速800L/Hr ；锥孔反吹气流速50L/Hr ;待测农药定性、定量离子对锥孔电压和碰撞电压见表I。表I待测农药定性、定量离子对锥孔电压和碰撞电压
权利要求
1.一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒，其特征是试剂盒由盒体、试剂管A、试剂管B、试剂管C、试剂管D及过滤器组成；试剂管A中的试剂为こ酸こ腈溶液；试剂管B中的试剂为无水硫酸镁与氯化钠的混合物或无水硫酸镁与醋酸钠的混合物；试剂管C中的试剂为柠檬酸钠与柠檬酸ニ钠倍半水合物的混合物；试剂管D中的试剂为N-丙基こニ胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物。
2.根据权利要求I所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒，其特征是こ酸こ腈的重量百分比浓度为O. 5-1%。
3.根据权利要求I所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒，其特征是过滤器为针管式过滤器。
4.一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法，其特征是前处理的方法包括以下步骤 (1)将紫苏叶放入装有こ酸こ腈溶液的试剂管A中，加入水及试剂管B中的无水硫酸镁与氯化钠的混合物或无水硫酸镁与醋酸钠的混合物，超声提取； (2)加入试剂管C中的柠檬酸钠与柠檬酸ニ钠倍半水合物的混合物，震荡，离心； (3)将步骤(2)中的上清液转移到装有N-丙基こニ胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物的试剂管D中，涡旋，离心； (4)将步骤(3)中的上清液过滤后，进行液相色谱-串联质谱法检测。
5.根据权利要求4所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法，其特征是步骤(I)中，超声提取时间为5-20min ;步骤(2)中，震荡时间O. 5_2min，离心条件6000_10000r/min时间3_8min ;步骤(3)中，润旋时间O. 5-2min,6000-10000r/min条件下离心3_8min ;步骤(4)中过滤采用针管式过滤器。
6.根据权利要求4或5所述的检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理的方法，其特征是紫苏叶试样及各试剂配比为 步骤(I)中，称取粉碎混匀后的紫苏叶试样3-8g于50ml试剂管A中，试剂管A装有O. 5-1%こ酸こ腈溶液10-20ml ;加入6_10mL水及试剂管B中的无水硫酸镁与氯化钠的混合物或无水硫酸镁与醋酸钠的混合物；无水硫酸镁与氯化钠的混合物的重量配比为5g: l_2g，无水硫酸镁与醋酸钠的混合物的重量配比为5g: l-2g。
步骤(2)中，试剂管C中柠檬酸钠与柠檬酸ニ钠倍半水合物的混合物重量配比为Ig:O.5-lg ； 步骤(3)中，试剂管D中N-丙基こニ胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物重量配比为200_300mg :200_300mg IOOOmg0
全文摘要
本发明涉及一种检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒及其方法。本发明属于食品检测技术领域。检测紫苏叶中常用杀菌剂前处理试剂盒，由盒体、试剂管A、试剂管B、试剂管C、试剂管D及过滤器组成。前处理的方法(1)将紫苏叶放入装有乙酸乙腈溶液的试剂管A中，加入水及无水硫酸镁与氯化钠的混合物或无水硫酸镁与醋酸钠的混合物，超声提取；(2)加入柠檬酸钠与柠檬酸二钠倍半水合物的混合物，震荡，离心；(3)将上清液转移到装有N-丙基乙二胺(PSA)、C18及无水硫酸镁的混合物的试剂管中，涡旋，离心；(4)将上清液过滤，进行液相色谱-串联质谱法检测。本发明具有过程简单、无污染、室温保存、试剂量少、速度快、成本低、准确度和可靠性高优点。
文档编号G01N30/14GK102692468SQ20121016013
公开日2012年9月26日 申请日期2012年5月22日 优先权日2012年5月22日
发明者王云凤, 肖亚兵, 陈其勇, 陈旭艳, 韩红芳 申请人:天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心