专利名称：C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及免疫胶体金检测试剂盒，具体涉及一种C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒。
背景技术：
C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是由肝脏合成的一个相对分子质量为I. 15X103的五环结构，在它的每一边都有亲钙性结合位点，且其分子代谢周期的半衰期仅为5-7小时，因此在补体系统的免疫调节中扮演了一个重要的生物学角色。CRP是公认的最有价值的典型急性时相蛋白，正常血浆水平小于5mg/L，机体受到感染、外伤、肿瘤及理化因素刺激后5-8小时迅速升高，24小时内峰值可为正常值的数百倍。若感染得到控制CRP可在24-48小时内迅速下降，I周内恢复正常。CRP可与凋亡细胞、坏死细胞膜磷脂或细菌、真菌、寄生虫的细胞壁磷酸胆碱结合，激活补体，调理吞噬功能，促使内源性或外源性配体物质的清除。 目前，CRP的测定广泛地应用于临床疾病的早期诊断及鉴别诊断，特别是快速定量CRP检测在儿科疾病的诊断中得到较好的应用。在细菌感染急性期CRP水平显著升高，而在病毒感染时CRP水平正常或轻微升高，因此CRP水平可作为细菌感染或病毒感染首选鉴别诊断指标；在鉴别呼吸道感染时，细菌性肺炎常导致CRP水平升高到60mg/L以上，而急性支气管炎很少导致CRP水平的显著升高，所以测定CRP水平有助于鉴别肺炎和支气管炎，减少对非细菌性急性支气管炎患者予抗生素治疗；外科手术后若病人继发细菌感染特别是化脓性感染时，CRP明显升高(大于50mg/L)，手术第2天达到高峰，72小时后开始逐步下降，恢复时间因手术部位和组织损伤程度而异，故CRP还可以作为诊断感染和手术后并发症的一项指标；此外，研究还表明CRP还可能与风湿性疾病、系统性红斑狼疮、外科学、妇产科学、胃肠病学、血液学和肿瘤学等密切相关，应用范围还将不断扩大。
实用新型内容本实用新型的目的是从提高检测准确度出发，提供一种与金标读数仪配套使用的C反应蛋白(CRP)胶体金定量检测试剂盒。本实用新型一方面公开了一种C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与盒盖之间，所述盒盖与盒座卡接，所述盒盖上设有加样口与观察口 ；所述试剂条包括塑料薄片以及固定于所述塑料薄片上头尾依次衔接的滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I，所述免疫硝酸纤维素膜上设有两条分别包被有抗CRP单克隆抗体II的检测线(!\、T2线)和一条包被有羊抗鼠IgG的质控线(C 线)。进一步的，所述两条检测线靠近所述免疫胶体金纸片，所述质控线靠近所述吸水纸，所述两条检测线与所述质控线之间相互平行。[0007]进一步的，所述滤样纸对应所述盒盖上的加样口，所述免疫硝酸纤维素膜对应所述盒盖上的观察口，并且所述免疫硝酸纤维素膜上的两条检测线和一条质控线裸露于所述观察口。进一步的，所述加样口和所述观察口为方形开口。更进一步的，所述加样口和观察口的方形开口为漏斗状，开口的上口大，下口小。本实用新型试剂盒的盒盖与盒座卡接是指，盒盖与盒座的边缘相匹配，可以通过盒盖与盒座上设有的对应的卡合或扣合连接部件，通过卡合或扣合连接。所述胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I (免疫胶体金)可采用现有技术，用胶体金来标记抗CRP单克隆抗体I，获得免疫胶体金。C反应蛋白(CRP)胶体金定量检测试剂盒中试剂条的主要生产工艺过程包括 I)胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I的制备用柠檬酸钠还原法制备胶体金，并用制备好的胶体金标记抗CRP单克隆抗体I ;2)免疫胶体金纸片的制备利用上一步制备的胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I包被玻璃纤维素纸片，获得免疫胶体金纸片；3)免疫硝酸纤维素膜的制备将抗CRP单克隆抗体II溶液通过微机自动点膜到硝酸纤维素膜上制备Ti、T2线；将羊抗鼠IgG溶液通过微机自动点膜到硝酸纤维素膜上制备C线；4)试剂条的组装顺次将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸贴在塑料薄片上，组成CRP检测试剂卡，将卡片分切成试剂条，干燥后即得。将制备好的试剂条与盒座、盒盖组装，获得本实用新型的C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒。上述CRP胶体金检测试剂盒的工作原理为利用高度特异的抗体-抗原结合反应及免疫膜层析技术,通过双抗体夹心法来定量检测人全血、血清、血浆中出现的CRP水平。在试剂盒的硝酸纤维素膜两条检测线(1\、T2线)上分别包被有抗CRP单克隆抗体II,免疫胶体金纸片上包被有免疫胶体金(胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I)。检测时，被检样品首先与胶体金标记的抗CRP单克隆抗I混合，并沿纤维膜向上层析依次通过T1线、T2线。如果样品中有CRP存在，CRP首先和胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I结合，形成“CRP-抗CRP单克隆抗体I-胶体金复合物”;在层析至检测线时，免疫胶体金会被抗CRP单克隆抗体II捕获，而在检测线处形成一条红色线条。检测线颜色的深浅与样品中CRP浓度成正比。如果样品中没有CRP，则不会在T线处形成线条。在试剂条上的质控线(C线)包被有羊抗鼠IgG，以指示试剂盒反应系统工作是否正常。质控线的出现与CRP的存在无关。质控线色带的出现表明①样品加入量充足；②样品在纸条上运行正常。本实用新型试剂盒的使用方法为I.将试剂盒放置在水平台面上。2.用加样吸管吸取样品，滴3滴(约120ul)样品到试剂盒的加样口中。每检测一份不同的样品注意要使用不同的吸管。3.观察结果在滴加样品后3-8分钟判读结果，显色稳定后插入金标读数仪插槽内进行定量检测。[0025]检测结果的定性判断方法阴性仅在质控线(C线)位置出现一条红色线条，表示样品中无CRP存在。阳性1.质控线(C线)位置出现一条红色线条，T1线位置处有一条红色线条；2.质控线(C线)位置出现一条红色线条，T1和T2线位置处均出现红色线条；表示样品有CRP存在。无效质控线(C线)不出现。任何情况下，C线均应形成，表示加样和操作正确。C线未出现表明测试结果是不确定的，应重做。本实用新型提供的C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒敏感性高、特异性强、操作 简便省时，检测结果准确、稳定，适合定性及定量检测样本中的C反应蛋白。
图I :CRP胶体金定量检测试剂盒外观示意图(I.盒座2.盒盖3.试剂条9. T1线川-^线11.质控线12.加样口 13.观察口)图2 :去盒盖的CRP胶体金定量检测试剂盒示意图(I.盒座3.试剂条5.滤样纸6.免疫胶体金纸片7.免疫硝酸纤维素膜8.吸水纸9.1\线^.!^线11.质控线)图3 :CRP胶体金定量检测试剂盒的试剂条侧视示意图(4.塑料薄片5.滤样纸6.免疫胶体金纸片7.免疫硝酸纤维素膜8.吸水纸9.1\线^.!^线11.质控线)
具体实施方式
如图1-3所示的C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒，包括盒座I、盒盖2和试剂条3，试剂条3固定于盒座I中部且位于盒座I与盒盖2之间，盒盖2与盒座I卡接，盒盖2上设有加样口 12与观察口 13 ;试剂条3包括塑料薄片4以及固定于塑料薄片4上头尾依次衔接的滤样纸5、免疫胶体金纸片6、免疫硝酸纤维素膜7和吸水纸8 ;免疫胶体金纸片6上包被有胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I，免疫硝酸纤维素膜7上设有两条分别包被有抗CRP单克隆抗体II的检测线9、10 (1\、T2线)和一条包被有羊抗鼠IgG的质控线11((线)。两条检测线9、10靠近免疫胶体金纸片6，质控线11靠近吸水纸8，两条检测线9、10与质控线11之间相互平行。滤样纸5对应盒盖2上的加样口 12，免疫硝酸纤维素膜7对应盒盖2上的观察口 13，并且免疫硝酸纤维素膜7上的两条检测线9、10和一条质控线11裸露于观察口 13。加样口 12和观察口 13为方形开口，加样口 12和观察口 13的方形开口为漏斗状，开口的上口大，下口小。
权利要求1.一种C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与盒盖之间，所述盒盖与盒座卡接，所述盒盖上设有加样口与观察口 ；所述试剂条包括塑料薄片以及固定于所述塑料薄片上头尾依次衔接的滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I，所述免疫硝酸纤维素膜上设有两条分别包被有抗CRP单克隆抗体II的检测线和一条包被有羊抗鼠IgG的质控线。
2.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述两条检测线靠近所述免疫胶体金纸片，所述质控线靠近所述吸水纸，所述两条检测线与所述质控线之间相互平行。
3.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述滤样纸对应所述盒盖上的加样口；所述免疫硝酸纤维素膜对应所述盒盖上的观察口，并且所述免疫硝酸纤维素膜上的两条检测线和一条质控线裸露于所述观察口。
4.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述加样口和所述观察口为方形开口。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述加样口和观察口的方形开口为漏斗状，开口的上口大，下口小。
专利摘要本实用新型涉及胶体金检测试剂盒领域，具体公开了一种C反应蛋白胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与盒盖之间，所述盒盖与盒座卡接，所述盒盖上设有加样口与观察口；所述试剂条包括塑料薄片以及固定于所述塑料薄片上头尾依次衔接的滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗CRP单克隆抗体I，所述免疫硝酸纤维素膜上设有两条分别包被有抗CRP单克隆抗体II的检测线和一条包被有羊抗鼠IgG的质控线。本实用新型的试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便省时，检测结果准确、稳定，适合定性及定量检测样本中的C反应蛋白。
文档编号G01N33/68GK202471725SQ20122006235
公开日2012年10月3日 申请日期2012年2月24日 优先权日2012年2月24日
发明者张国华 申请人:上海凯创生物技术有限公司