一种测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，包括内标溶液的制备、标准工作溶液的制备、样品溶液的制备、气相色谱质谱分析和标准曲线绘制及结果计算。该方法采用内标法进行定量，操作简单准确，有效地减少因样品前处理和仪器精密度等带来的误差，所采用的色谱条件使得目标物和内标物的色谱峰都分离较好，并且具有较好的线性相关性，检出限为0.12mg/kg，定量限为0.36mg/kg，平均相对标准偏差为小于5％，加标回收率在90.5％～103.4％之间，说明本方法的灵敏度高、重复性好，回收率高。
【专利说明】一种测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于香精香料检测【技术领域】，具体涉及一种测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法。
【背景技术】
[0002]邻氨基苯甲酸甲酯，又名橙花油，用于配制橙花型、金银花型等香精和人造草莓、人造葡萄等香精。纯品为无色至淡黄色液体，带蓝色荧光，具有橙花果香香气。邻氨基苯甲酸甲酯具有刺激性，含量过高时可能引起呼吸系统和皮肤疾病。
[0003]为确保产品质量安全，需对可能添加的香精香料质量安全进行密切关注和监控，对管理法规中明确要求禁用的物质，甚至可能对人体健康有危害的物质也应予以高度关注。鉴于邻氨基苯甲酸甲酯是一种常见的人造香精，极有可能会作为添加剂在烟用香精的生产过程中用到。因此探索一种快速、准确的邻氨基苯甲酸甲酯的测试方法，对烟用香精香料中的邻氨基苯甲酸甲酯进行有效控制，保障烟用香精和料液的使用安全性，是非常迫切和必要的。
[0004]目前，国内外邻氨基苯甲酸甲酯的分析研究，主要关注白酒和驱鸟剂中邻氨基苯甲酸甲酯的检测，现有的检测方法有气相色谱法和高效液相色谱法。王玉霞等人报道了白兰地酒中邻氨基苯甲酸甲酯高效液相色谱分析方法。王兴民等人报道了驱鸟剂中邻氨基苯甲酸甲酯的毛细管柱气相色谱测定方法。针对较为简单的基质，上述方法可以准确检测目标化合物，但对于香精香料等复杂体系，上述方法存在较严重的“假阳性”问题，不利于目标化合物的准确定性确认及定量分析。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯含量的测定方法，以实现对香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯含量的快速、准确测定。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
[0007]香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯含量的测定方法，包括以下步骤:
[0008](I)内标溶液的配制:以萘为内标物，用二氯甲烷作溶剂，制备内标溶液；
[0009](2)标准工作溶液的配制:以邻氨基苯甲酸甲酯为标准品，用二氯甲烷作溶剂，经逐级稀释配置成混合标准溶液，然后分别加入一定量步骤(I)配制的内标溶液配置成标准工作溶液；
[0010](3)样品溶液的制备:称取香精香料样品，准确加入一定量步骤⑴配制的内标溶液以及萃取溶剂，超声提取，将萃取液过有机滤膜，得样品溶液；
[0011](4)气相色谱质谱分析:利用气相色谱质谱仪分别对标准工作溶液和样品溶液进行检测分析；
[0012](5)标准曲线绘制及结果计算。
[0013]在一个优选的实施方案中，本发明所述的测试方法的步骤(I)中，所述的内标溶液的配制是准确称取内标物萘20mg，置于500mL容量瓶中，以二氯甲烷溶解和定容，得内标液浓度为0.04mg/mL。
[0014]在一个优选的实施方案中，本发明所述的测试方法的步骤(2)中，所述标准工作溶液的配制是准确称取邻氨基苯甲酸甲酯标准品54.84mg，置于500mL棕色容量瓶中，以二氯甲烷溶解和定容，得邻氨基苯甲酸甲酯标准液(109.86μ g/mL)。分别准确吸取邻氨基苯甲酸甲酯标准液0.lmL、0.2mL、0.5mL、lmL、2mL、5mL于IOmL棕色容量瓶中，再准确加入
1.0mL内标液，以二氯甲烷稀释至刻度。得到邻氨基苯甲酸甲酯浓度分别为1.099 μ g/mL,
2.197 μ g/mL, 5.484 μ g/mL、10.986 μ g/mL, 21.972 μ g/mL, 54.840 μ g/mL 的标准溶液系列。
[0015]在一个优选的实施方案中，本发明所述的测试方法的步骤(3)中，所述的萃取溶液为二氯甲烷。所述样品溶液的制备方法具体包括称取0.3g左右试样，置于IOml棕色容量瓶中；加入6mL 二氯甲烷，超声提取30min，然后准确加入l.0mL内标液，以二氯甲烷定容，手持振荡Imin ;再加入0.6g或足量无水硫酸钠(预先于马弗炉中600°C干燥5小时后，储存于干燥器内备用)吸收水分，立刻手持振荡Imin，静置，澄清后，取上清液经0.45 μ m有机滤膜过滤后，得到样品溶液。
[0016]在一个优选的实施方案中，本发明所述的测试方法的步骤(4)中，所述的色谱分析条件为色谱柱采用Elite-XLB (30mX0.25mmX0.25 μ m)弹性熔融石英毛细管柱，进样口温度为220?260°C (优选240°C );载气为氦气；流速为0.8?1.2mL/min(优选1.0mL/min);进样量为0.8?1.2(优选1.0yL);分流比为10:1 ;升温程序:初始温度100°C，以IO0C /min速率升至150°C，保持0.5?1.5min (优选Imin)，再以30°C /min速率升至240°C，保持0.5?1.5min (优选Imin);色谱与质谱接口温度为220?260°C (优选240°C )。质谱分析条件为:离子源温度为220?240°C (优选230°C);四级杆温度为140?160°C (优选150°C);电离方式为电子轰击源EI ;电离能量为70eV;扫描方式为选择离子扫描(SIM)；其中邻氨基苯甲酸甲酯以特征离子m/zl51、120、119作为定性离子，以m/zl51作为定量离子。内标选择m/zl28、102作为定性离子，以m/zl28作为定量离子，对每个离子的监测时间为50ms。溶剂延迟为4.0min。
[0017]在一个优选的实施方案中，本发明所述的测试方法的步骤(5)中，所述的标准曲线绘制及结果计算方法如下:首先以标准工作溶液中邻氨基苯甲酸甲酯和内标的浓度比为横坐标，邻氨基苯甲酸甲酯和内标的色谱峰面积比为纵坐标，进行回归分析，得到标准曲线；将相同条件下测得的样品溶液中邻氨基苯甲酸甲酯与内标的色谱峰面积比，代入工作曲线，求得样品中邻氨基苯甲酸甲酯的含量。
[0018]发明的有益效果
[0019]与现有技术相比，本发明的测定烟用香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，具有如下优良效果:
[0020](I)对于邻氨基苯甲酸甲酯的测定，现有技术多以外标法定量，对于香精香料的复杂基质背景体系，目标物的定量测定难免有干扰。而本发明方法利用内标法定量，可以减少由前处理方法重现性和仪器精密度问题带来的误差，大大提高了定量的准确性。
[0021](2)本发明方法选择了峰形和分离效果最好的Elite-XLB柱为分离柱，并采用能同时给出定性和定量信息的GC/MS-SIM作为检测模式，提高了响应信号的灵敏度，保证了检测的准确性。[0022](3)本发明方法所采用的色谱条件使得目标物和内标物的色谱峰都分离较好，并且具有较好的线性相关性，检出限为0.37mg/kg，定量限为0.36mg/kg ；
[0023](4)本发明方法的平均相对标准偏差为1.9%，加标回收率在94.3%~98.5%之间，说明本方法的重复性好，回收率高。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1为标准工作溶液的色谱图；
[0025]图2为样品溶液的色谱图；
[0026]图3为邻氨基苯甲酸甲酯的全扫描质谱图。 【具体实施方式】
[0027]下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0028]实施例1
[0029]本实施例对香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯含量的检测方法如下:
[0030](I)内标溶液的配制
[0031]称取内标物萘20mg，置于500mL容量瓶中，以二氯甲烷溶解和定容，得内标液浓度为0.04mg/mL。内标溶液避光4°C保存，取用时放置于常温下，达到常温后方可使用，有效期为3个月。
[0032](2)标准工作溶液的配制
[0033]准确称取邻氨基苯甲酸甲酯标准品54.84mg，置于500mL棕色容量瓶中，以二氯甲烷溶解和定容，得邻氨基苯甲酸甲酯标准液(109.86μ g/mL)。分别准确吸取邻氨基苯甲酸甲酯标准液0.lmL、0.2mL、0.5mL、lmL、2mL、5mL于IOmL棕色容量瓶中，再准确加入1.0mL步骤⑴配制的内标液，以二氯甲烷稀释至刻度。得到邻氨基苯甲酸甲酯浓度分别为
1.099 μ g/mL>2.197 μ g/mL、5.484 μ g/mL、10.986 μ g/mL>21.972 μ g/mL、54.840 μ g/mL 的标系列准溶液。标准溶液避光4°C保存，取用时放置于常温下，达到常温后方可使用。每周做一次标线。
[0034](3)样品溶液的制备
[0035]称取0.3g左右试样，置于IOmL棕色容量瓶中；加入6mL 二氯甲烷，超声提取301^11，然后准确加入1.01^步骤(1)配制的内标液，以二氯甲烷定容，手持振荡Imin;再加入0.6g或足量无水硫酸钠(预先于马弗炉中600°C干燥5小时后，储存于干燥器内备用)吸收水分，立刻手持振荡lmin，静置，澄清后，取上清液经0.45 μ m有机滤膜过滤，得到样品溶液。
[0036](4)色谱质谱分析
[0037]色谱分析条件为采用Elite-XLB弹性熔融石英毛细管色谱柱，进样口温度为2400C ;载气为氦气；流速为1.0mL/min ;进样量为1.0y L ;分流比为10:1 ;升温程序:初始温度100°C，以10°C /min速率升至150°C，保持lmin，再以30°C /min速率升至240°C，保持Imin ;色谱与质谱接口温度为240°C。
[0038]质谱分析条件为离子源温度:230°C ;四级杆温度:150°C ;电离方式:电子轰击源EI ;电离能量:70eV ;扫描方式:选择离子扫描(SIM)。
[0039]标准溶液的色谱分析结果见图1 ;样品溶液的色谱分析结果见图2 ;邻氨基苯甲酸甲酯的全扫描质谱图见图3，由于119碎片易受到多种香精主要香味成为干扰，149碎片易受到多种苯甲酸酯类、邻苯二甲酸酯类干扰，依据本底干扰少、碎片丰度高、选择性高的原贝_序，确定以特征离子m/zl51、120、119作为定性离子，以m/zl51作为定量离子。内标选择m/zl28、102作为定性离子，以m/zl28作为定量离子，对每个离子的监测时间为50ms。溶剂延迟为4.0min。
[0040](5)标准曲线绘制及结果计算
[0041]首先以标准工作溶液中邻氨基苯甲酸甲酯与内标的量之比为横坐标，以色谱图中邻氨基苯甲酸甲酯与内标的峰面积之比为纵坐标，进行回归分析，得到标准曲线，取最低浓度的标准工作溶液，做10次平行检测分析，计算其标准偏差，以3倍的标准偏差对应的浓度为检出限。与标准工作曲线相对应的回归方程、相关系数等数据如下:
[0042]邻氨基苯甲酸甲酯标准工作曲线相对应的回归方程为Y = 0.115X-0.0204，相关系数为0.9996，线性范围I?50mg/L，检出限为0.12mg/kg，定量限为0.36mg/kg。
[0043]然后将相同条件下测得的样品溶液中邻氨基苯甲酸甲酯与内标的色谱峰面积比，代入标准工作曲线，由此计算香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的含量，计算公式如下:
[0044]m = (A X S) /n
[0045]式中:
[0046]m—每克香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的含量，单位为微克每克(mg/kg)；
[0047]A—样品中邻氨基苯甲酸甲酯的浓度(mg/L)；
[0048]S—溶液体积(L)；
[0049]η—称取样品的质量(kg)。
[0050](6)样品测定
[0051]采用上述方法，以选取的10个香精香料样品进行检测，有一个样品检出邻氨基苯甲酸甲酯。结果实测值为20.17mg/kg。
[0052]实施例2
[0053]精密度和加标回收率的检测
[0054]分别在检出邻氨基苯甲酸甲酯的香精香料样品中加入10mg/kg, 20mg/kg, 50mg/kg三个不同浓度的标准溶液进行加标回收率试验，每个样品分别测定6次，色谱质谱分析的条件同实施例1，根据分析结果计算本方法香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的加标回收率，结果如表I所示。
[0055]表I香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的回收率和重复性(η = 6)
【权利要求】
1.一种测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)内标溶液的配制:以萘为内标物，用二氯甲烷作溶剂，制备内标溶液； (2)标准工作溶液的配制:以邻氨基苯甲酸甲酯为标准品，用二氯甲烷作溶剂，经逐级稀释配置成混合标准溶液，然后分别加入一定量的内标溶液配置成标准工作溶液； (3)样品溶液的制备:称取香精香料样品，准确加入一定量的内标溶液以及萃取溶剂，超声提取，将萃取液过有机滤膜，得样品溶液； (4)气相色谱质谱分析:利用气相色谱质谱仪分别对标准工作溶液和样品溶液进行检测分析； (5)标准曲线绘制及结果计算。
2.根据权利要求1所述的测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:步骤(I)中，所述的内标溶液的配制是准确称取内标物萘20mg，置于500mL容量瓶中，以二氯甲烷溶解和定容，得内标液浓度为0.04mg/mL。
3.根据权利要求1所述的测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:步骤(2)中，所述标准工作溶液的配制是准确称取邻氨基苯甲酸甲酯标准品54.84mg，置于500mL棕色容量瓶中，以二氯甲烷溶解和定容，得邻氨基苯甲酸甲酯标准液(109.86 μ g/mL)，分别准确吸取邻氨基苯甲酸甲酯标准液0.lmL、0.2mL、0.5mL、lmL、2mL、5mL于IOmL棕色容量瓶中，再准确加入l.0mL内标液，以二氯甲烷稀释至刻度，得到邻氨基苯甲酸甲酯浓度分别为 1.099μ g/mL、2.197μ g/mL、5.484μ g/mLU0.986μ g/mL、21.972 μ g/mL、54.840 μ g/mL的标准溶液系列。
4.根据权利要求1所述的测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:步骤(3)中，所述的萃取溶液为二氯甲烷。
5.根据权利要求1所述的测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:步骤(3)中，所述样品溶液的制备方法具体包括称取0.3g左右试样，置于IOml棕色容量瓶中；加入6mL 二氯甲烷，超声提取30min，然后准确加入l.0mL内标液，以二氯甲烷定容，手持振荡Imin ;再加入0.6g或足量无水硫酸钠吸收水分,立刻手持振荡Imin,静置,澄清后，取上清液经0.45 μ m有机滤膜过滤后，得到样品溶液。
6.根据权利要求1所述的测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:步骤⑷中，所述的色谱分析条件为色谱柱采用Elite-XLB (30mX0.25mmX0.25 μ m)弹性熔融石英毛细管柱，进样口温度为220~260°C (优选240°C);载气为氦气；流速为0.8~1.2mL/min (优选1.0mL/min);进样量为0.8~1.2 μ L(优选1.0 μ L);分流比为10:1 ;升温程序:初始温度100°C，以10°C /min速率升至150°C，保持0.5~1.5min (优选Imin)，再以300C /min速率升至240°C，保持0.5~1.5min (优选Imin);色谱与质谱接口温度为220~260 0C (优选 240 0C )。
7.根据权利要求1所述的测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:步骤(4)中，所述的质谱分析条件为:离子源温度为220~240°C (优选230°C);四级杆温度为140~160 (优选150°C )；电离方式为电子轰击源EI ；电离能量为70eV ;扫描方式为选择离子扫描(SIM);其中邻氨基苯甲酸甲酯以特征离子m/zl51、120、119作为定性离子，以m/zl51作为定量离子，内标选择m/zl28、102作为定性离子，以m/zl28作为定量离子，对每个离子的监测时间为50ms。
8.根据权利要求1所述的测定香精香料中邻氨基苯甲酸甲酯的方法，其特征在于:步骤(5)中，所述的标准曲线绘制及结果计算方法如下:首先以标准工作溶液中邻氨基苯甲酸甲酯和内标的浓度比为横坐标，邻氨基苯甲酸甲酯和内标的色谱峰面积比为纵坐标，进行回归分析，得到标准曲线；将相同条件下测得的样品溶液中邻氨基苯甲酸甲酯与内标的色谱峰 面积比，代入工作曲线，求得样品中邻氨基苯甲酸甲酯的含量。
【文档编号】G01N30/02GK104007203SQ201410257814
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年6月12日 优先权日:2014年6月12日
【发明者】邓其馨, 苏明亮, 刘江生, 叶仲力, 方钲中, 林艳, 梁晖, 谢卫 申请人:福建中烟工业有限责任公司