化妆品中38种限用着色剂同时检测的方法
【专利摘要】一种化妆品中38种限用着色剂同时检测的方法，所述着色剂为苋菜红、酸性蓝74、胭脂红、酸性黄1、酸性橙10、日落黄、酸性红1、诱惑红、坚牢绿、酸性蓝9、酸性红50、酸性黄11、酸性黑1、酸性蓝1、酸性橙7、酸性红52、酸性绿22、专利蓝v、酸性红92、酸性绿9、酸性红88、颜料红49、溴甲酚绿、酸性紫43、酸性紫9、酸性蓝62、酸性蓝7、碱性紫2、酸性紫50、溶剂黄33、溶剂黄21、颜料红64、溶剂红3、溶剂黄16、溶剂黄29、颜料红4、溶剂绿3、碱性蓝26，检测步骤如下：溶液的配制、各种标准储备溶液的配制、样品溶液的制备、液相色谱定性分析、定量测定。本发明可同时检测化妆品中38种限用着色剂，检测效率高，检测成本低。
【专利说明】化妆品中38种限用着色剂同时检测的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测方法，特别是一种化妆品中38种限用着色剂同时检测的方 法。
【背景技术】
[0002] 着色剂(也称色素）作为化妆品原料之一，在化妆品中广泛使用。普通化妆品中使 用着色剂的目的是，用来使产品着色，还可以调整某些原料对产品色调的影响，用以区分不 同的产品品种。在化妆品化妆品中使用则主要是使化妆品起到美化、修饰的作用。
[0003] 着色剂按照性能和着色方式可分为染料和颜料两大类，染料又分为天然染料和合 成染料，颜料则分为无机颜料和有机颜料。按照来源方式，可分为天然着色剂和合成着色 剂两大类。其中天然染料和无机颜料一般属于天然着色剂，合成着色剂则包括合成染料及 有机颜料。大多数的合成着色剂多来自煤焦油产物，往往会对人体造成不同程度的危害，例 如，一些合成色素可引起光敏反应，导致生育能力下降、畸胎，甚至诱发癌症。目前，化妆品 对于一些人而言已成为生活必需品，为安全起见，世界上许多国家均对化妆品用着色剂作 了相关规定。我国《化妆品卫生规范》（2007)参照《欧盟化妆品规程》并结合中国的特点， 对化妆品用着色剂的品种、使用范围和限制条件都做出了明确的规定。
[0004] 卫生部《化妆品卫生规范》（2007版）中规定的限用着色剂共156种，除去其中的 30种无机物颜料和14种天然色素，还剩112种限用着色剂。这112种限用着色剂由化学 合成法制得的，为人工合成着色剂。包括25种有机颜料和87种有机染料。这些人工着色 剂使用不当也具有一定的危险性。为此，《化妆品卫生规范》（2007版）中规定了它们允许 使用的范围。并按照允许使用范围，将它们分为四大类。I类可用于各种化妆品，II类可用 于除眼部之外的化妆品，III类可用于不与黏膜接触的化妆品，IV类为仅和皮肤暂时接触 的化妆品。其中I类共包括54种着色剂（10种有机颜料和44种有机染料)，II类只包括4 种着色剂（1中有机颜料和3种有机染料)，III类包括18种着色剂（1种有机颜料和17种 有机染料)，IV类包括36种着色剂（13种有机颜料和23种有机染料)。
[0005] 《化妆品卫生规范》（2007版)虽然给出了化妆品中限用着色剂的种类和限用范围， 但目前尚缺乏与这些着色剂相应的标准检测方法，这就给政府、企业的生产监管和产品品 质保证造成了技术上的困难。因此，有必要研制快速、准确、灵敏的国家标准检测方法，为政 府法规的执行和化妆品的质量监管提供有效的技术支持和有力保障。
[0006] 目前，对化妆品中着色剂的检测，国内外有文献报道的方法包括：薄层色谱法、胶 束电动色谱法、高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS /MS)、高效液相色谱-紫外可见检测 法（HPLC-UV)及高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC- DAD)。经过文献查阅发现，限 用着色剂中，化妆品中水溶性着色剂的研究最近几年引起人们的关注。所查文献中涉及水 溶性限用着色剂种类为15种。但单个方法涉及水溶性着色剂的种类最多为9种(溶剂绿7 (C. I. 59040)、食品黄 3 (C. I. 15985)、食品红 17 (C. I. 16035)、酸性黄 I (C. I. 10316)、 酸性红33 (C. I. 17200)、食品红4 (C. I. 16255)、食品红I (C. I. 14700)、橙黄1、酸性橙 7 (C. I. 15510))，另有方法涉及7种水溶性着色剂的检测（胭脂红（C. I. 16255)、萘酚黄 (C.I. 10316)、日落黄（C.I. 15985)、酸性红 33 (C.I. 17200)、诱惑红（C.I. 16035)、酸性 红13、酸性橙II)。
[0007] 样品前处理大多采用溶剂萃取、固相萃取、液液萃取等方法。色谱分离均采用常用 的C18色谱柱，流动相则多用甲醇或乙腈与磷酸盐或醋酸铵缓冲液的梯度洗脱程序，也有 用四丁基氢氧化铵做离子对试剂来增强水溶性目标物的色谱保留。检测波长则多采用240 nm，480 nm，520 nm等波长。液质联用在着色剂检测领域的应用目前还不十分普遍。
[0008] 在检测标准领域，目前化妆品着色剂检测尚无任何现行的国家标准。SN/T 2105-2008化妆品中柠檬黄和桔黄等水溶性色素的测定方法，规定了 8种水溶性色素樱桃 红、食品红17、柠檬黄、桔黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、酸性蓝9的液相色谱测定方法。国家 食品药品监督管理局发布化妆品检测方法中，国食药监办〔2013〕21号附件3方法涉及10 种着色剂(食品红9(C.I. 16185)、食品红7(C.I. 16255)、食品红17(C.I. 16035)、食 品红 I (C.I. 14700)、酸性红 87 (C.I. 45380)、酸性橙 7 (C.I. 15510)、溶剂绿 7 (C.I. 59040)、橙黄I、食品黄3 (C.I. 15985)、酸性黄1(C.I. 10316))，但其中着色剂橙黄I在 卫生规范无明确规定。
[0009] 现有检测方法和手段很难满足目前化妆品领域对限用着色剂使用安全的质量监 管要求。化妆品中限用着色剂多组分检测尚存在很大的研究空白。这使得化妆品尤其是彩 妆类化妆品的质量安全引发社会的广泛关注。为此，加快化妆品中限用着色剂的检测方法 开发，满足日益增长的化妆品安全监管需要，意义尤为重大。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的是提供一种简便易行、检测效率高、检测成本低的化妆品中38种限 用着色剂同时检测的方法，克服现有技术的不足。
[0011] 本发明的化妆品中38种限用着色剂同时检测的方法，其中所述的着色剂为苋菜 红、酸性蓝74、胭脂红、酸性黄1、酸性橙10、日落黄、酸性红1、诱惑红、坚牢绿、酸性蓝9、酸 性红50、酸性黄11、酸性黑1、酸性蓝1、酸性橙7、酸性红52、酸性绿22、专利蓝V、酸性红 92、酸性绿9、酸性红88、颜料红49、溴甲酚绿、酸性紫43、酸性紫9、酸性蓝62、酸性蓝7、碱 性紫2、酸性紫50、溶剂黄33、溶剂黄21、颜料红64、溶剂红3、溶剂黄16、溶剂黄29、颜料红 4、溶剂绿3、碱性蓝26,检测步骤如下： (1) 溶液的配制 ① 配制溶液1 :取抗坏血酸钠0. lg，用甲醇水溶液溶解后定容至100 mL，所述的甲醇水 溶液中甲醇和水的体积比为4 : 1; ② 配制溶液2 :取醋酸铵3. 85 g和抗坏血酸钠0. 5 g，用水溶解后定容至100 mL ; ③ 配制溶液3 :取醋酸铵2. 31 g，用100 mL水溶解后，先加入0. 75 mL甲酸，然后加水 定容至1000 mL ; (2) 标准溶液的配制 ①配制标准储备溶液A : 分别准确称取如下标准物质：酸性红1、酸性紫43、酸性橙10、酸性蓝62、酸性黄1、酸 性蓝7、酸性黄11、苋菜红、酸性蓝74、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性蓝9、坚牢绿和专利蓝V， 所述每种标准物质的用量均为5 mg，置于棕色容量瓶中，用水溶解后定容至10 mL，配制成 每种标准物质浓度均为0.5 mg/mL的标准储备溶液A，于4?6 °C条件下避光保存，保存期 为3个月； ② 配制标准储备溶液B : 分别准确称取如下标准物质：酸性红88、溴甲酚绿、碱性紫2、酸性橙7、酸性红50、酸性 紫9、酸性绿9、酸性黑1、酸性红52、酸性蓝1、溶剂黄21、溶剂黄16、碱性蓝26、酸性红92、 溶剂黄29、酸性紫50、酸性绿22,所述每种标准物质的用量均为5 mg，置于棕色容量瓶中， 用甲醇溶解后定容至10 mL，配制成每种标准物质浓度均为0.5 mg/mL的标准储备溶液B， 于4?6 °C条件下避光保存，保存期为3个月； ③ 配制标准储备溶液C : 分别准确称取如下标准物质：溶剂红3、溶剂红33和溶剂绿，所述每种标准物质的用量 均为5 mg,置于棕色容量瓶中，用四氢呋喃溶解后定容至10 mL,配制成每种标准物质浓度 均为0. 5 mg/mL的标准储备溶液C，于4?6 °C条件下避光保存，保存期为3个月； ④ 配制标准储备溶液D : 准确称取如下标准物质：颜料红4,用量为5 mg,置于棕色容量瓶中,用四氢呋喃溶解 后定容至10 mL，配制成浓度为0.5 mg/mL的标准储备溶液D，于4?6 °C条件下避光保存， 保存期为3个月； ⑤ 配制标准储备溶液E : 分别准确称取如下标准物质：颜料红49、颜料红64,所述每种标准物质的用量均为5 mg，置于棕色容量瓶中，用二甲基亚砜溶解后定容至10 mL，配制成每种标准物质浓度均为 0.5 mg/mL的标准储备溶液E，于4?6 °C条件下避光保存，保存期为3个月； ⑥ 配制系列标准混合溶液： 准确移取所述的标准储备液A、B、C、D和E各200 μ L于10 mL容量瓶中，用溶液1稀 释至刻度，配制成所述的各标准物质浓度均为10 μ g/mL的混合标准溶液； 同理配制所述的各标准物质浓度分别为8 μ g/mL，6 μ g/mL，4 μ g/mL，2 μ g/mL，1 μ g/mL的系列标准混合溶液，用于标准曲线的绘制； (3)样品溶液的制备 取待测化妆品样品0.2 g于离心管中，加入四氢呋喃6 mL，涡旋并超声10 min，使样品 分散并提取目标物，继续向离心管中依次加入2 mL甲醇和2 mL溶液2 ;然后涡旋混合均 匀，超声提取10 min，然后于5000 r/min离心10 min;取上层提取液2 mL于5 mL刻度塑 料试管中，氮吹浓缩至约0.5 mL，然后用甲醇稀释并定容至4 mL，超声30 min后，经PTFE 滤膜过滤转入进样瓶中待测；若遇唇膏样品无法分散的情况，可用80 °C水浴适当加热1? 2 min即可分散。
[0012] (4)液相色谱分析参考条件 色谱柱：Z0RBAX SB- Aq，3. 5 μ m，3. 0 mmX 150 mm ; 柱温：30°C ; 流动相：A :30 mmol/L醋酸铵水溶液(含0. 075%甲酸）（即溶液3)，B :乙腈； 流速：〇· 7 mL/min ; 进样量：2 yL; 液相色谱分离条件如下： (5) 定性分析
【权利要求】
1. 一种化妆品中38种限用着色剂同时检测的方法，其特征在于：所述着色剂为觅菜 红、酸性蓝74、厕脂红、酸性黄1、酸性澄10、日落黄、酸性红1、诱惑红、坚牢绿、酸性蓝9、酸 性红50、酸性黄11、酸性黑1、酸性蓝1、酸性澄7、酸性红52、酸性绿22、专利蓝V、酸性红 92、酸性绿9、酸性红88、颜料红49、漠甲酷绿、酸性紫43、酸性紫9、酸性蓝62、酸性蓝7、碱 性紫2、酸性紫50、溶剂黄33、溶剂黄21、颜料红64、溶剂红3、溶剂黄16、溶剂黄29、颜料红 4、溶剂绿3、碱性蓝26,检测步骤如下： (1) 溶液的配制 ① 配制溶液1:取抗坏血酸轴0. Ig，用甲醇水溶液溶解后定容至100 mU所述的甲醇 水溶液中甲醇和水的体积比为4 ; 1; ② 配制溶液2:取醋酸馈3. 85 g和抗坏血酸轴0. 5 g，用水溶解后定容至100 mL ; ③ 配制溶液3:取醋酸馈2. 31 g，用100 mL水溶解后，先加入0. 75 mL甲酸，然后加水 定容至1000血； (2) 标准溶液的配制 ① 配制标准储备溶液A : 分别准确称取如下标准物质；酸性红1、酸性紫43、酸性澄10、酸性蓝62、酸性黄1、酸 性蓝7、酸性黄11、觅菜红、酸性蓝74、厕脂红、日落黄、诱惑红、酸性蓝9、坚牢绿和专利蓝V， 所述每种标准物质的用量均为5 mg,置于踪色容量瓶中，用水溶解后定容至10 mU配制成 每种标准物质浓度均为0.5 mg/mL的标准储备溶液A，于4?6 C条件下避光保存，保存期 为3个月； ② 配制标准储备溶液B: 分别准确称取如下标准物质；酸性红88、漠甲酷绿、碱性紫2、酸性澄7、酸性红50、酸性 紫9、酸性绿9、酸性黑1、酸性红52、酸性蓝1、溶剂黄21、溶剂黄16、碱性蓝26、酸性红92、 溶剂黄29、酸性紫50、酸性绿22,所述每种标准物质的用量均为5 mg,置于踪色容量瓶中， 用甲醇溶解后定容至10 mL,配制成每种标准物质浓度均为0.5 mg/mL的标准储备溶液B， 于4?6 C条件下避光保存，保存期为3个月； ③ 配制标准储备溶液C : 分别准确称取如下标准物质；溶剂红3、溶剂红33和溶剂绿，所述每种标准物质的用量 均为5 mg,置于踪色容量瓶中，用四氨巧喃溶解后定容至10 mU配制成每种标准物质浓度 均为0. 5 mg/mL的标准储备溶液C，于4?6 C条件下避光保存，保存期为3个月； ④ 配制标准储备溶液D : 准确称取如下标准物质；颜料红4,用量为5 mg,置于踪色容量瓶中，用四氨巧喃溶解 后定容至10血，配制成浓度为0.5 mg/血的标准储备溶液D，于4?6 C条件下避光保存， 保存期为3个月； ⑥配制标准储备溶液E: 分别准确称取如下标准物质；颜料红49、颜料红64,所述每种标准物质的用量均为5 mg,置于踪色容量瓶中，用二甲基亚讽溶解后定容至10 111以配制成每种标准物质浓度均为 0.5 mg/mL的标准储备溶液E，于4?6 C条件下避光保存，保存期为3个月； ⑧配制系列标准混合溶液： 准确移取所述的标准储备液A、B、C、D和E各200 uL于10 mL容量瓶中，用溶液1稀 释至刻度，配制成所述的各标准物质浓度均为10 y g/mL的混合标准溶液； 同理配制所述的各标准物质浓度分别为8 y g/mL，6 y g/mL，4 y g/mL，2 y g/mL，1 y g/mL的系列标准混合溶液，用于标准曲线的绘制； (3) 样品溶液的制备 取待测化妆品样品0.2 g于贸也管中，加入四氨巧喃6 mL,润旋并超声10 min,使样品 分散并提取目标物，继续向离也管中依次加入2 mL甲醇和2 mL溶液2 ;然后润旋混合均 匀，超声提取10 min,然后于5000 r/min离也10 min;取上层提取液2血于5血刻度塑 料试管中，氮吹浓缩至约0.5血，然后用甲醇稀释并定容至4血，超声30 min后，经PT阳 滤膜过滤转入进样瓶中待测；若遇唇膏样品无法分散的情况，可用80 C水浴适当加热1? 2 min即可分散； (4) 液相色谱分析参考条件 色谱柱：ZORBAX SB- Aq, 3. 5 y m, 3. 0 mmX 150 mm ; 柱温；30 C ; 流动相；A ;30 mmol/L醋酸馈水溶液冷0. 075%甲酸）（即溶液3)，B ;己膳； 流速：〇. 7 mL/min ; 进样量；2 uL; 液相色谱分离条件如下：
(5) 定性分析 分别将标准混合溶液和样品溶液按照所述液相分析参考条件进行分析，将在相同的 液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准混合溶液的液相色谱分离谱 图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰，并且其 扣除背景后的紫外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致，则可认定样品中存在该物 质； (6)定量测定 将系列标准混合溶液，按照所述方法进行高效液相色谱分析，W系列标准混合溶液质 量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线； 酸性澄10、酸性绿22和酸性紫43等H种物质，根据254 nm下的紫外吸收进行定量计 算； 酸性黄1、酸性黄11、漠甲酷绿、溶剂黄33、溶剂黄21、溶剂红3、溶剂黄16、溶剂黄29 等八种物质，根据416 nm下的紫外吸收进行定量计算； 日落黄、酸性澄7、酸性紫9、颜料红4等四种物质，根据484 nm下的紫外吸收进行定量 计算； 觅菜红、厕脂红、酸性红1、诱惑红、酸性红50、酸性红52、酸性红92、酸性红88、颜料红 49、碱性紫2、颜料红64等^^一种物质，根据514 nm下的紫外吸收进行定量计算； 酸性黑1和酸性紫50,根据590 nm下的紫外吸收进行定量计算； 酸性蓝74、坚牢绿、酸性蓝9、酸性蓝1、专利蓝V、酸性绿9、酸性蓝62、酸性蓝7、溶剂绿 3、碱性蓝26等十种物质，根据620 nm下的紫外吸收进行定量计算； 样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法确定；化妆品样品中目标物的含量按如 下公式进行计算： 祥品中目标物的含量
式中；C--从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度，y g/mL ; V-按稀释倍数折算的被测样液总体积，mL ; m -称取样品的质量，单位为克； 计算结果保留H位有效数字； 若待测溶液中目标物的质量浓度超过校准曲线线性范围的上限，须对待测液进行适当 稀释后重新测定。
【文档编号】G01N30/02GK104391050SQ201410539619
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】毛希琴, 李春玲, 任国杰, 郑顺利 申请人:大连市食品检验所