鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法

鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法【专利摘要】本发明公开了一种鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，包括以下步骤：S1：提供小麦籽粒，并用缓冲液提取所述小麦籽粒中的谷蛋白大聚体，得到悬浮液；S2：对所述悬浮液进行超声处理，使部分谷蛋白大聚体破碎并溶于所述缓冲液中；S3：用水相滤膜对溶解了所述谷蛋白大聚体的所述缓冲液进行过滤，得到待测样品；S4：对所述待测样品进行凝胶排阻色谱分析，通过自动积分，得到所述小麦籽粒的谷蛋白大聚体的表达量。根据本发明实施例的方法，针对小麦籽粒中谷蛋白大聚体的含量快速准确鉴定，该方法能对小麦籽粒中谷蛋白大聚体在籽粒发育不同阶段的积累进行快速准确鉴定，并根据谷蛋白大聚体在成熟籽粒中表达量的不同，对品种进行有效筛选。【专利说明】鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法【
技术领域：
】[0001]本发明涉及鉴定小麦谷蛋白大聚体的【
技术领域：
】，更具体地，涉及一种通过凝胶色谱(SE-HPLC)技术鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法。【
背景技术：
】[0002]小麦籽粒中含有丰富的淀粉，较多的蛋白质和少量的脂肪，是人类重要的植物蛋白质来源。在我国，小麦主要用于面粉加工，小麦的加工品质主要受到生长环境、农艺措施和内在基因型等因素的影响，这些因素决定了小麦蛋白质的含量和质量。根据小麦籽粒蛋白在水、NaCl溶液、乙醇以及稀酸或稀碱溶液中溶解度的不同，将小麦籽粒蛋白分为四大类，分别为溶于水的水溶性蛋白、溶于盐溶液的盐溶性蛋白、溶于醇的醇溶蛋白和溶于烯酸或稀碱溶液的麦谷蛋白等四种成分。其中，麦谷蛋白和醇溶蛋白合称为种子贮藏蛋白，由于贮藏蛋白具有特殊的多聚体结构，可以使面粉加水后产生有弹性的网状结构，具有面筋形成能力，因此，贮藏蛋白对面粉的粘弹性和延展性起着决定性作用。[0003]在酸性条件下，由于电泳迀移率的差异，醇溶蛋白可被分为α、β、γ、和ω四种蛋白。前三种含硫氨基酸较多的醇溶蛋白被称为富硫醇溶蛋白，而ω-醇溶蛋白含硫氨基酸较少，故被称作贫硫醇溶蛋白。醇溶蛋白形成分子内二硫键，是影响面团延展性的重要因素。麦谷蛋白是由多个亚基通过分子间二硫键紧密结合而形成的复杂多聚体结构，是影响小麦面团粘弹性的关键因素。根据麦谷蛋白亚基还原条件下在SDS-PAGE中所表现的迀移率不同，将麦谷蛋白亚基分为两类:高分子量麦谷蛋白亚基(Highmolecularweightgluteninsubunits，HMW_GS)和低分子量麦谷蛋白亚基(Lowmolecularweightgluteninsubunits，LMW-GS)，HMW-GS与LMW-GS通过分子间二硫键紧密结合形成谷蛋白大聚体。总起来说，贮藏蛋白在SDS缓冲液中可分为可溶性和不溶性谷蛋白聚合体两类，可溶性谷蛋白(extractablepolymericprotein,EPP)分子量较小，不溶性谷蛋白(unextractablepolymericprotein，UPP)分子量较大，称为谷蛋白大聚体。目前研宄表明，谷蛋白大聚体的含量是影响小麦加工品质的决定性因素(Giaffietal.，1996)。[0004]IC减蛋白亚基因半脱氣酸残基含量的不同而被分为贫硫蛋白亚基，富硫蛋白亚基和高分子量麦谷蛋白亚基。ω-gliadins不含有半胱氨酸或甲硫氨酸残基，占贮藏蛋白总数的10%-20%，属于贫硫蛋白。而α-gliadins和γ-gliadins属于富硫蛋白，占藏蛋白总数的70%-80%，为主要组成部分。第三组为高分子量麦谷蛋白亚基，半胱氨酸残基含量较为适中，占蛋白总数的6%-10%。除了贮藏蛋白外，小麦种子蛋白中还有小部分的清球蛋白，也含有富硫氣基酸。研宄表明，硫和氣的有效利用可以改变IC臧蛋白中贫硫蛋白和富硫蛋白的比例(N.E.S.etal.，2005)。小麦蛋白需要的有效硫氮比为1:15，如果谷物中含硫量小于1.2g，硫氮比大于1:17，会引起非蛋白成分氨基酸的积累。小麦最佳生长的需硫量为15_20kg/ha，若硫的利用被限制，则会导致贫硫蛋白的积累，富硫蛋白的减少，引起HMW-GS与LMW-GS的比例发生改变，不能通过分子间二硫键有效结合，最终导致谷蛋白大聚体含量的减少，影响小麦加工品质。[0005]综上所述，谷蛋白大聚体表达量的鉴定是检测小麦加工品质的重要指标。由于谷蛋白大聚体分子量可以达到数百万道尔顿，常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)无法进行有效分离，因此，目前采用多层浓缩胶SDS-PAGE(MS-SDS-PAGE)，此法以SDS-PAGE为基础，优点是可以设计不同胶浓度梯度，借助凝胶扫描系统可比较不同浓度胶中谷蛋白大聚体的粒度分布，缺点是制胶耗时，单个样品费用较高；其次，目前在国内多用双缩脲比色法，优点是操作简单，所需仪器设备简单，缺点是准确性较低，对谷蛋白聚合体粒度分类能力差。因此，存在改进需要。【
发明内容】[0006]本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一。为此，本发明提出一种鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，该方法鉴定时间短，准确性高。[0007]根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，包括以下步骤:S1:提供小麦籽粒，并用缓冲液提取所述小麦籽粒中的谷蛋白大聚体，得到悬浮液；S2:对所述悬浮液进行超声处理，使部分谷蛋白大聚体破碎并溶于所述缓冲液中；S3:用水相滤膜对溶解了所述谷蛋白大聚体的所述缓冲液进行过滤，得到待测样品；S4:对所述待测样品进行凝胶排阻色谱分析，通过自动积分，得到所述小麦籽粒的谷蛋白大聚体的表达量。[0008]根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，针对小麦籽粒中谷蛋白大聚体的含量快速准确鉴定，该方法能对小麦籽粒中谷蛋白大聚体在籽粒发育不同阶段的积累进行快速准确鉴定，并根据谷蛋白大聚体在成熟籽粒中表达量的不同，对品种进行有效筛选。[0009]另外，根据本发明上述实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，还可以具有如下附加的技术特征:[0010]根据本发明的一个实施例，在所述步骤SI中，所述缓冲液为0.05M含有2%SDS的磷酸盐缓冲液。[0011]根据本发明的一个实施例，在所述步骤S2中，通过超声波细胞破碎机对所述悬浮液进行超声处理，超声设置为180-220W，超声时间为25-35s。[0012]根据本发明的一个实施例，所述步骤S2还包括:在对所述悬浮液进行超声处理后，将所述悬浮液进行震荡处理，震荡时间为1.5-2.5h。[0013]根据本发明的一个实施例，在所述步骤S3中，所述水相滤膜的孔径为0.4-0.5μm。[0014]根据本发明的一个实施例，在所述步骤S4中，凝胶排阻色谱分析所述谷蛋白大聚体的所需流动相溶液为0.05M含有0.1%SDS的磷酸盐缓冲液。[0015]根据本发明的一个实施例，凝胶排阻色谱分析的流速为0.3-0.4ml/min，12_18min完成样品分离，3-8min平衡色谱柱。[0016]根据本发明的一个实施例，所述流动相溶液配好后，用0.2μπι的水相滤膜进行过滤，过滤结束后，室温超声8-12min。[0017]根据本发明的一个实施例，所述步骤S4包括:S41:进样前先用纯水对色谱柱进行冲洗；S42:对所述待测样品进行凝胶排阻色谱分析；S43:检测结束后，用甲醇和纯水对所述色谱柱进行冲洗。[0018]根据本发明的一个实施例，所述甲醇和纯水分别占50%。[0019]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。【专利附图】【附图说明】[0020]本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中:[0021]图1表示根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法的流程图；[0022]图2左侧表示高产优质小麦品种中优9507(1，7+9，5+10)中谷蛋白大聚体(HMW-GS)的凝胶排阻色谱(SE-HPLC)连续10次分离重复性比较图谱，图2右侧从上到下依次表示该小麦中谷蛋白大聚体第I次、第5次、第10次分离的图谱；[0023]图3a至图3d依次表示面包小麦品种Imbross、京411、中国春和京冬8号中谷蛋白大聚体的凝胶排阻色谱分离图谱。【具体实施方式】[0024]下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。[0025]下面首先结合附图具体描述根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法。[0026]如图1所示，根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法包括以下步骤:[0027]S1:提供小麦籽粒，并用缓冲液提取小麦籽粒中的谷蛋白大聚体，得到悬浮液。[0028]S2:对悬浮液进行超声处理，使部分谷蛋白大聚体破碎并溶于缓冲液中。[0029]S3:用水相滤膜对溶解了谷蛋白大聚体的缓冲液进行过滤，得到待测样品。[0030]S4:对待测样品进行凝胶排阻色谱分析，通过自动积分，得到小麦籽粒的谷蛋白大聚体的表达量。[0031]换言之，根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法主要包括材料取样、样品制备、凝胶排阻色谱分析和数据处理分析等步骤，其中材料取样、样品制备以及数据处理的特征在于:用缓冲液提取小麦籽粒中的谷蛋白大聚体，对悬浮液进行超声处理，使部分谷蛋白大聚体破碎，溶于缓冲液中。随后，用水相滤膜对样品进行过滤后准备上样。[0032]对待测样品进行凝胶排阻色谱分析，通过自动积分可以得到样品谷蛋白大聚体的表达量，并对不同品种间加以比较。[0033]由此，根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，针对小麦籽粒中谷蛋白大聚体的含量快速准确鉴定，该方法能对小麦籽粒中谷蛋白大聚体在籽粒发育不同阶段的积累进行快速准确鉴定，并根据谷蛋白大聚体在成熟籽粒中表达量的不同，对品种进行有效筛选。通过本发明可以建立重要谷蛋白大聚体标准凝胶排阻色谱图谱，进而形成对优质品种进行鉴定的一套完整的技术体系。[0034]具体地，根据本发明的一个实施例，在步骤SI中，缓冲液为0.05M含有2%SDS的磷酸盐缓冲液。由此，该缓冲液对小麦谷蛋白大聚体的提取效果更好。[0035]在本发明的一些【具体实施方式】中，在步骤S2中，通过超声波细胞破碎机对悬浮液进行超声处理，超声设置为180-220W，超声时间为25-35s。进一步地，步骤S2还包括:在对悬浮液进行超声处理后，将悬浮液进行震荡处理，震荡时间为1.5-2.5h。[0036]也就是说，在对悬浮液进行超声处理之后，还将其进行震荡处理，由此，通过超声处理使部分谷蛋白大聚体破碎，溶于磷酸盐提取缓冲液中之后，再将其进行震荡，可以使破碎的谷蛋白大聚体充分溶于提取缓冲液中，保证鉴定准确性。[0037]根据本发明的一个实施例，在步骤S3中，水相滤膜的孔径为0.4-0.5μπι。优选地，水相滤膜可以为0.45μm的滤膜。由此，可以保证过滤的精度，从而保证鉴定效果。[0038]根据本发明实施例的凝胶排阻色谱分析的方法相比于现有技术而言，在步骤S4中，凝胶排阻色谱分析谷蛋白大聚体的所需流动相溶液为0.05M含有0.1%SDS的磷酸盐缓冲液。进一步地，凝胶排阻色谱分析的流速为0.3-0.4ml/min,12_18min完成样品分离，3-8min平衡色谱柱。优选地，流动相溶液配好后，用0.2μm的水相滤膜进行过滤，过滤结束后，室温超声8-12min。[0039]也就是说，根据本发明实施例的凝胶排阻色谱分析可以采用0.35ml/min的流速，在室温条件下分离，15min左右完成样品分离，5min左右平衡色谱柱。通过自动积分可以得到样品谷蛋白大聚体的表达量，并对不同品种间加以比较。[0040]凝胶排阻色谱分析谷蛋白大聚体的所需流动相溶液为0.05M含有0.1%SDS的磷酸盐缓冲液，该缓冲液配好后用0.2μπι的水相滤膜进行过滤，过滤结束后，功率70%室温超声lOmin，以帮助排除溶液中的气泡，可以避免压力过高的现象发生，保护色谱柱，延长色谱柱寿命，保证鉴定过程连续有效进行。[0041]即根据本发明实施例的凝胶排阻色谱分析具体条件参数为:[0042]流动相流速:0.35mL/min；[0043]色谱柱温度:23°C;[0044]等度洗脱；[0045]洗脱时间:20min。[0046]具体地，根据本发明实施例的凝胶排阻色谱分析方法中，步骤S4包括:[0047]S41:进样前先用纯水对色谱柱进行冲洗。[0048]S42:对待测样品进行凝胶排阻色谱分析。[0049]S43:检测结束后，用甲醇和纯水对色谱柱进行冲洗，其中，甲醇和纯水分别占50%。[0050]也就是说，根据本发明实施例的凝胶排阻色谱分析方法中，为了能够连续检测样品和保证检测结果的准确性，在进行凝胶排阻色谱分析时:1)进样前用纯水对色谱柱进行冲洗；2)当一次鉴定测定多个样品时，两次样品检测之间要进行冲洗；3)检测结束后用50%甲醇和50%纯水对色谱柱进行冲洗。对色谱柱进行冲洗必须按冲洗程序操作，具体条件参数为:[0051]流动相流速:0.35mL/min;[0052]色谱柱温度:23°C;[0053]等度洗脱。[0054]由此，通过本发明的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，可以建立重要谷蛋白大聚体标准凝胶排阻色谱图谱，进而形成对优质品种进行鉴定的一套完整的技术体系。[0055]下面结合具体实施例描述根据本发明的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法。[0056]实施例一[0057]1.材料取样[0058]用小麦品种中优9507的种子作为试验材料，随机选取种子，研磨后称取20_30mg用于谷蛋白大聚体的提取和凝胶排阻高效液相色谱分析。[0059]2.样品制备[0060]谷蛋白大聚体(GMP)的提取方法:[0061]I)小麦种子加液氮磨碎后称取20mg粉末放入2.0ml离心管，加1.8ml0.05M含有2%SDS的磷酸盐缓冲液，祸旋30min，13000rpm离心lOmin，去上清，上清为EPP；[0062]2)再次向沉淀中加入1.8ml0.05M含有2%SDS的磷酸盐缓冲液，涡旋使沉淀与缓冲液充分混合；[0063]3)使用超声波细胞破碎仪对沉淀进行超声破碎，超声设置为200W，30s，5次。[0064]4)对超声后的悬浊液进行涡旋，2h;[0065]5)13,OOOrpm,20min离心取上清；[0066]6)用0.45μm水相滤膜对上清进行过滤后所取得上清为UPP；[0067]7)13，OOOrpm,1min离心后进行凝胶排阻高效液相色谱分析。[0068]3.凝胶排阻高效液相色谱(SE-HPLC)[0069]仪器设备[0070]Agilent公司生产的高效液相色谱系统(配有软件用于系统操作和数据处理)。所用色谱柱为:AgilentB1SEC-5，500A，4.6x300mm。[0071]备用试剂[0072]流动相:[0073]溶液A:0.05M含有0.1%SDS的磷酸盐缓冲液[0074]溶液B:纯水[0075]溶液C:50%甲醇+50%纯水[0076]溶液D:100%异丙醇[0077]纯水均取自Mill1-QGradientAlO[0078]各溶液配好后，混匀，功率70%室温超声1min。[0079]超高效液相色谱分析具体条件参数为:[0080]流动相流速:0.35mL/min；[0081]色谱柱温度:23°C;[0082]等度洗脱；[0083]洗脱时间:20min。[0084]色谱柱冲洗条件参数为:[0085]流动相流速:0.35mL/min；[0086]色谱柱温度:23°C;[0087]等度冲洗。[0088]数据处理[0089]利用AgilentChemStat1n软件进行数据处理，同时结果数据导入Excel对数据进行处理分析。[0090]对小麦品种中优9507连续10次重复分离得到的图谱如图2所示。通过图2可以看出，利用本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法可以获得高重复性分离。重复间峰迀移时间和峰高的相对标准偏差(RSD)分别小于1%和3%，无明显的峰拖尾现象。[0091]实施例二[0092]1.材料取样[0093]分别用小麦品种Imbross、京411、中国春、京冬8号种子作为试验材料，随机选取种子研磨后称取20-30mg用于谷蛋白提取和超高效液相色谱分析。[0094]2.样品制备[0095]谷蛋白大聚体(GMP)提取方法:[0096]I)小麦种子加液氮磨碎后称取20mg粉末放入2.0ml离心管，加1.8ml0.05M含有2%SDS的磷酸盐缓冲液，祸旋30min，13000rpm离心lOmin，去上清，上清为EPP；[0097]2)再次向沉淀中加入1.8ml0.05M含有2%SDS的磷酸盐缓冲液，涡旋使沉淀与缓冲液充分混合；[0098]3)使用超声波细胞破碎仪对沉淀进行超声破碎，超声设置为200W，30s，5次。[0099]4)对超声后的悬池液进彳丁祸旋，2h；[0100]5)13,OOOrpm,20min离心取上清；[0101]6)用0.45um水相滤膜对上清进行过滤后所取得上清为UPP;[0102]7)13,OOOrpm1min离心后进行凝胶排阻高效液相色谱分析。[0103]3.凝胶排阻高效液相色谱(SE-HPLC)[0104]仪器设备[0105]Agilent公司生产的高效液相色谱系统(配有软件用于系统操作和数据处理)。所用色谱柱为:AgilentB1SEC-5，500A，4.6x300mm。[0106]备用试剂[0107]流动相:[0108]溶液A:0.05M含有0.1%SDS的磷酸盐缓冲液[0109]溶液B:纯水[0110]溶液C:50%甲醇+50%纯水[0111]溶液D:100%异丙醇[0112]纯水均取自Mill1-QGradientAlO[0113]各溶液配好后，混匀，功率70%室温超声1min[0114]超高效液相色谱分析具体条件参数为:[0115]流动相流速:0.35mL/min;[0116]色谱柱温度:23°C;[0117]等度洗脱；[0118]洗脱时间:20min。[0119]色谱柱冲洗条件参数为:[0120]流动相流速:0.35mL/min;[0121]色谱柱温度:23°C;[0122]等度冲洗。[0123]数据处理[0124]利用AgilentChemStat1n软件进行数据处理，同时结果数据导入Excel对数据进行处理分析。Imbross、京411、中国春、京冬8号的谷蛋白大聚体凝胶排阻高效液相色谱分离图谱如图3a、3b、3c和3d所示。[0125]通过上述实施例可以看出，根据本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法还具有如下优点:[0126](I)样品用量少:该方法只需单粒种子20mg胚乳面粉，并可进行10次以上重复分析。[0127](2)分离时间短:利用本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法的色谱分析参数，单个样品一般在20min分离完成，而常规SDS-PAGE方法一般需要1_2天时间。[0128](3)分离亚基分辨度高、易于应用:由于谷蛋白大聚体分子量较大，需要用多层浓缩胶SDS-PAGE进行分离，制胶耗时且费用较高。而从通过凝胶排阻色谱分离所得到的谱图和数据中，可以明确的比对不同品种间谷蛋白大聚体表达量的差别。[0129](4)重复性好:利用本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法可以获得高重复性分离。重复间峰迀移时间和峰高的相对标准偏差(RSD)分别小于1%和3%，无明显的峰拖尾现象。[0130](5)分离自动化程度高:凝胶排阻色谱从进样到结果分析自动化程度高，简便易于操作，这是传统SDS-PAGE方法所无法比拟的。[0131](6)分析成本低:相比传统的多层浓缩胶SDS-PAGE，本发明实施例的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法所需试剂用量大大减少，而且不需使用丙稀酰胺等有毒药品。因此凝胶排阻色谱技术是一种分析成本低、无毒害的分析方法。[0132]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。[0133]尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。【权利要求】1.一种鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，包括以下步骤:S1:提供小麦籽粒，并用缓冲液提取所述小麦籽粒中的谷蛋白大聚体，得到悬浮液；52:对所述悬浮液进行超声处理，使部分谷蛋白大聚体破碎并溶于所述缓冲液中；53:用水相滤膜对溶解了所述谷蛋白大聚体的所述缓冲液进行过滤，得到待测样品；S4:对所述待测样品进行凝胶排阻色谱分析，通过自动积分，得到所述小麦籽粒的谷蛋白大聚体的表达量。2.根据权利要求1所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，在所述步骤SI中，所述缓冲液为0.05M含有2%SDS的磷酸盐缓冲液。3.根据权利要求1所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，在所述步骤S2中，通过超声波细胞破碎机对所述悬浮液进行超声处理，超声设置为180-220W，超声时间为25-35s。4.根据权利要求1所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，所述步骤S2还包括:在对所述悬浮液进行超声处理后，将所述悬浮液进行震荡处理，震荡时间为1.5~2.5h。5.根据权利要求1所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，在所述步骤S3中，所述水相滤膜的孔径为0.4-0.5μm。6.根据权利要求1所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，在所述步骤S4中，凝胶排阻色谱分析所述谷蛋白大聚体的所需流动相溶液为0.05M含有0.1%SDS的磷酸盐缓冲液。7.根据权利要求6所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，凝胶排阻色谱分析的流速为0.3-0.4ml/min，12_18min完成样品分离，3_8min平衡色谱柱。8.根据权利要求6所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，所述流动相溶液配好后，用0.2μπι的水相滤膜进行过滤，过滤结束后，室温超声8-12min。9.根据权利要求1所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，所述步骤S4包括:541:进样前先用纯水对色谱柱进行冲洗；542:对所述待测样品进行凝胶排阻色谱分析；543:检测结束后，用甲醇和纯水对所述色谱柱进行冲洗。10.根据权利要求9所述的鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法，其特征在于，所述甲醇和纯水分别占50%。【文档编号】G01N30/02GK104458959SQ201410764046【公开日】2015年3月25日申请日期:2014年12月11日优先权日:2014年12月11日【发明者】李小辉,于子桐,卢晓冰,韩彩霞,晏月明申请人:首都师范大学