藏药绿萝花的HPLC特征图谱及其构建方法与流程

本发明涉及一种藏药绿萝花的HPLC特征图谱及其构建方法，属于医药技术领域。

背景技术：
藏药滇结香(Edgeworthiagardneri)，为瑞香科(Thymelaeaceae)结香属植物，花蕾、根河茎皮均可入药，其花蕾称为绿萝花。现代药理研究表明，绿萝花提取物有较强的α-葡萄糖苷酶抑制及抗氧化作用，对Ⅱ型糖尿病血糖及血脂有显著的治疗作用。绿萝花成分复杂，基础研究薄弱，目前仅知还原糖、黄酮类物质是绿萝花中的重要有效成分之一。李文茂等在《藏药绿萝花中总黄酮含量的提取工艺研究》(北方园艺2013年5期)采用乙醇回流提取法对绿萝花中的总黄酮的提取条件进行优化研究，并采用分光光度法对绿萝花中黄酮类物质进行测定。目前，对绿萝花的质量研究较少，甚至有文献将其与观赏植物绿萝(天南星科)相混淆，部分药商也将同科属结香花(EdgeworthiachlysanthaLindl.)的花蕾替代绿萝花，不仅大大制约了绿萝花的开发应用，且易引起安全问题。

技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明提供了一种藏药绿萝花的HPLC特征图谱，该图谱包括以下10个特征峰，其中8号峰为槲皮素参照峰，其它9个特征峰的相对保留时间为：1号峰0.242、2号锋0.306、3号峰0.392、4号峰0.492、5号峰0.906、6号峰0.925、7号峰0.967，9号峰1.03，10号峰1.167。本发明还提供了该图谱的构建方法，包括如下步骤：A、色谱条件：C18色谱柱，规格：250mm*4.6mm，以乙腈-含1％异丙醇和0.4％冰醋酸的混合液为流动相，采用梯度洗脱方式：0min→20min→40min→60min，流动相中乙腈体积浓度变化为18％→18％→40％→40％，检测波长360nm，理论板数按槲皮素峰计算不低于2000；B、参照溶液的制备：取槲皮素对照品，加70％乙醇制成1ml含50ug的溶液；C、供试品的制备：取绿萝花药材粗粉，精密称取0.2-5g，加50-80％乙醇50ml回流提取2小时，过滤，滤液蒸干，以50-80％乙醇溶解，定容至10ml量瓶中，摇匀，过滤，取续滤液，即得；D、特征图谱构建：分别精密吸取参照溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得绿萝花HPLC特征图谱。本发明优选的，上述构建方法中，步骤C、供试品的制备为：取绿萝花药材粗粉，精密称取2g，加70％乙醇50ml回流提取2小时，过滤，滤液蒸干，以70％乙醇溶解，定容至10ml量瓶中，摇匀，过滤，取续滤液，即得；上述特征图谱的构建方法中，供试品的制备还可以直接使用绿萝花提取物。本发明中流动相的浓度、乙醇浓度均为体积百分比。有益效果本发明所述的藏药绿萝花HPLC特征图谱的构建，以乙腈-1％异丙醇-0.4％冰醋酸为流动相，采用梯度洗脱方式建立绿萝花HPLC特征图谱，使用本发明的特征图谱可有效检测绿萝花及其提取物，准确可靠，重复性好。附图说明图1为槲皮素对照品色谱图；图2为绿萝花(批号20141101)特征图谱；图3为绿萝花提取物(批号：20141102)特征图谱。图4为绿萝花提取物(批号：20141103)特征图谱。其中，图1、图2、图3、图4的横坐标是时间，单位：分钟(min)；纵坐标是电压，单位：毫伏特(Volts)。具体实施方式下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1：藏药绿萝花及其提取物HPLC特征图谱的构建方法和图谱一、试验仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵L-2400紫外检测器电子天平：岛津AUW-220D型紫外分光光度计：岛津UV-2450型对照品：槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所)批号：100081-200907供试品：绿萝花(金诃藏药股份有限公司提供)，批号：20141101绿萝花提取物(江西康恩泰中药保健品有限公司，批号:20141102)二、色谱条件与系统适用性试验：C18色谱柱，规格：250mm*4.6mm，5um，以乙腈-含1％异丙醇和0.4％冰醋酸的混合液为流动相，采用梯度洗脱方式：0min→20min→40min→60min，乙腈18％→18％→40％→40％，检测波长360nm，得到绿萝花的特征图谱，理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000。三、方法色谱条件选择：绿萝花现行报道主要成分为黄酮类，但现有文献未见关于绿萝花HPLC特征图谱测定方法的报道。实验表明：简单的甲醇-水、乙腈-水等度体系无法完成测定，其他多种流动相如①甲醇-0.1％磷酸，②甲醇-四氢呋喃-0.1％磷酸，③甲醇-异丙醇-四氢呋喃-0.1％磷酸，④乙腈-0.5％异丙醇-0.5％柠檬酸等对于绿萝花样品的HPLC特征峰检测结果也并不理想，部分特征峰分离度较差。通过大量实验发现，使用0.4％冰醋酸及1％异丙醇调节峰形，能够保证全部特征峰...