一种高尔基体蛋白GP73定量测定试剂盒及其检测方法与流程

文档序号:12358739阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高尔基体蛋白GP73定量测定试剂盒,其特征在于:包括GP73抗体包被板、GP73标准品、浓缩酶结合物、浓缩酶结合物稀释液、浓缩洗涤液、显色剂A液、显色剂B液、终止液、封板膜。

2.一种高尔基体蛋白GP73定量测定检测方法,其特征在于:所述检测方法包括实验准备过程和检测步骤,所述实验准备过程如下:

(1)将试剂盒和待测血清样品放置室温,平衡至少30分钟;

(2)稀释浓缩洗涤液:在合适的洁净容器内用新鲜的蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液稀释20倍,混匀备用;在使用前若浓缩洗涤液有结晶析出,将浓缩洗涤液放置于水浴锅中加热,使其完全溶解;

(3)在GP73抗体包被板上对样品编号;

(4)配制酶工作液:吸取120μl浓缩酶结合物,加入至浓缩酶结合物稀释液瓶中,轻轻上下混匀备用;若一次未使用完应-20℃储存,该酶工作液最多可冻融3次;

一种高尔基体蛋白GP73定量测定检测方法的检测步骤如下:

(1)加样:分别在GP73抗体包被板相应孔中加入50μL标准品或血清样品,轻轻振荡;

(2)温浴:用封板膜将GP73抗体包被板封板后置37℃温浴30分钟;

(3)洗涤:揭掉封板膜,甩干孔内液体,用洗涤液充分洗涤5遍,每次每孔应加入至少300μL洗涤液,最后在干净的吸水纸上拍干;

(4)加酶结合物:每孔加入100μL实验准备过程步骤(4)得到的酶工作液,轻轻振荡;

(5)温浴:用另一张封板膜将GP73抗体包被板封板后置37℃温浴30分钟;

(6)洗涤:揭掉封板膜,甩干孔内液体,用洗涤液充分洗涤5遍,每次每孔应加入至少300μL洗涤液,最后在干净的吸水纸上拍干;

(7)显色:每孔加入50μL显色剂A,再加入50μL显色剂B,轻轻振荡混匀,37℃避光温浴10分钟;

(8)测定:每孔加入50μL终止液,轻轻振荡混匀,使用酶标仪选择双波长进行测量各孔吸光度值,主波长450nm,参考波长630nm,用空白孔调零点;

(9)数据处理:选择数据处理软件,以检测步骤(8)得到的各标准品的吸光度的Log值为横坐标,各标准品浓度的Log值为纵坐标,按“吸光度值的对数-浓度对数”数学模型进行线性拟合,建立标准曲线,以各待测血清吸光度值在标准曲线上查出该血清的GP73的浓度,其中横坐标为发光强度,横坐标为GP73浓度。

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