一种牛奶中腹泻性贝类毒素含量检测方法与流程

文档序号:12113769阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种牛奶中腹泻性贝类毒素含量检测方法,其特征在于,包括步骤:A)培养人HL-7702肝细胞,选用不同浓度的大田软海绵酸(okadaicacid,OA)染毒细胞,检测OA作用细胞后F-肌动蛋白(F-actin)解聚效应大小,从而建立OA诱导HL-7702肝细胞F-actin解聚的标准曲线;B)根据HL-7702肝细胞的F-actin解聚的标准曲线进行OA浓度的计算,建立腹泻性贝类毒素的细胞F-actin检测方法,确定可能的检出限范围;C)选择与腹泻性贝类毒素可能共存的成分:石房蛤毒素(saxitoxin,STX)、软骨藻酸(domoicacid,DA)、虾夷扇贝毒素(yessotoxin,YTX)中的一种或几种,分别以不同浓度作用HL-7702肝细胞,通过检测其破坏HL-7702肝细胞F-actin聚合能力的大小确定该方法测定OA含量的特异性;D)将活化好的生物素溶解于DMSO中,使其浓度为2.5mg/mL,分装后,置于-20℃保存;每2mL浓度为5mg/mL的毒素单克隆抗体,在0.1MpH8.5的碳酸盐缓冲液中,透析过夜,第二天取出,备用;取透析好的毒素单克隆抗体1.6mL,约8mg,加1MpH8.5碳酸盐缓冲液300uL,混匀后,再加生物素500uL,室温搅拌2h;加入饱和硫酸铵,使硫酸铵饱和度为50%,4℃搅拌0.5小时;离心,弃上清,取沉淀,用1×PBS溶解后,再加入饱和硫酸铵,使硫酸铵饱和度为50%,5-10℃搅拌1~2小时;弃上清,取沉淀,用3.0mL1×PBS溶解,在1×PBS中透析24h,终体积为4mL,PAGE及ELISA检测产物效价。

2.根据权利要求1所述的牛奶中腹泻性贝类毒素含量检测方法,其特征在于,还包括如下步骤:同步使用小鼠生物法、ELISA法及细胞F-actin检测法对采集的贝类样品分别进行腹泻性贝类毒素检测,并进行结果比对。

3.根据权利要求1所述的牛奶中腹泻性贝类毒素含量检测方法,其特征在于,采用双抗体夹心法原理定量检测样品中生物毒素;用制备的试纸条检测样品中的生物毒素,每一种毒素检测试纸条上均有对照线C和检测线T,不同毒素检测判断的原则相同。

4.根据权利要求1所述的牛奶中腹泻性贝类毒素含量检测方法,其特征在于,所述步骤C)选用不同浓度石房蛤毒素、虾夷扇贝毒素中的一种或几种浓度。

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