一种通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法及应用与流程

本发明涉及检测领域，特别是指一种通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法，本发明还涉及一种通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法在烟叶致香物分析中的应用。

背景技术：

烟草在我国种植历史悠久，是我国重要的经济作物之一。烟叶质量是反映和体现烟叶必要性状均衡情况的综合性概念,它包括外观质量和内在质量。长期以来，烟叶品质主要由四个方面进行评价和分类,即外观质量、感官评吸、化学分析、物理特性，从某个角度看，仍不能全面地满足要求。如化学分析只有8、9个指标，强调共性；外观评价和感官评吸受主观因素的影响较大。为此，国内外专家做了大量的研究工作，以期客观准确地评价烟叶质量，化学成分分析就是其中一项主要的研究内容。

指纹图谱是指某些复杂物质，比如中药，某种生物体或某种组织或细胞的dna，蛋白质经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。

指纹图谱主要分为中药指纹图谱，dna指纹图谱和肽指纹图谱。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。在此基础上，如果进一步开展谱效学研究，可使中药质量与其药效真正结合起来，有助于阐明中药作用机理。总之，中药指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。

烟叶是烟草的主要经济部位，不同的品种，不同地区，甚至不同环境(如降雨量、施肥量等)都会对烟叶的品质和风味造成不同的影响，烟叶的风味也是区分不同烟叶的主要标准，而烟叶风味的形成，主要由内部的几种主要的组分构成，尤其是具有烟叶中的致香物。

但目前，这些物质的检测和评价，还主要集中在人工评价，以及一些简单的化学分析，在精准度方面还远远不够，并且，在不同的烟叶之间的区分，尤其是一些较为细微的区分，如前述一些种植过程中环境因素的变化，对于烟叶风味的调整，常规的手段较为难以区分，这对于进一步提升和改善烟叶的品质，实现我国“卷烟上水平”战略任务造成了困难。

因此，需要充分结合一些新兴的技术，以及烟叶这一产品的特色，对烟叶的检测方法和方式，都进行改善。

技术实现要素：

本发明提出一种通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法及其在烟叶致香物分析中的应用，为烟叶的深入研究提供了更加科学可靠的方法。

本发明的技术方案是这样实现的：一种通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法，包括步骤：称取粉碎好的烤烟叶，置于滤纸筒内，然后装入索氏提取器中，索氏提取器上面连接冷凝管，下面连接的圆底烧瓶，烧瓶中加入甲醇，在水浴锅中连续加热提取，浓缩甲醇提取液得烟叶成分浸膏，供gc/ms分析。

进一步的，gc条件为：ultra－2毛细管柱，载气为n2，柱头压170kpa。

进一步的，为便于后期提取，前期称取50.00g烤烟叶。

进一步的，为保证提取效果，水浴锅温度为70度，提取时间为72h。

所述通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法在烟叶致香物分析中的应用。通过构建出不同烟叶中致香物的指纹图谱，形成烟叶中致香物的指纹图谱库，并针对所述烟叶中致香物的指纹图谱库进行划分，形成对不同烟叶中致香物的分类与划分。

本发明的所述通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法，结合指纹图谱技术和烟叶的特质，创造性的形成了对烟叶致香物构建烟叶指纹图谱构建，并具体采用了甲醇索氏提取的方式，保证了烟叶中物质的有效获取，并最大限度的降低物质的损伤或者变化，同时，也具有一定的选择性的提取其中的物质。所述通过甲醇索氏提取烟叶中致香物构建烟叶指纹图谱的方法在烟叶致香物分析中的应用，也为烟叶的风味的深入研究提供了新的方法。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为南雄粤烟97烤烟c3f(2008)索氏提取致香物指纹图谱；

图2为南雄粤烟97烤烟c3f(2009)索氏提取致香物指纹图谱；

图3为南雄粤烟97(x2f)2009烤烟索氏提取成分指纹图谱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的实施步骤如下：

烤烟索氏甲醇提取：

称取50.00g粉碎好的烤烟叶，置于滤纸筒内,然后装入索氏提取器中，索氏提取器上面连接冷凝管，下面连接500ml的圆底烧瓶，烧瓶中加入300ml甲醇(分析纯)，在70度水浴锅中连续加热提取72h(滤纸筒中甲醇溶剂颜色很淡为准)，浓缩甲醇提取液得烟叶成分浸膏，供gc/ms分析。

gc/ms分析：

gc条件：ultra－2毛细管柱(50m×0.2mm×0.33μm)，载气为n2，柱头压170kpa，检测器fid，进样口温度280℃，检测器温度280℃，程序升温:80℃(1min)，2℃/min，280℃(30min)，进样量2μl，分流比10∶1。gc/ms测定时gc条件同上电离电压70ev，离子源温度200℃，传输线温度220℃，使用wiley谱库进行图谱检索。

实施例1

南雄粤烟97c3f(2008)索氏提取致香物的分析结果

从表1可以看出,经甲醇索氏提取南雄烟叶c3f主要含有尼古丁,相对含量占50.41％,其它主要为一类烟致香成分,它们是：2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4h-吡喃-4-酮、5-羟甲基-2-呋喃甲醛、新植二烯、十七酸、棕榈酸、9,12-十八碳二烯酸、9,12,15-十八碳三烯酸甲酯、反式十八烯酸、α八十八碳酸等,它们相对含量分别为：1.89％、4.61％、9.61％、0.85％、5.79％、1.71％、1.85％、0.86％和0.96％。

表1南雄粤烟97烤烟c3f(2008)索氏提取致香物的分析结果

实施例2

南雄粤烟97烤烟c3f(2009)索氏提取致香物的分析结果

⑴酮类：

羟丙酮0.45％、4-环戊烯-1,3-二酮0.21％、2-羟基-3-甲基吡喃-4-酮0.13％、4-羟基-2,5-二甲基-3(2h)呋喃酮0.29％、1,3-二羟基丙酮3.34％、3,5-二羟基-6-甲基-2,3-二氢吡喃-4-酮5.11％。

酮类占致香物的9.53％。

⑵醛类：

5-甲基糠醛0.17％、4,5-二甲基-2-糠醛0.04％、5-羟甲基糠醛4.88％。

醛类占致香物的5.09％。

⑶醇类：

正丁醇0.17％、丁二醇0.13％、糠醇0.94％、5-(氨基甲基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-5-醇0.30％、3-氧代-α-紫罗兰醇0.42％。

醇类占烟气致香物的1.96％。

⑷有机酸类：

乙酸3.39％、甲酸1.34％、反油酸1.87％、亚油酸5.46％。

有机酸类占烟气致香物的12.06％。

⑸酯类：

羟基乙酸甲酯0.94％、二乙酸甘油酯0.08％、γ-巴豆酰内酯0.09％、甲基-2-羟基-2-环己基乙酸酯0.13％、羟基丙二酸二甲基酯0.04％、3-乙酸基-3-3-羟基丙酸二甲酯0.80％、2-酮戊二酸二甲酯0.11％、棕榈酸甲酯0.43％、2-乙酰基-2-羟基丁酸内酯0.60％、丁二酸单甲酯0.13％、硬酯酸甲酯0.10％、(s)-5-羟甲基二氢呋喃-2-酮,(s)-(+)-4-羟甲基丁内酯0.18％、亚油酸甲酯0.33％、邻苯二甲酸二异丁酯0.05％、亚麻酸甲酯0.50％。

酯类占烟气致香物的4.06％。

⑹稠环芳香烃类：

未检测到该类成分。

⑺酚类：

苯酚0.03％。

酚类占致香物的0.03％。

⑻烷烃类：

十二烷0.11％、双氧环丁烷0.75％。

烷烃类占烟气致香物的0.86％。

⑼不饱和脂肪烃类：

不饱和脂肪烃类占致香物的0％。

⑽生物碱类：

烟碱35.21％。生物碱类占致香物的35.21％。

⑾萜类：新植二烯8.66％。萜类占致香物的8.66％。

⑿其它类：

二甲基甲酰胺2.09％、麦斯明0.06％、2.5-二羟甲基呋喃0.76％、janghuarui-070#74783.65％。

表2南雄粤烟97烤烟c3f(2009)索氏提取致香物的分析结果

实施例3

南雄粤烟97(x2f)2009烤烟索氏提取致香物组成成分分析结果

⑴酮类：

羟丙酮0.73％、2-甲氧[1]苯并噻吩[2,3-c]喹啉-6(5h)-酮0.07％、2-环戊烯-1,4-二酮0.26％、2(5h)-呋喃酮0.11％、3-(2,2-二甲基亚丙基)二环[3.3.1]壬烷-2,4-二酮0.10％、2-甲基-3-羟基-γ-吡喃酮0.15％、4-羟基-2,5-二甲基-3(2h)呋喃酮0.39％、1,3-二羟基丙酮2.90％、s)-5-(羟甲基)-二氢呋喃-2(3h)-酮0.40％、巨豆三烯酮0.06％、3,5-二羟基-6-甲基-2,3-二氢吡喃-4-酮5.78％、(s)-5-羟甲基二氢呋喃-2-酮0.20％、2-(甲氧基甲基)-3,5-二甲基环己-2,5-二烯-1,4-二酮0.31％。

酮类占致香物的11.46％。

⑵醛类：

5-甲基糠醛0.26％、5-羟甲基糠醛5.09％。

醛类占致香物的5.35％。

⑶醇类：

正丁醇0.12％、2,3-丁二醇0.05％、丁二醇0.07％、糠醇1.26％、苯甲醇0.06％、丙三醇0.74％、1s-[1α,2a(z),4α]]-2-甲基5-(2-甲基-3-次甲基二环[2.2.1]庚-2-基)-2-戊烯-1-醇0.08％、1-叔-丁基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1h-茚-5-醇0.43％、3-氧代-α-紫罗兰醇0.53％。

醇类占烟气致香物的3.34％。

⑷有机酸类：

乙酸3.90％、甲酸1.79％、3-糠酸0.05％、棕榈酸1.29％、反油酸1.75％、正十四碳酸0.27％、亚油酸2.69％。

有机酸类占烟气致香物的11.74％。

⑸酯类：

丙酮酸甲酯0.04％、乙醇酸甲酯0.70％、单乙酸甘油酯0.06％、羟基丙二酸二甲基酯0.21％、十六酸甲酯0.47％、2-乙酰基-2-羟基丁酸内酯0.73％、丁二酸一甲酯0.23％、硬酯酸甲酯0.14％、亚油酸甲酯0.65％。

酯类占致香物的3.23％。

⑹稠环芳香烃类：

未检测到该类成分。

⑺酚类：

苯酚0.81％。

酚类占致香物的0.81％。

⑻烷烃类：

十一烷0.29％、十二烷0.08％、双环氧丁烷0.95％、2,2-二乙基-3-甲基-噁唑烷0.03％、二十七烷0.33％。

烷烃类占烟气致香物的1.68％。

⑼不饱和脂肪烃类：

不饱和脂肪烃类占致香物的0％。

⑽生物碱类：

烟碱36.93％。生物碱类占致香物的36.93％。

⑾萜类：新植二烯10.30％。萜类占致香物的10.30％。

⑿其它类：

麦斯明0.08％、2,3-二羟基-苯并呋喃0.10％、2,3'-联吡啶0.04％。

表3：南雄粤烟97(x2f)2009烤烟索氏香气物组成成分

从上述实施例可以看出，同一烤烟品种在不同的环境下，如不同的年份，不同的采摘部位等，都会造成该烟叶指纹图谱的不同，同时该图谱又是基于烟叶致香物的特征进行构建，更深一步的，是基于采用了甲醇索氏提取法提取的烟叶致香物进行的指纹图谱的构建，通过这一方法，形成了对烟叶更为深入的研究与认识，为提升烟叶的品质，形成烟叶的风格，提供了更有力的工具与方式。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。