一种用于免疫印迹的自动检测器的制作方法

本发明属于蛋白质分析领域，更具体地，涉及一种用于免疫印迹的自动检测器。

背景技术：

免疫印迹(Western Blot)技术是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。

为了实现高效率的自动化分析，各种各样的免疫印迹分析仪应需而生(专利文献CN103616526A)。然而，上述免疫印迹分析仪通常利用多个试剂瓶或反应槽进行多个待测样本的平行检测，同时利用摇床将试剂瓶进行振荡，以加快反应速度。因此使用该薄膜具有以下缺点：1、由于集成了用于振荡试剂瓶的摇床和电机，使得整个分析仪结构较为复杂，进而提高了制造成本；2、不同试剂瓶的反应条件略有差异，从而影响免疫印迹的准确性；3、薄膜需要从试剂瓶中取出后进行干燥才可进行检测，从而无法实现原位检测，导致了存在着反应不足或反应过度的情况，造成了检测误差。

技术实现要素：

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种用于免疫印迹的自动检测器，其目的在于简化自动检测装置的结构、同时实现原位检测。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种用于免疫印迹的自动检测器，包括底座、免疫印迹薄膜、加液装置以及废液收集装置；

所述免疫印迹薄膜设置于底座上方，所述免疫印迹薄膜表面具有以疏水区域间隔的多个平行的条状亲水区域，所述条状亲水区域具有一个或多个结合区，所述加液装置具有与条状亲水区域一一对应的多个加液通道，所述加液通道的出水口与对应的条状亲水区域相对设置，所述条状亲水区域的一端连接废液收集装置的进水口；

其中，所述结合区上具有目标抗原，用于与待测溶液中的目标抗体结合；每个所述条状亲水区域分别用于结合不同的待测溶液，从而独立地进行不同的待测溶液中的目标抗体的免疫印迹检测；所述加液装置用于向条状亲水区域添加反应液，所述废液收集装置用于收集多余的反应液；所述反应液包括待测溶液、缓冲液、二抗溶液或显色溶液。

优选地，所述加液通道的出水口与对应的条状亲水区域的距离为0.1mm～2mm。

优选地，所述自动检测器还包括干燥装置。

作为进一步优选地，所述干燥装置为风扇或抽风机，其风量为2m³/min～5m³/min。

优选地，所述加液装置包括加液管以及加液泵，所述加液管以及加液泵相连通，形成与条状亲水区域一一对应的多个加液通道，所述加液泵的进水口作为所述加液装置的进水口，所述加液管的出水口作为所述加液装置的出水口。

优选地，所述自动检测器还包括操纵杆，所述加液装置固定于所述操纵杆上，所述操纵杆用于移动加液装置，使所述加液通道的出水口沿条状亲水区域往复运动，以促进反应液与条状亲水区域的相对运动。

作为进一步优选地，所述自动检测器还包括设置于免疫印迹薄膜两侧的直线电机，所述直线电机的控制端连接操纵杆。

作为更进一步优选地，所述自动检测器的两侧具有与条状亲水区域平行的滑轨。

优选地，所述废液收集装置包括集液管以及真空泵；所述集液管的进水口作为所述废液收集装置的进水口，出水口连接真空泵，所述集液管用于收集多余的反应液，所述真空泵用于将反应液泵出。

优选地，所述废液收集装置包括倒L型引流槽以及集液池；所述倒L型引流槽的进水口作为所述废液收集装置的进水口，出水口设置于进水口的下方，所述集液池设置于所述倒L型引流槽的出水口的下方，所述倒L型引流槽用于将多余的反应液引出，所述集液池用于收集多余的反应液。

优选地，所述自动检测器包括信号分析装置，所述信号分析装置设置于所述免疫印迹薄膜上方，所述信号分析装置用于获取免疫印迹的检测信号。

作为进一步优选地，所述信号分析装置包括光源以及图像传感器；所述光源用于向免疫印迹薄膜方向发出可见光或激光，在免疫印迹薄膜表面形成免疫印迹的检测信号，所述图像传感器用于获取免疫印迹的检测信号。

作为更进一步优选地，所述信号分析装置还包括数据处理器，所述图像传感器的输出端连接所述数据处理器的输入端，所述数据处理器用于根据所述图像检测信号，获得免疫印迹的检测结果。

作为进一步优选地，所述自动检测器还包括警报装置，所述信号分析装置的输出端连接所述警报装置的输入端，所述警报装置用于根据所述检测结果，获取免疫印迹的结束警报或失败警报。

优选地，所述自动检测器还包括对照液，所述对照液用于通过任意一条加液通道，添加至该加液通道对应的条状亲水区域，并与该条状亲水区域的结合区上的目标抗原结合，以指示免疫印迹的反应结束或反应失败。

总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，由于在同一张免疫印迹薄膜上集成多个条状亲水区域，能够取得下列有益效果：

1、免疫印迹薄膜具有以疏水区域间隔的多个平行的条状亲水区域，通过条状亲水区域的吸附力以及水本身具有的表面张力与待测溶液中的目标抗体结合，通过疏水区域的隔离防止反应液漏出，仅需要毫升级以下的反应液即可完成免疫印迹检测，从而更加节省试剂，适用于痕量检测；

2、多种待测溶液中的不同目标抗体可结合于同一张免疫印迹薄膜的不同条状亲水区域的结合区上，从而更适于在完全相同的条件下进行反应，易于进行平行对照，提高了检测的准确率；同时简化了自动检测器的结构，降低了生产成本；

3、操纵杆可用于移动加液装置，使所述加液通道的出水口沿条状亲水区域往复运动，以促进反应液与条状亲水区域的相对运动，从而提高反应效率，节省了免疫印迹检测的时间；

4、由于仅需要毫升级以下的反应液，通过废液收集装置的简单抽吸即可实现初步干燥，或仅需集成简单的干燥装置就能快速干燥免疫印迹薄膜，更易于进行原位检测，且进一步节省了反应时间；

5、该自动检测器还集成了信号分析装置，无需移动免疫印迹薄膜即可获得免疫印迹的检测信号，简化了操作；

6、通过警报装置可以通过免疫印迹的检测信号，直接获得免疫印迹的反应结束警报或反应失败警报，避免了人为观察的误差，同时，由于警报装置能自动提示反应结束，避免了过度反应而造成的检测结果不准确。

附图说明

图1是本发明自动检测器中的免疫印迹薄膜俯视图；

图2是本发明自动检测器侧面剖视图；

图3是本发明自动检测器正视图；

在所有附图中，相同的附图标记用来表示相同的元件或结构，其中：1-免疫印迹薄膜，11-疏水区域，12-条状亲水区域，13-结合区，2-加液装置，3-底座，4-信号分析装置，5-操纵杆，6-直线电机，71-倒L型引流槽，72-集液池。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

本发明提供了一种用于免疫印迹的自动检测器，包括底座3、免疫印迹薄膜1、加液装置2以及废液收集装置等；

所述免疫印迹薄膜1设置于底座3上方，所述免疫印迹薄膜1表面具有以疏水区域11间隔的多个平行的条状亲水区域12，每个条状亲水区域12具有一个或多个结合区13，所述结合区13上具有目标抗原，用于与待测溶液中的目标抗体结合，如图1所示，每个所述条状亲水区域12分别用于结合不同的待测溶液，从而独立地进行不同的待测溶液中的目标抗体的免疫印迹检测；

所述加液装置2具有与条状亲水区域12一一对应的多个加液通道，所述加液通道的出水口与对应的条状亲水区域12相对设置，距离为0.1mm～2mm，用于向条状亲水区域12添加反应液，所述条状亲水区域12的一端连接废液收集装置的进水口，所述废液收集装置用于收集多余的反应液，所述反应液包括待测溶液、缓冲液、二抗溶液或显色溶液；

加液装置2可以使用单独的一次性加液管，加液管的进水口位于上方，出水口位于下方，从上方的进水口，即可向与出水口相对的条状亲水区域12添加反应液；加液装置2也可以由加液管以及加液泵组成，所述加液管以及加液泵相连通，形成与条状亲水区域12一一对应的多个加液通道，所述加液泵的进水口作为所述加液装置2的进水口，所述加液管的出水口作为所述加液装置2的出水口，加液泵可以使用注射泵，也可以使用蠕动泵，流量型蠕动泵由于可以一次向多个加液管输入反应液，且流量最小为1μL/min，比较节省反应液，而最大可达1000mL/min，可用于利用缓冲液冲洗条状条状亲水区域12，从而尤其适用于本发明。

废液收集装置可以包括集液管以及真空泵；所述集液管的进水口作为所述废液收集装置的进水口，出水口连接真空泵，所述集液管用于收集多余的反应液，所述真空泵用于将反应液泵出，这种情况下，由于反应液的高度仅为0.1mm～1mm，多余的反应液可以几乎完全泵走；

所述废液收集装置也可以包括倒L型引流槽71以及集液池72，如图2所示；所述倒L型引流槽71的进水口作为所述废液收集装置的进水口，出水口设置于进水口的下方，所述集液池72设置于所述倒L型引流槽71的出水口的下方，所述倒L型引流槽71用于将多余的反应液引出，所述集液池72用于收集多余的反应液；用这种方法的话，反应液很难完全被引入集液池72，一般需要另外设置干燥装置辅助干燥免疫印迹薄膜1；干燥装置可使用风扇或抽风机，设置于免疫印迹薄膜1的上方，风量设置为2m³/min～5m³/min，在均匀干燥免疫印迹薄膜1的同时，避免免疫印迹薄膜1上的抗原或抗体变性。

为了促进反应液与条状亲水区域12的相对运动，可以移动加液装置2，使所述加液通道的出水口沿条状亲水区域12往复运动，可以设置一操纵杆5，用于固定加液装置2(为了简化说明，图3中仅示出了一个加液装置2的一个加液通道，实际每个条状亲水区域12都具有对应的加液通道)，并移动加液装置2使所述加液通道的出水口沿条状亲水区域12往复运动；在自动检测器的两侧，还可以分别设置直线电机6，如图3所示，直线电机6的控制端连接操纵杆5，直线电机6的速度一般设置为15cm/s以下，两侧的直线电机6同步；在操纵杆5移动加液装置2运动的同时，仍可以将待测溶液通过加液管缓慢添加于条状亲水区域12表面，以防液体蒸发，以保持条状亲水区域12上的液面高度为0.1mm～1mm。

由于该自动检测器能实现原位反应与干燥，因此，也可直接在免疫印迹薄膜1上方设置信号分析装置4，用于获取免疫印迹的检测信号；通常该信号分析装置4包括光源以及图像传感器；所述光源用于向免疫印迹薄膜1方向发出可见光或激光(根据二抗溶液的标记选择光源的种类)，在免疫印迹薄膜1表面形成免疫印迹的检测信号，所述图像传感器可以使用照相机，用于获取免疫印迹的检测信号；无论是可见光或激光，光源需要光线均匀，以可见光为例，光源可以选取LED灯管，灯管的形状优选为长形，其与条状亲水区域12的方向垂直，但与免疫印迹薄膜1平行，可以保证投射到每个条状亲水区域12同一位置的光线均匀，以免出现对比误差；图像传感器获取的检测信号的图像可以直接输入数据处理器，数据处理器中储存了一些标准样本的检测信号，通过将待测溶液的检测信号与标准样本的检测信号进行比对，可获得待测溶液中目标蛋白的种类、浓度等检测结果。

在免疫印迹薄膜1上，可以设置对照区，或者将其中一个条状亲水区域12对应的加液装置2中加入对照液，用于指示免疫印迹的反应结束或者反应失败；此时，可另外设置一警报装置，其输入端连接信号分析装置4的输出端，通过对照区或加入对照液的条状亲水区域12的检测结果，直接获得免疫印迹的反应结束警报或反应失败警报，避免了人为观察的误差，同时，由于警报装置能自动提示反应结束，避免了过度反应而造成的检测结果不准确。

本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。