专利名称：风湿病自身抗体免疫印迹试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种风湿病自身抗体免疫印迹试剂盒。
背景技术：
目前，尚无同时检测8种自身抗体(Sm、U1RNP、ssA、ssB、Scl-70、Jo-1、Ro60、Rib抗体)、对系统性红斑狼疮(SLE)，干燥综合症(SS)，硬皮症(PPS)，皮肌炎和多发性肌炎(DM/PM)混合性结缔组织病(MCTD)，类风湿性关节炎(RA)等6种风湿病诊断和鉴别诊断的免疫印迹试剂盒。
发明内容
本发明的目的在于提供一种风湿病自身抗体免疫印迹试剂盒，利用免疫印迹技术，在一条印迹膜上可同时检测8种自身抗体(Sm、U1RNP、ssA、ssB、Scl-70、Jo-1、Ro60、Rib抗体)，为风湿病的诊断和鉴别诊断提供可靠的实验室依据。
为了达到上述目的，本发明由以下的技术方法来实现。
一种风湿病自身抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于所述的试剂盒组成成份包括置反应槽内的印迹膜条、酶联试剂、显色剂A、显色剂B、终止液、浓缩洗涤液、标准区带；将可提取性核抗原(ENA)用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，按份子量大小依次分开，在通过印迹技术转移至印迹膜上，其印迹膜条上即含有按分子量大小不同排列的各种可提取性核自身抗原成份。将其放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有自身抗体，将会分别与相应抗原结合，再加入酶联免疫显色区带，与标准带对照即可判断待血清中含有何种抗体。其抗体的有无及抗体的种类和数量，对风湿病诊断和鉴别诊断有重要的临床意义。
具体实施例方式
下面的实施例和制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。
实施例1本试剂盒组成成份包括置反应槽内的印迹膜条5板每板8条、酶联试剂0.5ml、显色剂A25ml、显色剂B25ml、终止液25ml、浓缩洗涤液25ml、标准区带。样品要求，静脉取血2-5ml，置试管待凝固后离心分离血清，血清标本保存于2-8℃，在24小时内不能测试的标本应放-20℃保存，严重溶血，有絮状物或霉变的血清标本会影响测试。
测定步骤1.洗涤应用液的配制在2-8℃贮存的浓缩洗涤液会有结晶析出，将整瓶(25ml)浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释至500ml，放入试剂瓶中，标签上注明配制时间，保存于2-8℃，有效期6个月，如有絮状物或霉变应废弃。
2.在含有印迹膜条的反应槽中加入洗涤应用液1ml和待检血清10ul。
3.置摇床上室温下(20℃以上，37℃以下)摇动30分钟或置37℃温箱30分钟。
4.弃去反应槽液体，在吸水纸上拍干，加入洗涤应用液1ml，洗涤1分钟弃去反应槽液体，反复洗涤4次，最后在吸水纸上拍干液体。
5.在反应槽中加入洗涤应用液0.5ml和酶联试剂10ul。
6.置摇床上室温下(20℃以上，37℃以下)摇动30分钟或置37℃温箱30分钟。
7.弃去反应槽液体，在吸水纸上拍干，加入洗涤应用液1ml，洗涤1分钟弃去反应槽液体，反复洗涤4次，最后在吸水纸上拍干液体。
8.在反应槽中分别加入显色剂A 0.5ml，显色剂B 0.5ml。
9.在摇床上摇动2-10分钟，显色。
10.待质控带和阳性区带显色清晰后加终止液0.5ml，在摇床上摇动2分钟。
11.用自来水冲去槽中液体，取出印迹膜条，置吸水纸上，待干后与标准带对照判断结果。
结果判断将印迹膜上起始线与标准带起始线对齐，观察阳性显色区带与对应的标准带位置即可判断显色区带是何种自身抗体。
ENA对肽抗体与风湿性疾病对应关系分子量相应抗体相应疾病29/28KD、13.5KD 抗Sm抗体SLE标记抗体73KD、32KD、17.5KD抗U1RNP抗体 多见于MCTD38KD、16.5KD、15KD抗Rib抗体 SLE标记抗体52KD 抗ssA 多见于SS48/47KD、45KD 抗ssB抗体 多见于SS86KD、70KD抗Scl-70PSS标记抗体55KD 抗Jo-1抗体 多见于PM/DM60KD Ro60抗体多见于RA与风湿病自身抗体免疫印迹标准带对照。临床意义根据自身抗体的有无或多少，对常见系统性红斑狼疮(SLE)，干燥综合症(SS)，硬皮症(PPS)，皮肌炎和多发性肌炎(DM/PM)混合性结缔组织病(MCTD)，类风湿性关节炎(RA)等风湿病诊断和鉴别诊断提供参考依据。
权利要求
1.一种风湿病自身抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于所述的试剂盒组成成份包括置反应槽内的印迹膜条、酶联试剂、显色剂A、显色剂B、终止液、浓缩洗涤液、标准区带；将可提取性核抗原(ENA)用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，按份子量大小依次分开，在通过印迹技术转移至印迹膜上，其印迹膜条上即含有按分子量大小不同排列的各种可提取性核自身抗原成份。将其放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有自身抗体，将会分别与相应抗原结合，再加入酶联免疫显色区带，与标准带对照即可判断待血清中含有何种抗体。其抗体的有无及抗体的种类和数量，对风湿病诊断和鉴别诊断有重要的临床意义。
2.根据权利要求1所述的风湿病自身抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于试剂盒的测定步骤包括1.洗涤应用液的配制在2-8℃贮存的浓缩洗涤液会有结晶析出，将整瓶(25ml)浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释至500ml，放入试剂瓶中，标签上注明配制时间，保存于2-8℃，有效期6个月，如有絮状物或霉变应废弃2.在含有印迹膜条的反应槽中加入洗涤应用液1ml和待检血清10ul3.置摇床上室温下(20℃以上，37℃以下)摇动30分钟或置37℃温箱30分钟4.弃去反应槽液体，在吸水纸上拍干，加入洗涤应用液1ml，洗涤1分钟弃去反应槽液体，反复洗涤4次，最后在吸水纸上拍干液体5.在反应槽中加入洗涤应用液0.5ml和酶联试剂10ul6.置摇床上室温下(20℃以上，37℃以下)摇动30分钟或置37℃温箱30分钟7.弃去反应槽液体，在吸水纸上拍干，加入洗涤应用液1ml，洗涤1分钟弃去反应槽液体，反复洗涤4次，最后在吸水纸上拍干液体8.在反应槽中分别加入显色剂A 0.5ml，显色剂B 0.5ml9.在摇床上摇动2-10分钟，显色10.待质控带和阳性区带显色清晰后加终止液0.5ml，在摇床上摇动2分钟11.用自来水冲去槽中液体，取出印迹膜条，置吸水纸上，待干后与标准带对照判断结果结果判断将印迹膜上起始线与标准带起始线对齐，观察阳性显色区带与对应的标准带位置即可判断显色区带是何种自身抗体。
全文摘要
本发明公开了一种风湿病自身抗体免疫印迹试剂盒。包括置反应槽内的印迹膜条、酶联试剂、显色剂A、显色剂B、终止液、浓缩洗涤液、标准区带；将可提取性核抗原(ENA)用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，按分子量大小依次分开，再通过印迹技术转移至印迹膜上，其印迹膜条上即含有按分子量大小不同排列的各种可提取性核自身抗原成份。将其放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有自身抗体，将会分别与相应抗原结合，再加入酶联和显色试剂，就会出现显色区带，与标准带对照即可判断待血清中是否含有Sm、U
文档编号G01N21/77GK101021533SQ20071013567
公开日2007年8月22日 申请日期2007年3月12日 优先权日2007年3月12日
发明者马伟民, 张永顶 申请人:深圳市伯劳特生物制品有限公司