专利名称：肺癌免疫印迹试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种肺癌免疫印迹试剂盒，属于医疗研究领域。
背景技术：
肺癌又称支气管肺癌，是起源于支气管和肺泡上皮细胞的恶性肿瘤，肺癌们已成 为目前发病率和死亡率增长最快、对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。肺癌5年生存 率仅有10% 15%，晚期肺癌的治疗更是难点。肺癌中80%是非小细胞肺癌，并且以鳞癌、 腺癌和大细胞癌为主，多数发现时已经是中晚期，手术、放化疗等综合治疗效果不理想。另 外，20%的肺癌是小细胞肺癌，其总体预后更差。因此，对于肺癌的研究十分迫切。随着分子 生物学技术的迅速发展，对肺癌的研究已经深入到基因、蛋白等分子水平，其发病机制也被 逐渐认识并推向运用。免疫印迹(immimoblotting)又称蛋白质印迹(western blotting), 它是根据抗原抗体的特异性结合特性检测复杂样品中的某种蛋白的方法。其具有SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行 定性和半定量分析。蛋白质印迹技术广泛应用于人类医学研究。肺癌作为高发肿瘤，对其 相关蛋白的研究是目前肺癌研究领域中不可缺少的组成部分。
实用新型内容本实用新型的目的在于提供一种方便快捷、可操作性强，并且重复性好的肺癌免 疫印迹试剂盒。本实用新型的目的可以通过以下技术方案达到一种肺癌免疫印迹试剂盒，包括盒体、肺癌组织印迹蛋白膜片、膜存储液和浓缩洗 膜液，所述膜存储液和浓缩洗膜液分别为瓶装结构，通过纸质模板固定于盒体内，所述的肺 癌印迹组织蛋白膜片密封装于存储袋内。本实用新型的目的还可以通过以下技术方案达到本实用新型的一种实施方案是所述的膜存储液可以为0.02%叠氮钠-TBST溶 液，共1瓶。本实用新型的一种实施方案是所述的浓缩洗膜液可以为缓冲液，共1瓶，容量 1L。本实用新型的一种实施方案是所述的存储袋可以为塑料杂交袋。本实用新型具有如下突出的有益效果本实用新型的肺癌组织印迹蛋白膜片是技术核心，它是通过肺癌组织蛋白的抽 提、电泳分离及转膜制备而成，保存与运输都十分方便快捷，而且可以多次使用，从而实现 了肺癌标本资源与研究的高效整合与利用。
图1为本实用新型的结构示意图。[0013]其中，1-盒体，2-肺癌组织印迹蛋白膜片，3-存储液，4-浓缩洗膜液，5-存储袋。
具体实施方式
实施例1 参照图1，本实施例包括盒体1、肺癌组织印迹蛋白膜片2、膜存储液3和浓缩洗膜 液4，膜存储液3和浓缩洗膜液4为瓶装结构，通过纸质模板固定于盒体1内，所述的肺癌印 迹组织蛋白膜片2密封装于存储袋5内。本实施例中，肺癌组织印迹蛋白膜片的制备步骤如下(一)蛋白的抽提首先，切取适量的肺癌组织，用缓冲液漂洗去除血迹和炭尘，吸干并剪碎放入勻浆 器中，在勻浆器中加入放射免疫沉淀分析裂解液体以及蛋白酶抑制剂，然后，急速冻融勻浆 组织3次，使勻浆产物充分裂解，将裂解产物完全转移至离心管中，在4°C下以离心50min， 取上清分装于离心管中，部分置于-80°C保存，部分用于蛋白浓度测定；(二)蛋白样品预处理抽提蛋白样品与2X上样缓冲液按1 1体积比混合，沸水煮后，立即置冰浴，使温 度降至室温左右，然后轻度离心，涡旋勻，再离心，准备上样；(三)电泳分离首先配制分离胶和浓缩胶，其中分离胶的配制，成分是超纯水、稀酰胺/甲叉双 丙稀酰胺、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、十二烷基硫酸钠、过硫酸胺和四甲基二乙胺，浓缩胶 的配制成分是超纯水、丙稀酰胺/甲叉双丙稀酰胺、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、十二烷基 硫酸钠、过硫酸胺和四甲基二乙胺；将分离胶和浓缩胶置于模具内，加入新鲜电泳缓冲液， 测无漏后补齐电泳缓冲液，然后在凝胶两侧的上样孔加入和的预染蛋白质分子量标准品， 电泳直至溴酚蓝染料跑至胶底；(五)转膜揭开玻璃板，刮除浓缩胶，取出分离胶，放电转液浸泡，再按胶大小剪切好聚偏二 氟乙烯膜和滤纸，然后制作三明治，膜正胶负，即负极_夹子-海绵垫_滤纸_凝胶_聚偏 二氟乙烯膜_滤纸_海绵垫_夹子-正极，将三明治放入转移槽中，要使夹的黑面对槽的黑 面，夹的白面对槽的红面，补齐电转液，以恒压100V进行2h，将蛋白质转移至聚偏二氟乙烯 膜上，即可制得肺癌组织蛋白印迹膜片。试剂盒的制备方法如下如图1所示，所述的肺癌印迹组织蛋白膜片2密封装于存储袋5内，加入适量膜储 存液3，在4°C下储存。膜存储液的配方0. 02%叠氮钠，溶于TBST (氯化钠8g，氯化钾0. 2g，三羟甲基氨 基甲烷3g，盐酸1.65ml，吐温-201ml，定容至1000ml，调节PH为7. 5)浓缩洗膜液(IOX)的配方12. Ilg三羟甲基氨基甲烷(Tris)，87. 66g氯化钠 (NaCl), 5ml非离子表面活性剂(Tween-20)，Ig叠氮钠，PH为7. 4。在使用前用去离子水稀 释10倍。
权利要求一种肺癌免疫印迹试剂盒，其特征在于包括盒体(1)、肺癌组织印迹蛋白膜片(2)、膜存储液(3)和浓缩洗膜液(4)，所述膜存储液(3)和浓缩洗膜液(4)分别为瓶装结构，通过纸质模板固定于盒体(1)内，所述肺癌印迹组织蛋白膜片(2)密封装于存储袋(5)内。
2.根据权利要求1所述的肺癌免疫印迹试剂盒，其特征在于所述的膜存储液(3)为 0. 02%叠氮钠-TBST溶液。
3.根据权利要求1所述的肺癌免疫印迹试剂盒，其特征在于所述的浓缩洗膜液(4) 为缓冲液。
4.根据权利要求1所述的肺癌免疫印迹试剂盒，其特征在于所述的存储袋(5)为塑 料袋。
专利摘要本实用新型涉及一种肺癌免疫印迹试剂盒，其特征在于包括盒体(1)、肺癌组织印迹蛋白膜片(2)、膜存储液(3)和浓缩洗膜液(4)，所述膜存储液(3)和浓缩洗膜液(4)分别为瓶装结构，通过纸质模板固定于盒体(1)内，所述肺癌印迹组织蛋白膜片(2)密封装于存储袋(5)内。本实用新型的肺癌组织印迹蛋白膜片是技术核心，它是通过肺癌组织蛋白的抽提、电泳分离及转膜制备而成，保存与运输都十分方便快捷，而且可以多次使用，从而实现了肺癌标本资源与研究的高效整合与利用。
文档编号G01N33/554GK201662574SQ201020119509
公开日2010年12月1日 申请日期2010年2月10日 优先权日2010年2月10日
发明者何建行, 卢文菊, 张奇, 王健 申请人:广州医学院