本发明属于药物领域,涉及多沙唑嗪的异构体杂质检测,具体涉及一种多沙唑嗪光学异构体的分离检测方法。
背景技术:
多沙唑嗪(doxazosin,ds)是一种新型选择性α1受体阻断剂,具有明显的降血压作用,其降压作用接近或超过其他的抗高血压药物,ds的最主要特点是可以改善微循环,可以降低心脏前后负荷,既可以引起阻力血管的扩张,又可引起容量血管的扩张,反射性地抑制或减缓心动过速;另一方面ds对血脂代谢有良好的改善作用,对血脂产生一定的有益效应,对动脉粥样硬化也具有缓解作用。该药被美国fda批准为治疗高血压的一线药物。ds作为α1受体阻断剂也可用于良性前列腺增生的治疗,作用迅速、持久、耐受性好、不易产生低血压,ds还有促进前列腺细胞凋亡、使前列腺缩小的作用,这就更有利于前列腺增生症的治疗。fda已经批准ds与非那雄胺联合应用治疗前列腺增生,在老年轻、中度高血压合并前列腺增生的治疗中,ds不仅安全有效,而且具有良好耐受性。
多沙唑嗪存在一个手性中心,多沙唑嗪及其r型光学异构体的化学结构式如下:
多沙唑嗪一般由消旋体拆分而得,不可避免地会有r型光学异构体杂质。为考察多沙唑嗪产品的质量,有必要建立多沙唑嗪产品中r型光学异构体杂质的测定方法。
技术实现要素:
本发明的目的在于提供一种多沙唑嗪光学异构体的分离检测方法。
本发明通过下面的技术方案得以实现:
一种分离检测多沙唑嗪中光学异构体杂质的方法,采用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶(c18)为固定相,流动相的有机相为甲醇,水相为ph值3.4-3.6的磷酸二氢钠水溶液,有机相或水相中还含有四氢呋喃或吡啶,使得混合后的流动相中四氢呋喃和吡啶的总体积百分含量为16-20%,且四氢呋喃和吡啶的体积百分含量之比为3-5:1。
优选地,有机相为甲醇-四氢呋喃-吡啶,四氢呋喃和吡啶在有机相中的总体积百分含量为18%,二者体积百分含量之比为4:1;水相为ph值3.5的磷酸二氢钠水溶液-四氢呋喃-吡啶,四氢呋喃和吡啶在水相中的总体积百分含量为18%,二者体积百分含量之比为4:1。
优选地,ph值3.4-3.6的磷酸二氢钠水溶液的配制方法为:先配制40mm的磷酸二氢钠水溶液,再用磷酸调节ph值至3.4-3.6。
优选地,流动相中有机相占52-56%。
优选地,有机相和水相按照体积比54:46等度洗脱。
优选地,检测波长为246nm。
优选地,柱温为30℃。
优选地,流动相流速为1ml/min。
优选地,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶(c18)色谱柱,规格为长250mm,内径4.6mm,填料粒径5μm。
优选地,色谱柱为zorbaxextend-c18。
本发明的优点:
现有技术多采用毛细管电泳或手性色谱柱分离多沙唑嗪及其光学异构体,但是毛细管电泳重复性差,不适合用于质量控制,手性色谱柱价格昂贵,使用寿命短,成本太高;本发明提供的方法通过在流动相上创新,仅使用常规的c18色谱柱即可有效分离多沙唑嗪及其光学异构体,经济实用,易于推广。
附图说明
图1为多沙唑嗪及其r型光学异构体的化学结构式;
图2为实施例1多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果图;
图3为实施例2多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果图;
图4为实施例3多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果图;
图5为实施例4多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果图;
图6为实施例5多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步介绍本发明的技术方案。
实施例1多沙唑嗪及其光学异构体的分离
一、实验材料
岛津lc-20a高效液相色谱仪;
cpa225d电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);
色谱柱:zorbaxextend-c18柱(安捷伦);
多沙唑嗪及其光学异构体自制,化学结构及构型经过确证,化学结构式如图1所示;
甲醇、四氢呋喃为色谱纯,水为液相用超纯水,其余试剂均为分析纯。
二、实验方法
1、流动相及供试品溶液配制
流动相a相(有机相):精密量取四氢呋喃144ml、吡啶36ml,用甲醇定容至1l。
流动相b相(水相):先配制40mm的磷酸二氢钠水溶液,并用磷酸调节ph值至3.5;然后精密量取四氢呋喃144ml、吡啶36ml,用ph值3.5的磷酸二氢钠水溶液定容至1l。
供试品溶液的配制:先精密称取多沙唑嗪及其光学异构体,然后用流动相溶解配制成含有0.5mg/ml多沙唑嗪、0.5mg/ml光学异构体的溶液。
多沙唑嗪对照品溶液配制:先精密称取多沙唑嗪,然后用流动相溶解配制成含0.1mg/ml多沙唑嗪的溶液。
光学异构体对照品溶液配制:精密称取光学异构体,用流动相溶解配制成含有0.1mg/ml光学异构体的溶液。
2、高效液相色谱参数及进样分析
高效液相色谱仪:岛津lc-20a高效液相色谱仪
色谱柱:agilentzorbaxextend-c18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);
流动相及洗脱方式:流动相a相和b相按照体积比54:46等度洗脱;
流速:1ml/min;
柱温:30℃;
检测波长:246nm;
进样量:10μl。
精密量取10μl供试品溶液、对照品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图,观察多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果,计算多沙唑嗪及其光学异构体的分离度。
三、实验结果
多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果如图2所示,在该色谱条件下多沙唑嗪及其光学异构体可较好分离,出峰顺序为光学异构体、多沙唑嗪,分离度大于1.5,达到基线分离。
实施例2多沙唑嗪及其光学异构体的分离
与实施例1相比,仅将流动相a相、b相中四氢呋喃和吡啶的体积比调整为3:1,其他方法及参数完全一致。多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果如图3所示,在该色谱条件下多沙唑嗪及其光学异构体可较好分离,出峰顺序为光学异构体、多沙唑嗪,分离度大于1.5,达到基线分离。
实施例3多沙唑嗪及其光学异构体的分离
与实施例1相比,仅将流动相a相、b相中四氢呋喃和吡啶的体积比调整为5:1,其他方法及参数完全一致。多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果如图4所示,在该色谱条件下多沙唑嗪及其光学异构体可较好分离,出峰顺序为光学异构体、多沙唑嗪,分离度大于1.5,达到基线分离。
实施例4对比实施例
与实施例1相比,仅将流动相a相、b相中四氢呋喃和吡啶的体积比调整为2:1,其他方法及参数完全一致。多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果如图5所示,在该色谱条件下多沙唑嗪及其光学异构体可较好分离,出峰顺序为光学异构体、多沙唑嗪,分离度大于1.5,达到基线分离。
实施例5对比实施例
与实施例1相比,仅将流动相a相、b相中四氢呋喃和吡啶的体积比调整为6:1,其他方法及参数完全一致。多沙唑嗪及其光学异构体的分离效果如图6所示,在该色谱条件下多沙唑嗪及其光学异构体可较好分离,出峰顺序为光学异构体、多沙唑嗪,分离度大于1.5,达到基线分离。
从上述实施例可以看出,在本发明方法中,流动相中四氢呋喃和吡啶的体积比在3-5:1范围内可以实现多沙唑嗪及其光学异构体的有效分离。
现有技术多采用毛细管电泳或手性色谱柱分离多沙唑嗪及其光学异构体,但是毛细管电泳重复性差,不适合用于质量控制,手性色谱柱价格昂贵,使用寿命短,成本太高;本发明提供的方法通过在流动相上创新,仅使用常规的c18色谱柱即可有效分离多沙唑嗪及其光学异构体,经济实用,易于推广。