他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯的高效液相分析方法与流程

本发明涉及一种他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯的高效液相分析方法，属于化工检测领域。

背景技术：

他唑巴坦(钠)是继克拉维酸、舒巴坦之后的新型青酶烷砜类β-内酰胺酶抑制剂，是一种不可逆性β-内酰胺酶抑制剂，对a类酶具有很强的灭活作用，其抑酶作用强于舒巴坦，稳定性优于克拉维酸。既能增强抗生素的抗菌活性，又可以扩大抗菌谱，减少不良反应，在临床具有广泛的应用前景。

目前他唑巴坦的合成根据其所使用的起始物料的不同，主要有三条合成路线，分别是以舒巴坦、青霉素g钾盐、6-氨基青霉烷酸(6-apa)为起始物料。以舒巴坦为起始物料，主要存在原料价格高，反应收率低两个缺点，无法用于实际生产；以青霉素g钾盐为起始物料，由于物料来源不及6-apa广泛，反应收率稍有不及，此路线也多用于理论研究；以6-apa为起始物料合成他唑巴坦的研究最为活跃，亦是国内外采用的工业合成路线。

关于他唑巴坦合成过程中产生的中间产物的检测方法在国内外还没有现行的检测标准发布，国外由于其文化发展程度的差异，主要将目标放在成品临床医疗中的使用情况，而中间产物的相关检测方法的报道很少。

由于目前尚无良好有效的检测手段，因此建立一种检测以6-apa为起始原料合成他唑巴坦时产生的中间产物他唑巴坦二苯甲酯含量的方法非常重要。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯的高效液相分析方法，操作简便快捷，重现性好，数据准确可靠。

本发明所述的他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯的高效液相分析方法，高效液相色谱条件为：

色谱柱：c18色谱柱；

流动相：乙腈-磷酸二氢钾缓冲溶液；

流速：0.8-1.3ml/min；

柱温：25-35℃；

检测器波长：225-235nm；

进样体积：20ul；

洗脱方式：等度洗脱。

乙腈与磷酸二氢钾缓冲溶液的体积比为50～55:45～50，流动相ph为3.5～4.5。

优选地，色谱条件为：

c18色谱柱的规格为250×4.6mm，5μm；

流动相：乙腈-磷酸二氢钾缓冲溶液，乙腈与磷酸二氢钾缓冲溶液的体积比为55:45，流动相ph为4；

检测器波长：230nm；

流速：1.0ml/min；

柱温：30℃。

他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯的高效液相分析方法，步骤如下：

(1)分别配制他唑巴坦二苯甲酯的对照样品溶液和供试品溶液；

(2)制作标准曲线；

(3)高效液相色谱分析测定供试品含量。

他唑巴坦二苯甲酯的含量在0.2～1.0mg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数在0.999以上，采用空白基质匹配标准溶液的方法进行标准校正，显示他唑巴坦二苯甲酯平均回收率在90％以上，相对标准偏差小于2.0％。该方法适用于测定他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯的含量。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

(1)该检测方法操作简单便捷，色谱峰形好，数据准确可靠，重现性好；

(2)能够准确地测定他唑巴坦二苯甲酯的含量，监测反应的进程，从而合理控制反应时间，为他唑巴坦二苯甲酯的合成提供参考。

附图说明

图1是实施例1的供试品的高效液相色谱图；

图2是本发明他唑巴坦二苯甲酯的浓度-峰面积的标准曲线图；

图3是实施例2的供试品的高效液相色谱图；

图4是实施例3的供试品的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

1、主要色谱条件为：

色谱柱为c18(250×4.6mm，5μm)；柱温为25℃；检测波长为230nm；流动相为乙腈-磷酸二氢钾缓冲溶液(体积比＝55:45，ph＝4)；流速为1.0ml/min；进样量为20μl；洗脱时间为15min。

2、测试步骤：

(1)标准溶液的配制

精密称取他唑巴坦二苯甲酯标准品50.0mg置于50ml容量瓶中，加流动相稀释定容至刻度，摇匀，配成浓度为1mg/ml的标准液；分别精密称取上述标准液2ml、4ml、6ml、8ml和10ml置于10ml容量瓶中，用流动相定容至10ml，配成浓度为0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml和1.0mg/ml的他唑巴坦二苯甲酯标准溶液；

(2)供试品溶液的配制

精密称取供试品25.0mg，置于25ml容量瓶中，加流动相溶解定容，静置，待测。

(3)他唑巴坦中他唑巴坦二苯甲酯的测定

按照所述高效液相色谱条件对他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯进行测定，测得含量为86.141％。

结论：由附图1可以看出，峰型良好，他唑巴坦二苯甲酯标准品在该色谱条件下的保留时间和他唑巴坦中间产物的保留时间基本一致；由附图2可以看出，他唑巴坦二苯甲酯标准曲线线性良好，r²＝0.9998。

实施例2

1、主要色谱条件为：

色谱柱为c18(250×4.6mm，5μm)；柱温为30℃；检测波长为230nm；流动相为乙腈-磷酸二氢钾缓冲溶液(体积比＝55:45，ph＝4)；流速为0.8ml/min；进样量为20μl；洗脱时间为15min。

2、测试步骤：

(1)标准溶液的配制

同实施例1。

(2)供试品溶液的配制

同实施例1。

(3)他唑巴坦中他唑巴坦二苯甲酯的测定

按照所述高效液相色谱条件对他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯进行测定，测得含量为86.141％。

结论：由附图3可以看出，峰型良好，他唑巴坦二苯甲酯标准品在该色谱条件下的保留时间和他唑巴坦中间产物的保留时间基本一致，该流速下保留时间延长。

实施例3

1、主要色谱条件为：

色谱柱为c18(250×4.6mm，5μm)；柱温为35℃；检测波长为230nm；流动相为乙腈-磷酸二氢钾缓冲溶液(体积比＝50:50，ph＝4)；流速为1.0ml/min；进样量为20μl；洗脱时间为15min。

2、测试步骤：

(1)标准溶液的配制

同实施例1。

(2)供试品溶液的配制

同实施例1。

(3)他唑巴坦中他唑巴坦二苯甲酯的测定

按照所述高效液相色谱条件对他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯进行测定，测得含量为85.816％。

结论：由附图4可以看出，该流动相配比下峰型稍差，他唑巴坦二苯甲酯标准品在该色谱条件下的保留时间和他唑巴坦中间产物的保留时间基本一致。

采用空白加标的方法进行回收率和精密度测定。将0.2mg/ml、0.4mg/ml和0.6mg/ml3个浓度的标准品添加到空白样品中，每个浓度样品测定5次，记录峰面积，分别带入回归方程，并依据公式分别计算回收率和rsd。结果如表1。

表1回收率与精密度测试结果

结论：由表1可以看出，该方法回收率在90％以上，他唑巴坦二苯甲酯峰面积的rsd为均小于2.0％，可见该方法的回收率和系统精密度良好。