直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法与流程

文档序号:15734106发布日期:2018-10-23 21:11阅读:来源:国知局

技术特征:

1.直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法,其特征是:以茶鲜叶、或茶在制品、或成品茶作为待测样品,依次进行以下步骤:

1)、待测样品中糖苷结合态香气前体提取:

将0.05-0.1g干重的待测样品利用20mL提取剂进行提取,提取液经离心,得上清液;所述提取剂为预冷的体积浓度为90-95%甲醇;

在上清液中添加3μg 4-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷作为内标,并加入0.1-0.2g经超纯水预溶胀的不溶性聚乙烯吡咯烷酮PVPP充分混匀,静置后离心,离心所得的上清浓缩至干,得浸膏;将浸膏溶于1-2mL超纯水中,并过0.22μm微孔滤膜,得茶叶糖苷结合态香气前体提取物;

2)、提取物中糖苷结合态香气前体UPLC-MS/MS分析:

以UPLC HSST3色谱柱为分析柱,柱温35℃,进样量5ul;以甲酸/水(0.05/99.95,v/v)为流动相A、以乙腈为流动相B进行梯度洗脱,流速为0.3ml/min,洗脱时间程序为0-3min B相保持10%、3.01-15min B相从10%增加至20%、15.01-20min B相从20%增加至35%、20.01-22min B相从35%增加至90%、22.01-24min B相保持90%、24.01-26min B相保持10%;

MS分析条件为:电喷雾ESI负电离模式、毛细管电压3KV、二级锥孔电压3V、透镜电压0.2V、离子源温度150℃,脱溶剂气温度500℃、脱溶剂气流量800L/h、锥孔气流量60L/h、锥孔电压25V、碰撞气氩气流速0.25mL/min、扫描质荷比范围为100~700m/z、数据采集时间为26min;

在4-9min对应的通道1中以离子对346/138检测内标4-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷、以离子对447/269检测苯甲醇樱草糖苷、以离子对491/293检测水杨酸甲酯樱草糖苷,在7-13min对应的通道2中以离子对461/149检测苯乙醇樱草糖苷、以离子对439/149检测顺3-己烯醇樱草糖苷、以离子对509/331检测芳樟醇氧化物(I和II)樱草糖苷,在13-17min对应的通道3中以离子对509/331检测芳樟醇氧化物III樱草糖苷,在17-23min对应的通道4中以离子对493/161检测芳樟醇樱草糖苷、以离子对493/149检测香叶醇樱草糖苷;

3)、茶叶糖苷结合态香气前体物质含量计算:

以4-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷内标为参照,获得苯甲醇樱草糖苷、水杨酸甲酯樱草糖苷、苯乙醇樱草糖苷、顺3-己烯醇樱草糖苷、芳樟醇氧化物I樱草糖苷、芳樟醇氧化物II樱草糖苷、芳樟醇氧化物樱草糖苷III、芳樟醇樱草糖苷、香叶醇樱草糖苷这9种糖苷结合态香气前体的物质含量。

2.根据权利要求1所述的直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法,其特征是:

所述步骤3)的公式为:内标浓度×内标体积×目标化合物峰面积/内标峰面积×提取物体积/茶叶样品干重。

3.根据权利要求1或2所述的直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法,其特征是,所述经超纯水预溶胀的不溶性聚乙烯吡咯烷酮PVPP的制备方法为:按照超纯水:PVPP=2.8~3.2:1的质量比,将PVPP浸泡在超纯水中静置2±0.2h;

静置结束后,去除PVPP表面的水分,得超纯水预溶胀的PVPP。

4.根据权利要求1或2所述的直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法,其特征是:

一、当待测样品为茶鲜叶、或茶在制品时:

称取0.05-0.1g干重的待测样品,与10mL提取剂混合后,用匀浆机匀浆10-20min,然后离心,分别得首次上清液和残渣;

以残渣与10mL提取剂混合后,超声浸提10~20min,离心,吸取上清,并与首次上清液合并后作为上清液;

所述离心为5000±500r/min、4±1℃离心5±1min;

二、当待测样品为成品茶时:

将待测样品粉碎,取0.05-0.1g干重的待测样品粉末加入10mL提取剂超声浸提20±5min,然后离心,分别得首次上清液和残渣;

将残渣与10mL提取剂混合后超声浸提10~20min,离心,吸取上清,并与首次上清液合并后作为上清液;

所述离心为5000±500r/min、4±1℃离心5±1min。

5.根据权利要求1或2所述的直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法,其特征是:

所述步骤1)中,在上清液中添加3.0μL浓度为1mg/mL的4-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷溶液作为内标。

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