一种盐酸二甲双胍及其制剂的质量控制方法与流程

本发明属于药物分析领域，特别涉及一种盐酸二甲双胍及其制剂的质量控制方法。

背景技术：

糖尿病是一种因胰岛功能减退、胰岛素抵抗等原因引发人体内糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱的症状。最新的流行病学调查显示，在我国糖尿病病患逐年增长，其已经成为继心血管疾病之外的第二大非传染性疾病。

盐酸二甲双胍(metforminhydrochloride)，cas：1115-70-4，属于双胍类化合物，具有降低血糖、降低三酰甘油、胆固醇、极低密度脂蛋白，增加纤维蛋白溶解的作用，临床用于成人单纯饮食控制及体育锻炼治疗无效的ii型糖尿病的治疗，特别可以用于肥胖ii型糖尿病的治疗，为临床首选用于治疗ii型糖尿病的口服降糖药，常用剂型有口服常释片剂和口服缓释片剂。

化学药品中有关物质的研究是药品研发过程中的一项重要内容，其包括对已知、未知杂质进行定性研究、定量研究，以及对相关检测方法的开发及方法学研究。规范地进行有关物质研究可以将杂质控制在安全、合理的限度之内，将直接影响到上市药品的质量及临床使用的安全性。现有的研究表明，基于化合物本身的化学性质，盐酸二甲双胍及其制剂在制备和贮存过程中易产生杂质，进而影响临床用药的安全性，各国药典均设定了检测方法考察盐酸二甲双胍原料药及制剂中有关物质的情况，并对有效成分和杂质的含量均有规定。

盐酸二甲双胍常见有关物质

现有技术公开了多种盐酸二甲双胍原料药及制剂中有关物质的检测方法。其中《中国药典》(2015年版)第二部公开了一种盐酸二甲双胍片有关物质的高效液相(hplc)检测方法，采用以磺酸基阳离子交换键合硅胶为填充剂的分析柱，以1.7％磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节ph值至3.0)为流动相，检测波长为218nm，其同时规定供试品溶液的色谱图中如有与对照品溶液色谱图中双氰胺峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，不得超过盐酸二甲双胍标示量的0.02％，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍(0.1％)，其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.2倍(0.6％)。《日本药典》(jpxvii)和《美国药典》(usp41)也公开了同样的检测方法，其中《日本药典》公开的方法将分析柱的柱温设定为40℃，《美国药典》公开的方法将分析柱的柱温设定为30℃。

中国专利cn104337811a公开了一种瑞格列奈-盐酸二甲双胍片有关物质的hplc检测方法，该方法为：色谱柱：磺酸基阳离子交换键合硅胶capcellpak5μscxug80a柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相：0.35mol/l(3.9％)磷酸二氢铵缓冲液(ph3.0)；检测波长为230nm，采用该方法可以对制剂中盐酸二甲双胍及有关物质进行质量控制。

北方药学，张荣琴，2018，15(8)，p1，盐酸二甲双胍缓释片中双氰胺及有关物质的测定，文献公开了一种盐酸二甲双胍片有关物质的hplc检测方法，该方法为：色谱柱：hypersilscx柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相：0.43mol/l(4.7％)磷酸二氢铵缓冲液(ph2.5)；检测波长为218nm，采用该方法可以使盐酸二甲双胍与其杂质双氰胺分离度≥1.5。

现有技术还公开了其他对盐酸二甲双胍原料药或制剂的hplc检测方法，这些方法或采用梯度洗脱，或采用含有有机溶剂(如乙腈、甲醇等)的流动相体系，或采用其他填料的分析柱，这些方法均可以实现对盐酸二甲双胍原料药或制剂的质量控制。

尽管现有技术公开的方法已经可以实现常规杂质的质量控制，但基于不同来源的原料药及其制剂各自的生产工艺及贮存条件等的多样性，其有关物质情况也相对存在多样性，此外，分析过程中还存在检测仪器和实验设备的差别，因此，具有针对性地寻找一种更具普适性的hplc方法，以实现对盐酸二甲双胍原料药及制剂中相关的已知及未知杂质更好的定性和定量研究是现有技术仍待解决的技术问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种盐酸二甲双胍及其制剂的高效液相(hplc)质量控制方法，该方法较现有技术公开的方法更具有普适性，表现为：采用该方法可以实现各有关物质更好的分离，进而有利于实现对原料药或制剂中有关物质更准确的定量分析；在此基础上，该方法在破坏实验中进一步表现为可以实现对破坏实验中新产生未知杂质的有效分离，进而有利于实现对原料药或制剂在制备、贮存过程中潜在可能产生的未知杂质的有效质量控制。

本发明的上述目的通过以下技术方案予以实现：

一种盐酸二甲双胍及其制剂的质量控制方法，所述方法包含如下步骤：

(1)制备样品溶液；

(2)采用高效液相法对样品溶液进行分析；

(3)整理分析结果；

其中所述高效液相法的分析条件为：

色谱柱：磺酸基阳离子交换键合硅胶色谱柱

流动相：2.3％磷酸二氢铵溶液，ph2.6

流速：1.0～1.7ml/min

进样浓度：2.5～10mg/ml

进样量：10～20μl

检测波长：218nm

柱温：20℃。

本发明所述盐酸二甲双胍及其制剂的质量控制方法中，高效液相法所采用的流动相中磷酸二氢铵的浓度、流动相ph值、柱温及色谱柱是影响的检测效果的重要因素。

具体的，所述高效液相法所采用的流动相中磷酸二氢铵的浓度和ph值均会影响检测效果；对于流动相中磷酸二氢铵的浓度而言，检测样品为原料药或制剂制备得到的供试溶液，当ph值保持不变时，低浓度的磷酸二氢铵流动相不能实现所有杂质的基线分离；特别的，采用各国药典报道的方法时，杂质1-甲基双胍峰未能实现有效分离，而采用高浓度的磷酸二氢铵流动相尽管可以实现较好的杂质分离度，但是其出峰时间较长进而影响检测效率；另外，发明人在实验中还偶然发现，当检测样品为破坏实验供试溶液时，采用较低浓度的磷酸二氢铵为流动相时，部分来源的原料药或制剂可以检测到新出现未知杂质峰，表明产品在制备、贮存中存在产生该未知杂质的潜在可能，进一步研究表明，而随着磷酸二氢铵浓度升高，未知杂质峰的分离度降低，当磷酸二氢铵浓度为2.8％时，未知杂质已与主峰完全重叠；综合检测效果和检测效率，发明人得出：当流动相中磷酸二氢铵的浓度为2.3％时，有利于实现检测对各供试溶液中杂质的最好分离，并具有较高的检测效率。如无特别说明，本发明中磷酸二氢铵的浓度均指代为质量百分比浓度。

对于流动相的ph值而言，检测样品为原料药或制剂制备得到的供试溶液，当磷酸二氢铵的浓度保持不变时，低ph值的流动相容易损坏分析柱，缩短分析柱的使用寿命，而高ph值的流动相不能实现所有杂质的基线分离，且当检测样品为破坏实验供试溶液时，升高ph值会影响未知杂质与主峰的分离度，进而影响检测效果；发明人综合得出，当流动相ph值为2.6时，有利于实现检测对各供试溶液中杂质的最好分离。所述流动相的ph值可以采用本领域常见的有机酸或无机酸调节，如醋酸、磷酸、硫酸或盐酸等，优选磷酸。

柱温同样是决定分离效果的重要因素之一，具体的，对于原料药或制剂制备得到的供试溶液，随着柱温降低杂质峰与主峰的分离度逐渐变大，但当检测样品为破坏实验供试溶液时，随着柱温降低未知杂质与主峰分离度有逐渐变小的趋势，直至重合；发明人综合得出，柱温为20℃条件分离效果最好。

所述高效液相法所采用的磺酸基阳离子交换键合硅胶填料的色谱柱，本领域的技术人员可以理解，即便是同样填料的色谱柱，其效能也存在区别，并影响检测效果；更具体的，本发明人经过多次实验证明，本发明所采用的磺酸基阳离子交换键合硅胶填料的色谱柱优选为资生堂capcellpakscxug80(s5)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)，在于使用该色谱柱在本发明的检测条件下对于各供试溶液均可以获得最佳检测效果，可能与资生堂capcellpakscxug80(s5)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)本身的物理和化学性质有关。

所述高效液相法的进样浓度为2.5～10mg/ml(以盐酸二甲双胍计)，进样量10～20μl。具体的，过低的进样浓度和进样量使得待测产品进样过少，进而使得检测误差偏大，而过高的进样浓度和进样量则使得分离效果收到影响，同样使得检测误差偏大，优选的，当所述高效液相法的进样浓度为5mg/ml，进样量为10μl时，可以获得最佳检测效果。

结合现有技术公开的信息，所述高效液相法流动相的流速可为1.0～1.7ml/min，优选的，当流动相的流速控制为1.0ml/min时，既可以获得较好的分离效果，又保证了分析效率。

参考《中国药典》(2015版)公开的信息，所述高效液相法的检测波长为218nm。

本发明的一个优选的具体方案中，所述盐酸二甲双胍及其制剂的高效液相(hplc)质量控制方法为：

一种盐酸二甲双胍及其制剂的质量控制方法，所述方法包含如下步骤：

(4)制备样品溶液；

(5)采用高效液相法对样品溶液进行分析；

(6)整理分析结果；

其中所述高效液相法的分析条件为：

色谱柱：资生堂capcellpakscxug80(s5)色谱柱4.6mm×250mm,5μm

流动相：2.3％磷酸二氢铵溶液，ph2.6

流速：1.0ml/min

进样浓度：5mg/ml

进样量：10μl

检测波长：218nm

柱温：20℃。

本发明所述盐酸二甲双胍及其制剂的质量控制方法可以用于盐酸二甲双胍原料药，以及含有盐酸二甲双胍的制剂的质量控制。具体的，所述含有盐酸二甲双胍的制剂可为盐酸二甲双胍单方或复方制剂，所述制剂可为口服常释制剂或口服缓释制剂，所述口服制剂可以是片剂、胶囊剂等常见口服制剂；更具体的，所述含有盐酸二甲双胍的制剂为盐酸二甲双胍的规格为250mg、500mg、850mg等的口服常释制剂或口服缓释制剂；更进一步的，所述方法可以用于对广东华南药业集团有限公司生产的盐酸二甲双胍片(250mg)有关物质的分析中。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：

本发明提供了一种盐酸二甲双胍及其制剂的高效液相(hplc)质量控制方法，采用该方法可以实现原料药/制剂供试溶液和破坏实验所得供试溶液中各有关物质的有效分离，进而认为该方法可以同时实现对原料药或制剂在制备、贮存过程中已经产生/潜在可能产生的已知杂质和未知杂质的有效质量控制，较现有技术公开的方法更具有普适性。

附图说明

图1为加标供试溶液在不同浓度磷酸二氢铵溶液(ph3.0)中叠加色谱图。

图2为碱破坏供试溶液在不同浓度磷酸二氢铵溶液(ph3.0)中叠加色谱图。

图3为加标供试溶液在不同流动相ph值的叠加色谱图。

图4为碱破坏供试溶液在不同流动相ph值中的叠加色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。

本发明具体实施方式中所使用的样品为广东华南药业集团有限公司生产的盐酸二甲双胍片(250mg)，批号：181101、181102、181103。

本发明具体实施方式中所使用的溶剂均为市售分析纯。

本发明具体实施方式中所使用的高效液相色谱仪为：agilent1260液相色谱仪

本发明具体实施方式中所使用的色谱柱为：资生堂capcellpakscxug80(s5),250×4.6mm,5μm，磺酸基阳离子交换键合硅胶填料。

本发明具体实施方式中所述有关物质及其对应结构如下表：

表1有关物质及其结构

本发明具体实施方式中所使用的流动相溶液采用以下方法制备得到：称取适当重量磷酸二氢铵，加纯化水1000ml溶解，用磷酸调节ph至目标值，混匀，脱气，作为流动相。在本发明中，磷酸二氢铵溶液的单位为质量百分比。

本发明具体实施方式中所使用供试溶液采用以下方法制备得到：精密称定取盐酸二甲双胍片研磨所得细粉适量(相当于盐酸二甲双胍500mg)，置于100ml量瓶中，加流动相适量，超声15分钟使盐酸二甲双胍溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液4ml，取续滤液作为供试溶液。

为更清楚的研究质量控制方法的检测效果，特采用添加标准有关物质供试溶液(加标供试溶液)为检测对象，其制备方法与以上供试溶液制备方法类似，所得与加标供试溶液中二甲双胍浓度约为5mg/ml，双氰胺浓度约为1μg/ml，1-甲基双胍浓度约为5μg/ml，n,n-二甲基三聚氰胺浓度约为5μg/ml，三聚氰胺浓度约为5μg/ml。

按照《药品质量标准分析方法验证指导原则》的要求验证检测方法对于产品在酸(碱)水解、强光、高温、高湿及氧化等加速破坏后所得供试溶液的检测效果。

实施例1

流动相中磷酸二氢铵浓度对加标供试溶液检测效果的影响

具体实验方法及步骤如下：

(1)制备加标供试溶液；

(2)采用高效液相法对加标供试溶液进行分析；

(3)整理分析结果；

上述步骤(2)中高效液相法的分析条件为：

流动相：磷酸二氢铵浓度分别为1.7％、1.9％、2.1％、2.3％、2.5％、2.8％、3.3％，ph值均为3.0

流速：1.0ml/min

进样浓度：5mg/ml(以盐酸二甲双胍计)

进样量：10μl

检测波长：218nm

柱温：20℃。

所得检测结果如下表：

表2流动相中磷酸二氢铵浓度对杂质分离度影响

从上表数据可以发现：当流动相ph值固定不变时，随着磷酸二氢铵浓度降低(流动相ph值固定为3.0)，有关物质b与主峰的分离度减小，当磷酸二氢铵浓度为1.7％、ph值固定为3.0时(各国药典方法)，有关物质b与主峰重叠，各浓度所得叠加色谱图详见图1，其中3为有关物质b对应的峰。

综合可知，当采用药典方法(1.7％，ph3.0)时，无法将有关物质b与主峰分开，而过高的浓度则表现为对于破坏实验供试溶液无法实现部分未知杂质的有效分离。

实施例2

流动相中磷酸二氢铵浓度碱破坏供试溶液检测效果的影响

具体实验方法及步骤如下：

(1)制备碱破坏供试溶液；

(2)采用高效液相法对碱破坏供试溶液进行分析；

(3)整理分析结果；

上述步骤(2)中高效液相法的分析条件为：

流动相：磷酸二氢铵浓度分别为1.7％、1.9％、2.1％、2.3％、2.5％、2.8％、3.3％，ph值均为3.0

流速：1.0ml/min

进样浓度：5mg/ml(以盐酸二甲双胍计)

进样量：10μl

检测波长：218nm

柱温：20℃。

所得检测结果如下表：

表3流动相中磷酸二氢铵浓度ph值对杂质分离度影响

从上表数据可以发现：在碱破坏实验中发现新的未知杂质(如未知杂质1)，当流动相ph值固定不变时，随着磷酸二氢铵浓度升高(流动相ph值固定为3.0)，未知杂质1与主峰的分离度减小，当磷酸二氢铵浓度为2.8％以上时，未知杂质1与主峰重叠，各浓度所得叠加色谱图详见图2。

在后续进一步对碱水解、强光、高温、高湿及氧化破坏实验供试溶液的研究中，获得了与碱破坏实验供试溶液基本一致的结果。

综合实施例1和实施例2的结果，综合考虑到流动相中磷酸二氢铵的浓度太高对色谱柱和色谱仪的损耗增加，选择2.3％磷酸二氢铵溶液作为有关物质分析方法的流动相进行下一步方法的优化。

实施例3

流动相ph值对加标供试溶液和碱破坏供试溶液检测效果的影响

具体实验方法及步骤如下：

(1)分别制备加标供试溶液和碱破坏供试溶液；

(2)采用高效液相法对各供试溶液进行分析；

(3)整理分析结果；

上述步骤(2)中高效液相法的分析条件为：

流动相：磷酸二氢铵浓度2.3％，ph值分别为2.6、2.8、3.0、3.5

流速：1.0ml/min

进样浓度：5mg/ml(以盐酸二甲双胍计)

进样量：10μl

检测波长：218nm

柱温：20℃。

所得检测结果如下表：

表4流动相ph值对杂质分离度影响

从上表数据可以发现：随着流动相ph值的降低，加标供试溶液中有关物质b与主峰分离度变大，流动相的ph值在3.0至3.5区间变化时，加标供试溶液中有关物质b与主峰存在重叠，当流动相的ph值为3.5时，分离度为0.7，各ph值所得叠加色谱图详见图3，其中3为有关物质b对应的峰；

而对于碱破坏供试溶液，随着流动相ph值升高，未知杂质1与主峰分离度减小，当流动相ph值从3.0升高至3.5时，未知杂质1与主峰完全重叠，各ph值所得叠加色谱图详见图4，在后续进一步对碱水解、强光、高温、高湿及氧化破坏实验供试溶液的研究中，获得了与碱破坏实验供试溶液基本一致的结果。

结合实施例1-3对于流动相磷酸二氢铵浓度变化及ph值变化对杂质分离度影响试验结果，当2.3％磷酸二氢铵(ph2.6)时可以实现对原料药、制剂供试溶液、破坏供试溶液中各杂质的有效分离，更好的达到检测效果，因此选择2.3％磷酸二氢铵(ph2.6)为标准条件。

实施例4

以2.3％磷酸二氢铵溶液(ph2.6)为流动相，通过调节柱温至20℃、25℃、30℃，考察柱温对加标供试溶液和碱破坏供试溶液检测效果的影响。

具体实验方法及步骤如下：

(1)分别制备加标供试溶液和碱破坏供试溶液；

(2)采用高效液相法对各供试溶液进行分析；

(3)整理分析结果；

上述步骤(2)中高效液相法的分析条件为：

流动相：磷酸二氢铵浓度2.3％，ph值分别为2.6

流速：1.0ml/min

进样浓度：5mg/ml(以盐酸二甲双胍计)

进样量：10μl

检测波长：218nm

柱温：分别为20℃、25℃、30℃。

所得检测结果如下表：

表5柱温对杂质分离度影响

从上表数据可以发现：对于加标供试溶液，随着柱温升高，有关物质b与主峰分离度逐渐减小，至30℃时分离度为0.9；

对于碱破坏供试溶液，则表现为在考察柱温范围内均具有很好的分离度，在后续进一步对碱水解、强光、高温、高湿及氧化破坏实验供试溶液的研究中，获得了与碱破坏实验供试溶液基本一致的结果。

综合实施例1-4可知当高效液相法中流动相为2.3％磷酸二氢铵溶液，ph2.6，流速为1.0ml/min，进样浓度为5.0mg/ml，进样量为10μl，检测波长为218nm，柱温为20℃时，其检测效果最佳，表现为可以实现加标供试溶液和破坏供试溶液中各有关物质较好的分离效果，且检测效率较高，进一步的方法学验证表明，该方法在精密度、检测限等方面均符合药品检测相关要求，可知该方法可以在现有技术的基础上实现对盐酸二甲双胍原料药或制剂在制备、贮存过程中潜在可能产生的未知杂质更有效的质量控制。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。