本发明涉及农产品农药残留检测技术领域，具体为一种农产品农药残留精确检测方法。
背景技术：
农产品的农药残留含量是检测农产品质量的一个重要指标，农产品中的农药残留超标后会严重影响消费者的食用安全，严重时会造成消费者致病甚至死亡，因此各个国家对与农产品的农药残留都有严格的标准制定，研究如何降低农产品的农药残留成为一个重要的科研议题，而农产品中农药残留的检测就成为改善农产质量的一个重要检查依据，现有技术中的针对农产品农药残留的检测方法有很多，根据其原理大致可分为：生化测定法与色谱检测法，现有的检测方法虽然在一定程度上能够测定出农产品中的农药残留，但是它们在实际的使用中还存在以下不足之处：
1.针对苹果、梨子、桃子等果肉较多的水果，其检测部位过于单一，无法针对水果各个部分的农药残留程度做相应的精细检测；
2.在实际检测的过程中，对检测对象的处理太过简单，无法形成一个系统的精确对比，因此检测结果存在较大的误差，降低其整体检测精度。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种农产品农药残留精确检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种农产品农药残留精确检测方法，该方法具体包括以下步骤：
步骤一，果皮表面清理，将水果放置到超声波清理槽内，并在槽体内加入20-25℃的温水，以水面没过水果1cm高度为限，浸泡3-5分钟后，采用超声波清洗2-3分钟，然后取出水果将果面擦干，同时将清理液取出备用；
步骤二，过滤浓缩，将步骤一中的清理液加热至40-45℃后搅拌5-10分钟，然后将溶液表层的蜡层滤除，同时将滤液中的杂质滤除，留下清液，采用冷冻干燥机，将滤液中多余的水分取出，使滤液的浓度调节到0.01%-0.1%范围内，然后将滤液冷藏备用，冷藏温度控制在2-4℃；
步骤三，分离水果果柄处的果皮，将水果的果柄去除，然后将果柄附近的1cm范围内的果皮切下，注意果皮厚度控制在1-2mm；
步骤四，分离水果果脐处的果皮，再将水果脐附近1cm范围内的果皮切下，注意果皮的厚度控制在1-2mm；
步骤五，分离水果中间的果肉与果皮，将剩余部分的果皮采用刮皮刀切下，注意果皮的厚度控制在1-1.5mm，然后将果肉按皮下2-5mm，皮下5-10mm进行分切，注意将果肉切成0.5-1cm大小的方块；
步骤六，将步骤三、步骤四与步骤五中分切的果皮与果肉分别放入到单独的搅拌机内，各自进行粉碎，将果皮与果肉均粉碎成碎果浆，然后将果浆分别倒入到离心管内，并向离心管内加入果浆2-3倍的去离子水，浸泡10-20分钟，放入到离心机内10-20分钟后，将离心管取出，并分别将浆液中的残渣滤除，取上层清液作为待测样品原液；
步骤七，试剂配制，将缓冲液试剂与蒸馏水混合摇匀成缓冲液备用；将标注为底物的瓶中添加适量蒸馏水摇匀成底物溶液，并冷藏保存备用；将显色剂与适量缓冲液混合摇匀成显色溶液，并冷藏保存备用；检测酶与适量缓冲液配混合摇匀成酶溶液，冷藏保存备用；
步骤八，对照样检测，取酶溶液100ul与缓冲液2.5ml混合摇匀，然后加入显色溶液100ul与底物溶液20ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小。
步骤九，样品检测，先将待测样品原液与缓冲液混合摇匀成样品检测液备用，取酶溶液100ul与样品检测液2.5ml混合摇匀并抑制10-15min，然后加入显色溶液100ul与底物溶液100ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小。
优选的，步骤六中，注意投入到离心管内的果浆为离心管容积的五分之一，所用离心管为10-15ml的带刻度、尖底、连盖型离心管。
优选的，步骤六中，果皮与果肉的粉碎时长分别为8-10分钟与5-8分钟，粉碎后果浆中的果肉颗粒度大小控制在60-80目。
优选的，步骤七中，所选缓冲液试剂由无水磷酸氢二钾与磷酸二氢钾以15:4的比重混合，且缓冲液中缓冲液试剂与蒸馏水的比重为19:125。
优选的，步骤七中，底物为硫代乙酰胆碱，且底物与蒸馏水的比重为1：120，底物溶液的冷藏温度控制在2-4℃。
优选的，步骤七中，所选显色剂由二硫代二硝基苯甲酸和碳酸氢钠以10:1的比重混合，且显色剂与缓冲液的配比比重为1:116，显色溶液的冷藏温度控制在2-4℃。
优选的，步骤七中，所选检测酶为乙酰胆碱酯酶，且检测酶与缓冲液根据检测酶的活性情况进行配比，保证配制后的酶溶液中的乙酰胆碱酯酶在3min内的吸光度变化值应大于0.3，酶溶液的冷藏温度控制在2-4℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.本发明的检测方法中，对水果的上、中、下、内、外均做细致的检测划分，因此提高了整个水果各个部位农药残留检测的精细程度；
2.本发明的检测方法中对水果的各个部分进行单独的细化处理，整个检测结果可以形成一个系统的对比，因此降低了其检测的误差，提高了检测的精度。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
本发明提供一种技术方案：一种农产品农药残留精确检测方法，待检农产品为果面喷药一周后的苹果，且一周内并未降雨，此苹果内农药残留方法具体包括以下步骤：
步骤一，果皮表面清理，将苹果放置到超声波清理槽内，并在槽体内加入25℃的温水，使水面没过苹果表面1cm高度，浸泡5分钟后，采用超声波清洗3分钟，然后取出水果将果面擦干，同时将清理液取出备用，注意在清洗前将苹果的果柄剪短，避免因过长的果柄弯曲与果皮贴合导致果皮受损，影响检测结果，在擦拭水果时，保证擦拭力度均匀，不要伤到果皮，影响检测结果；
步骤二，过滤浓缩，将步骤一中的清理液加热至42℃后搅拌8分钟，在此过程中苹果表层的蜡层会融化并漂浮在溶液表层，然后将溶液表层的蜡层滤除，为了避免滤液中的泥沙影响测量结果，同时将滤液中的杂质滤除，留下清液，采用冷冻干燥机，将滤液中多余的水分取出，注意使滤液的整体体积控制在800-1200ml，使滤液的浓度调节到0.01%-0.1%范围内，然后将滤液冷藏备用，冷藏温度控制在4℃；
步骤三，分离苹果果柄处的果皮，将苹果的果柄去除，因为苹果的果柄为非食用部分，因此不作为农药残留的必须检测部分，而苹果果柄处在喷洒农药时，农药容易滞留在此处形成的凹坑内，因此容易形成农药残留且不易清洗，因此此处的农药残留水平需与苹果的中间部位的农药残留水平会有所不同，需要进行区别检测，然后将果柄附近的1cm范围内的果皮切下，在切割过程汇中，注意下刀平稳，保证果皮的连贯性，切下的果皮厚度为1.5mm；
步骤四，分离苹果果脐处的果皮，苹果在喷洒农药的过程中，药液会沿苹果表面滑落到苹果底部的果脐底部，通常药液挥发后会在果脐的底部形成斑痕，因此此处的农药残留程度与苹果的中间部位的农药残留程度会有所不同，需要进行区别检测，再将苹果果脐附近1cm范围内的果皮切下，注意切割过程中保持运刀的平稳性，尽量保证切割下的果皮的连贯性，切下的果皮厚度为1.6mm；
步骤五，分离苹果中间的果肉与果皮，将剩余部分的果皮采用刮皮刀切下，在削皮的过程中，注意保证切削下的果皮厚度的一致性，切下的果皮厚度为1.3mm，然后将果肉按皮下3mm，皮下6mm进行分切，注意将果肉切成0.6cm大小的方块；
步骤六，将步骤三、步骤四与步骤五中分切的果皮与果肉分别放入到单独的搅拌机内，各自进行粉碎，果皮与果肉的粉碎时长分别为10分钟与8分钟，将果皮与果肉均粉碎成碎果浆，粉碎后果浆中的果肉颗粒度大小控制在60-80目，然后将果浆分别倒入到离心管内，并向离心管内加入果浆3倍的去离子水，浸泡15分钟，放入到离心机内15分钟后，将离心管取出，并分别将浆液中的残渣滤除，取上层清液作为待测样品原液，注意投入到离心管内的果浆为离心管容积的五分之一，所用离心管为10ml的带刻度、尖底、连盖型离心管；
步骤七，试剂配制，分别取无水磷酸氢二钾15g与磷酸二氢钾以4g混合制成缓冲液试剂，然后将制备的缓冲液试剂与1250ml蒸馏水混合摇匀成缓冲液备用；选用30mg硫代乙酰胆碱作为底物，然后将标注为底物的瓶中添加3.6ml的蒸馏水摇匀成底物溶液，并在4℃的温度下冷藏保存备用；分别取二硫代二硝基苯甲酸200mg和碳酸氢钠19.5mg制成显色剂，将显色剂与25ml缓冲液混合摇匀成显色溶液，并在4℃的温度下冷藏保存备用；选用乙酰胆碱酯酶作为检测酶与适量的缓冲液配混合摇匀成酶溶液，保证配制后的酶溶液中的乙酰胆碱酯酶在3min内的吸光度变化值应大于0.3，然后在4℃的温度下冷藏保存备用；
步骤八，对照样检测，取酶溶液100ul与缓冲液2.5ml混合摇匀，然后加入显色溶液100ul与底物溶液20ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小。
步骤九，样品检测，先将待测样品原液分别与缓冲液混合摇匀成样品检测液备用，注意在制备样品检测液时，不要将苹果各个部分制备的样品检测液混淆，取酶溶液100ul与样品检测液2.5ml混合摇匀并抑制15min，然后加入显色溶液100ul与底物溶液100ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小，依次将苹果各部位的样品检测液按上述步骤进行检测，并将检测结果统一记录下来。
实施例二
本发明提供一种技术方案：一种农产品农药残留精确检测方法，待检农产品为果面喷药一周后的梨子，且一周内并未降雨，此梨子内农药残留方法具体包括以下步骤：
步骤一，果皮表面清理，将梨子放置到超声波清理槽内，并在槽体内加入22℃的温水，使水面没过梨子表面1cm高度，浸泡4分钟后，采用超声波清洗2分钟，然后取出水果将果面擦干，同时将清理液取出备用，注意在清洗前将梨子的果柄剪短，避免因过长的果柄弯曲与果皮贴合导致果皮受损，影响检测结果，在擦拭水果时，保证擦拭力度均匀，不要伤到果皮，影响检测结果；
步骤二，过滤浓缩，将步骤一中的清理液加热至40℃后搅拌5分钟，在此过程中梨子表层的蜡层会融化并漂浮在溶液表层，然后将溶液表层的蜡层滤除，为了避免滤液中的泥沙影响测量结果，同时将滤液中的杂质滤除，留下清液，采用冷冻干燥机，将滤液中多余的水分取出，注意使滤液的整体体积控制在800-1200ml，使滤液的浓度调节到0.01%-0.1%范围内，然后将滤液冷藏备用，冷藏温度控制在4℃；
步骤三，分离梨子果柄处的果皮，将梨子的果柄去除，因为梨子的果柄为非食用部分，因此不作为农药残留的必须检测部分，而梨子果柄处在喷洒农药时，农药容易滞留在此处形成的凹坑内，因此容易形成农药残留且不易清洗，因此此处的农药残留水平需与梨子的中间部位的农药残留水平会有所不同，需要进行区别检测，然后将果柄附近的1cm范围内的果皮切下，在切割过程汇中，注意下刀平稳，保证果皮的连贯性，切下的果皮厚度为1.8mm；
步骤四，分离梨子果脐处的果皮，梨子在喷洒农药的过程中，药液会沿梨子表面滑落到梨子底部的果脐底部，通常药液挥发后会在果脐的底部形成斑痕，因此此处的农药残留程度与梨子的中间部位的农药残留程度会有所不同，需要进行区别检测，再将梨子果脐附近1cm范围内的果皮切下，注意切割过程中保持运刀的平稳性，尽量保证切割下的果皮的连贯性，切下的果皮厚度为1.7mm；
步骤五，分离梨子中间的果肉与果皮，将剩余部分的果皮采用刮皮刀切下，在削皮的过程中，注意保证切削下的果皮厚度的一致性，切下的果皮厚度为1.5mm，然后将果肉按皮下4mm，皮下8mm进行分切，注意将果肉切成0.8cm大小的方块；
步骤六，将步骤三、步骤四与步骤五中分切的果皮与果肉分别放入到单独的搅拌机内，各自进行粉碎，果皮与果肉的粉碎时长分别为8分钟与5分钟，将果皮与果肉均粉碎成碎果浆，粉碎后果浆中的果肉颗粒度大小控制在60-80目，然后将果浆分别倒入到离心管内，并向离心管内加入果浆2倍的去离子水，浸泡10分钟，放入到离心机内10分钟后，将离心管取出，并分别将浆液中的残渣滤除，取上层清液作为待测样品原液，注意投入到离心管内的果浆为离心管容积的五分之一，所用离心管为15ml的带刻度、尖底、连盖型离心管；
步骤七，试剂配制，分别取无水磷酸氢二钾20g与磷酸二氢钾以5.33g混合制成缓冲液试剂，然后将制备的缓冲液试剂与1666.67ml蒸馏水混合摇匀成缓冲液备用；选用40mg硫代乙酰胆碱作为底物，然后将标注为底物的瓶中添加4.8ml的蒸馏水摇匀成底物溶液，并在4℃的温度下冷藏保存备用；分别取二硫代二硝基苯甲酸266.67mg和碳酸氢钠26mg制成显色剂，将显色剂与33.33ml缓冲液混合摇匀成显色溶液，并在4℃的温度下冷藏保存备用；选用乙酰胆碱酯酶作为检测酶与适量的缓冲液配混合摇匀成酶溶液，保证配制后的酶溶液中的乙酰胆碱酯酶在3min内的吸光度变化值应大于0.3，然后在4℃的温度下冷藏保存备用；
步骤八，对照样检测，取酶溶液100ul与缓冲液2.5ml混合摇匀，然后加入显色溶液100ul与底物溶液20ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小。
步骤九，样品检测，先将待测样品原液分别与缓冲液混合摇匀成样品检测液备用，注意在制备样品检测液时，不要将梨子各个部分制备的样品检测液混淆，取酶溶液100ul与样品检测液2.5ml混合摇匀并抑制15min，然后加入显色溶液100ul与底物溶液100ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小，依次将梨子各部位的样品检测液按上述步骤进行检测，并将检测结果统一记录下来。
实施例三
本发明提供一种技术方案：一种农产品农药残留精确检测方法，待检农产品为果面喷药一周后的桃子，且一周内并未降雨，此桃子内农药残留方法具体包括以下步骤：
步骤一，果皮表面清理，将桃子放置到超声波清理槽内，并在槽体内加入23℃的温水，使水面没过桃子表面1cm高度，浸泡6分钟后，采用超声波清洗4分钟，然后取出水果将果面擦干，同时将清理液取出备用，注意在清洗前将桃子的果柄剪短，避免因过长的果柄弯曲与果皮贴合导致果皮受损，影响检测结果，在擦拭水果时，保证擦拭力度均匀，不要伤到果皮，影响检测结果；
步骤二，过滤浓缩，将步骤一中的清理液加热至45℃后搅拌10分钟，在此过程中桃子表层的蜡层会融化并漂浮在溶液表层，然后将溶液表层的蜡层滤除，为了避免滤液中的泥沙影响测量结果，同时将滤液中的杂质滤除，留下清液，采用冷冻干燥机，将滤液中多余的水分取出，注意使滤液的整体体积控制在800-1200ml，使滤液的浓度调节到0.01%-0.1%范围内，然后将滤液冷藏备用，冷藏温度控制在4℃；
步骤三，分离桃子果柄处的果皮，将桃子的果柄去除，因为桃子的果柄为非食用部分，因此不作为农药残留的必须检测部分，而桃子果柄处在喷洒农药时，农药容易滞留在此处形成的凹坑内，因此容易形成农药残留且不易清洗，因此此处的农药残留水平需与桃子的中间部位的农药残留水平会有所不同，需要进行区别检测，然后将果柄附近的1cm范围内的果皮切下，在切割过程汇中，注意下刀平稳，保证果皮的连贯性，切下的果皮厚度为2mm；
步骤四，分离桃子桃尖处的果皮，桃子在喷洒农药的过程中，药液会沿桃子表面滑落到桃子底部的桃尖底部，通常药液挥发后会在桃尖的底部形成斑痕，因此此处的农药残留程度与桃子的中间部位的农药残留程度会有所不同，需要进行区别检测，再将桃子桃尖附近1cm范围内的果皮切下，注意切割过程中保持运刀的平稳性，尽量保证切割下的果皮的连贯性，切下的果皮厚度为2mm；
步骤五，分离桃子中间的果肉与果皮，将剩余部分的果皮采用刮皮刀切下，在削皮的过程中，注意保证切削下的果皮厚度的一致性，切下的果皮厚度为1.5mm，然后将果肉按皮下4mm，皮下8mm进行分切，注意将果肉切成1cm大小的方块；
步骤六，将步骤三、步骤四与步骤五中分切的果皮与果肉分别放入到单独的搅拌机内，各自进行粉碎，果皮与果肉的粉碎时长分别为8分钟与5分钟，将果皮与果肉均粉碎成碎果浆，粉碎后果浆中的果肉颗粒度大小控制在60-80目，然后将果浆分别倒入到离心管内，并向离心管内加入果浆2-3倍的去离子水，浸泡12分钟，放入到离心机内15分钟后，将离心管取出，并分别将浆液中的残渣滤除，取上层清液作为待测样品原液，注意投入到离心管内的果浆为离心管容积的五分之一，所用离心管为15ml的带刻度、尖底、连盖型离心管；
步骤七，试剂配制，分别取无水磷酸氢二钾12g与磷酸二氢钾以3.2g混合制成缓冲液试剂，然后将制备的缓冲液试剂与1000ml蒸馏水混合摇匀成缓冲液备用；选用24mg硫代乙酰胆碱作为底物，然后将标注为底物的瓶中添加2.88ml的蒸馏水摇匀成底物溶液，并在4℃的温度下冷藏保存备用；分别取二硫代二硝基苯甲酸160mg和碳酸氢钠15.6mg制成显色剂，将显色剂与20ml缓冲液混合摇匀成显色溶液，并在4℃的温度下冷藏保存备用；选用乙酰胆碱酯酶作为检测酶与适量的缓冲液配混合摇匀成酶溶液，保证配制后的酶溶液中的乙酰胆碱酯酶在3min内的吸光度变化值应大于0.3，然后在4℃的温度下冷藏保存备用；
步骤八，对照样检测，取酶溶液100ul与缓冲液2.5ml混合摇匀，然后加入显色溶液100ul与底物溶液20ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小。
步骤九，样品检测，先将待测样品原液分别与缓冲液混合摇匀成样品检测液备用，注意在制备样品检测液时，不要将桃子各个部分制备的样品检测液混淆，取酶溶液100ul与样品检测液2.5ml混合摇匀并抑制10-15min，然后加入显色溶液100ul与底物溶液100ul混合摇匀后放入到比色皿中上机检测，并记录下反应3min的吸光度变化值大小，依次将桃子各部位的样品检测液按上述步骤进行检测，并将检测结果统一记录下来：
由上表可知，上述三组实施例的测量的农产品农药残留结果比普通方法测量的对比例中农产品农药残留结果的测量方向要多的多，并且所测定的水果各个部位的农药残留量有一个详细的统计结果，为改善水果的农药残留含量提供了良好的数据支持。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。