专利名称：：食品中农兽药残留的快速高精度检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种食品中农兽药残留的快速高精度检测方法。技术背景目前，农兽药的广泛应用，在提高农产品产量的同时，其残留对人类健康的影响也越来越引起人们的关注，因此世界各国都在提高食品中有关农兽药的残留限量标准，如2006年6月日本施行的《食品中农用化学品残留肯定列表制度》中大多数农兽药残留限量值为10p^kg。目前GC-MS(气相色谱一质谱)技术是国内外最常用的分析农兽药残留量的方法，但这些方法大多检测灵敏度不足，或前处理步骤繁琐，费时如以国标方法、日本通知法等前处理包括多步液液分配和减压浓縮过程的方法为例，完成整个前处理过程约需56小时；或分析成本高，不能满足多种食品快速、准确测定的要求如已知的使用基质匹配标准溶液作为标准工作溶液绘制标准曲线的后期数据处理方法，每分析一种基质就必须要重新配制该种基质的标准曲线，对于需要完成大量不同基质中农兽药残留检测任务的人员来说工作量巨大、实验技能要求高、数据处理繁琐，无法满足一线实验人员(如进出口商检部门)的快速、多残留分析检测要求。
发明内容为弥补上述缺陷，本申请的目的是提供一种食品中农兽药残留的快速高精度检测方法，该方法前处理简单快速、分析成本低，分析时间短，灵敏度、准确度和精密度均符合农兽药多残留技术的要求，适用于食品中多种农兽药残留的快速灵敏检测。一种食品中农兽药残留的快速高精度检测方法，包括以下步骤(1)基质前处理称取10g20g的食品试样清洗后，加入约50mL乙腈，用高速组织均质器在约9500r/min匀浆，提取约2min后抽滤，向残渣中加入约20mL乙腈再次匀浆提取、抽滤，将两次抽滤得到的滤液合并，用乙腈定容至100mL，待净化；取lmL提取液通过C！8(30mg)柱，用lmL80%乙腈/水溶液洗脱，收集全部流出液，向其中加入2mL水稀释后通过Ci8(50mg)柱，向流出液中加入20。/。NaCl水溶液20mL后再次通过上面所述的C18(50mg)柱，弃去流出液；将<:18(50mg)柱抽滤干燥2min，然后连接GCS(30mg)/PSA(30mg)柱，用lmL甲苯/丙酮/正己垸(体积比1/3/6)混合溶液洗脱；(2)添加分析保护剂向上述洗脱液中添加配制好的分析保护剂溶液20pL，所述分析保护剂溶液为聚乙二醇和橄榄油的丙酮溶液，其中聚乙二醇和橄榄油的用量为进入气相色谱系统的绝对进样量分别为聚乙二醇200800ng、橄榄油8.5~25.5用30%丙酮/正己烷溶液定容至l.OmL;(3)进样上机检测取上述定容后的溶液2550pL进样，通过大体积进样一气相色谱一质谱联用仪上机检测；质谱检测方式为选择离子监测(SIM)，每个化合物选择三个特征离子进行定性及定量；(4)数据处理用添加上述分析保护剂溶液的标准溶液作为标准工作溶液绘制标准曲线，对待测食品基质中的多残留农兽药进行定量。本发明的方法，其中所述步骤(1)中的食品试样为粮食谷物类时，取10g加20ml水浸泡15min后再加入乙腈；所述食品试样为蔬菜水果时，取20g直接加入乙腈。本发明的方法，其中所述步骤(2)中的聚乙二醇优选为PEG300。本发明的方法，其中所述步骤(2)中聚乙二醇和橄榄油的用量为进入气相色谱系统的绝对进样量分别优选为聚乙二醇400ng、橄榄油17吗。本发明的方法，其中所述步骤(3)中的气相色谱柱为毛细管色谱柱DB—5MSGOmX0.25mmi.d.X0.25ntn);载气为氦气，柱流速为lmL/min;色谱柱升温程序为初始温度6CTC,保持4min,以10'C/min速率升温至150°C，保持2min，再以1.5°C/min升温至225°C，保持2min，再以20°C/min升温至280°C，保持9min。本发明的方法，其中所述步骤(3)中的色谱一质谱接口温度为280'C，离子源温度200°C，EM电压1.15kV。本发明食品中农兽药残留的快速高精度检测方法，在GC/MS仪器检测灵敏度不变的情况下，采用大体积进样法，进样体积由原来的l^增加到25pL甚至更高。因此在达到与常规方法相同检测灵敏度、保持绝对进样量相同的条件下，大体积进样法可以大大减少前处理时的样品处理量。前处理样品的减少，原来的一些试验步骤可以省略，本方法省略了液液分配、减压浓縮等步骤，从而大大縮短前处理时间、提高分析检测效率、降低实验成本。常规方法如国标方法、日本通知法等包括多步液液分配和减压浓縮过程，完成整个前处理过程约需56小时；大体积进样法由于使用微型固相萃取柱，因此完成整个前处理过程只需5060分钟。同时该方法分析成本低，分析时间短，用添加分析保护剂的标准溶液作为标准工作溶液绘制标准曲线、对多种蔬菜水果谷物基质中的多残留农兽药进行定量。此方法好处在于可以用一条标准曲线对各种基质中农兽药的残留量进行定量、适用性强，而不必每分析一种基质就必须要重新配制该种基质的标准曲线，灵敏度、准确度和精密度均符合农兽药多残留技术的要求，适用于食品中多种农兽药残留的快速灵敏检测。图1为实施例2的检测结果图。具体实施方式为进一步说明本发明，结合以下实施例进行具体阐述实施例l:本发明的方法对苹果基质的检测方法及结果(1)方法步骤称取苹果20g，再加入50mL乙腈，用高速组织均质器在9500r/min匀浆，提取2min后抽滤，向残渣中加入20mL乙腈再次匀浆提取、抽滤。将两次得到的溶液合并，用乙腈定容至100mL，待净化。取lmL提取液通过d8(30mg)柱，用lmL80。/。乙腈/水溶液洗脱，收集全部流出液，向其中加入2mL水稀释后通过ds(50mg)柱。向流出液中加入20%NaCl水溶液20mL后再次通过上面的ds(50mg)柱，弃去流出液。将C18(50mg)柱抽滤千燥2min，然后连接GCS(30mg)/PSA(30mg)柱，用lmL甲苯/丙酮/正己烷(1/3/6)混合溶液洗脱，向洗脱液中添加配制好的分析保护剂溶液2(^L，所述分析保护剂溶液为聚乙二醇和橄榄油的丙酮溶液，其中聚乙二醇和橄榄油的用量为进入气相色谱系统的绝对进样量分别为聚乙二醇400ng、橄榄油17吗；用30%丙酮/正己烷溶液定容至l.OmL;供大体积进样一气相色谱一质谱联用仪上机检测。(2)检测条件进样量2550pL。毛细管色谱柱DB—5MSG0mX0.25mmi.d.X0.25pm)。载气(氦气)柱流速lmL/min。色谱柱升温程序为初始温度6(TC，保持4min，以10°C/min升温至150°C，保持2min，以1.5。C/min升温至225。C，保持2min，再以20°C/min升温至280°C，保持9min。色谱—质谱接口温度28(TC，离子源温度20(TC，EM电压1.15kV。质谱检测方式为选择离子监测(SIM)，每个化合物选择三个特征离子进行定性及定量。(3)使用设备-质谱联用仪，配有电子轰击(EI)电离源；大体积进样器；MS2涡旋混和器(德国IKA);PT-1300D高速组织匀浆器(瑞士KINEMATICA);12管防交叉污染固相萃取装置(美国SUPELCO);N-1000VW旋转蒸发仪(日本EYELA)。(4)数据处理结果用添加上述分析保护剂溶液的标准溶液作为标准工作溶液绘制标准曲线，对苹果基质中的多残留农兽药进行定量。结果见表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>氯氰菊酯一30.993106.771.1217.71.50E-025.00E-02氯氰菊酯一40.99390.2101.86.35.91.00E-023.00E-02苄螨醚0.99292.886.95.85.45.00E-042.50E-03氟氰戊菊酯-10.99395.81032.16.32.00E-037.00E-03氟氰戊菊酯-20.99487104.811.66.92.00E-037.00E-03嘧螨醚0.99793.596.91.62.41.00E-033.50E-03丙炔氟草胺0.99699.899.41.54.32.00E-037.50E-03氰戊菊酯一l0.994112.699.64.13.71.00E-023.50E-02氰戊菊酯—20.99695.7104.42.57.31.00E-023.50E-02氟胺氰菊酯-10.985100.1139.34.413.51.50E-025.00E-02氟胺氰菊酯-20.99591.1138.514.510.21.50E-025.00E-02苯醚甲环唑-10.99292.993.54.55.52.00E-037.50E-03苯醚甲环唑-20.99887.797.65.94.22.00E-037.50E-03恶二唑虫0.98798.2107.29.89.51.00E-023.00E-02溴氰菊酯0.98180.596.17.91.81.00E-035.00E-03氟烯草酸0細92.697.13.46.11.00E-035.00E-03腈嘧菌酯0.99989.297.95.13.51.00E-035.00E-03注其中异构体按一种计算。实施例2:本发明的方法与基质匹配标准溶液校正方法的比较实验结果采用本方法和基质匹配标准溶液校正方法对蘑燕和圆白菜空白基质中40种农药进行定量测定，其中本发明的方法同实施例1，农药添加浓度为50ng/kg。图1为部分农药的定量结果。由图1表明，用添加分析保护剂的标准溶液做工作曲线基本可以准确定量基质中的残留农药，补偿了基质效应对定量结果的影响，可以代替原有的基质匹配标准溶液校正方法，这样在对不同的农作物进行农药残留检测时，不再需要对每一种农作物作出基质匹配标准溶液以校正，而只需配置一种标准溶液即可对多种农作物进行检测校正，大大减少了工作量。本发明的方法，在GC/MS仪器检测灵敏度不变的情况下，不但可以大大减少前处理时的样品处理量以及大大缩短前处理时间、提高分析检测效率、降低实验成本；同时该方法分析成本低，分析时间短，用添加分析保护剂的标准溶液作为标准工作溶液绘制标准曲线、对多种蔬菜水果谷物基质中的多残留农药进行定量。此方法可以用一条标准曲线对各种基质中农药的残留量进行定量、适用性强，而不必每分析一种基质就必须要重新配制该种基质的标准曲线，灵敏度、准确度和精密度均符合农药多残留技术的要求，适用于食品中多种农药残留的快速灵敏检测。以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。10权利要求1.一种食品中农兽药残留的快速高精度检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)基质前处理称取10g～20g的食品试样清洗后，加入约50mL乙腈，用高速组织均质器在约9500r/min匀浆，提取约2min后抽滤，向残渣中加入约20mL乙腈再次匀浆提取、抽滤，将两次抽滤得到的滤液合并，用乙腈定容至100mL，待净化；取1mL提取液通过C18(30mg)柱，用1mL80％乙腈/水溶液洗脱，收集全部流出液，向其中加入2mL水稀释后通过C18(50mg)柱，向流出液中加入20％NaCl水溶液20mL后再次通过上面所述的C18(50mg)柱，弃去流出液；将C18(50mg)柱抽滤干燥2min，然后连接GCS(30mg)/PSA(30mg)柱，用体积比为1∶3∶6的甲苯/丙酮/正己烷的混合溶液1mL洗脱；(2)添加分析保护剂向上述洗脱液中添加配制好的分析保护剂溶液20μL，所述分析保护剂溶液为聚乙二醇和橄榄油的丙酮溶液，其中聚乙二醇和橄榄油的用量为进入气相色谱系统的绝对进样量分别为聚乙二醇200～800ng、橄榄油8.5～25.5μg；用30％丙酮/正己烷溶液定容至1.0mL；(3)进样上机检测取上述定容后的溶液25～50μL进样，通过大体积进样—气相色谱—质谱联用仪上机检测；质谱检测方式为选择离子监测(SIM)，每个化合物选择三个特征离子进行定性及定量。(4)数据处理用添加上述分析保护剂溶液的标准溶液作为标准工作溶液绘制标准曲线，对待测食品基质中的多残留农兽药进行定量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中的食品试样为粮食谷物类时，取10g加20ml水浸泡15min后再加入乙腈；所述食品试样为蔬菜水果时，取20g直接加入乙腈。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中的聚乙二醇为PEG300。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中聚乙二醇和橄榄油的用量为进入气相色谱系统的绝对进样量分别为聚乙二醇400ng、橄榄油17pg。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中的气相色谱柱为毛细管色谱柱DB—5MS(30mX0.25mmi.d.X0.25pm);载气为氦气，柱流速为lmL/min;色谱柱升温程序为初始温度6(TC，保持4min，以10°C/min速率升温至150°C，保持2min，再以1.5°C/min升温至225。C，保持2min，再以20°C/min升温至280°C，保持9min。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述步骤G)中的色谱一质谱接口温度为280。C，离子源温度200。C，EM电压1.15kV。全文摘要一种食品中农兽药残留的快速高精度检测方法，包括以下四个步骤(1)基质前处理；(2)添加分析保护剂；(3)进样上机检测；(4)数据处理。本发明的检测方法，在GC/MS仪器检测灵敏度不变的情况下，采用大体积进样法，可以大大减少前处理时的样品处理量。同时该方法分析成本低，分析时间短，用添加分析保护剂的标准溶液作为标准工作溶液绘制标准曲线、对多种蔬菜水果谷物基质中的多残留农兽药进行定量，可以用一条标准曲线对各种基质中农兽药的残留量进行定量、适用性强，灵敏度、准确度和精密度均符合农兽药多残留技术的要求，适用于食品中多种农兽药残留的快速灵敏检测。文档编号G01N30/06GK101246149SQ20081010269公开日2008年8月20日申请日期2008年3月25日优先权日2008年3月25日发明者仲维科,刘汉霞,孙毅之,垚张,礼李,翔李,许秀丽,陈彦长申请人:中国检验检疫科学研究院