专利名称：动物源性食品兽药残留物检测试剂盒及其检测方法
技术领域：
本发明涉及农产品检测分析技术领域中动物源性食品兽药残留物检测试剂盒及其检测方法。
背景技术：
我国是农产品生产和消费大国，其中动物源性食品占有农产品的很大一部分比例，动物源性食品兽药残留物的检测直接关系到居民食品消费安全。
例如兽药残留物中的链霉素(streptomycin)是氨基糖甙类抗生素，是由二个或三个氨基糖分子和非糖部分的苷元通过氧桥连接而成，链霉素具有强大的抗革兰氏阴性菌的作用，所以被广泛应用于动物疾病的治疗。但是链霉素具有很多方面的毒性，一可以损害内耳柯蒂器内、外毛细胞的糖代谢和能量利用，导致内耳毛细胞膜上钾、钠离子泵发生障碍，而使毛细胞功能受损害导致耳毒性；二由于链霉素经肾排泄和在肾皮质内蓄积而导致肾毒性；三链霉素还可以与突触前膜钙结合部位结合，阻止钙离子参与乙酰胆碱的释放所造成的神经毒性。其具有耳毒性、神经毒性和肾脏毒性。又如兽药中的氯霉素是一种广谱抗生素，具有良好的抗菌和药理特性，被广泛应用于各类家禽、家畜、水生动物(鱼、虾等)及蜜蜂等的各种传染病的防治。但是氯霉素对人有严重的副作用，可导致再生障碍性贫血；诸如此类的兽药在食品中的残留会影响人类健康，欧美日等国家及我国均要求限量使用；但是由于此类兽药价格比较便宜，治疗效果较好，经济回报高，违法使用仍很普遍。因此加强对动物源性食品的检测是非常必要的。
目前，主要采用仪器分析法检测链霉素的残留量，如薄层电泳法(TLC)、高压液相色谱法(HPLC)、气—质联机(GC/MS)、液—质联机(HPLC/MS)、毛细管电泳(CE)等。由于复杂的仪器设备和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛选，其中ELISA检测方法是一种新型的作为动物源性食品中链霉素残留检测筛选方法已被使用，如中国专利申请(03206171.4)链霉素ELISA检测试剂盒，该专利申请由96孔聚苯乙烯酶联板、40ml浓缩洗涤液、11ml过氧化物酶标记物、6ml链霉素抗体、6ml显色液A液、6ml显色液B液、6ml终止液、6瓶不同浓度的标准液和盖板膜构成。采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物链霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗链霉素抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物链霉素的含量。该方法与仪器分析技术相比虽然具有快速、简便、的特点，但是它采用的是二抗酶技术和间接竞争免疫检测方法，其中在二抗酶技术中，二抗一酶与一抗结合反应，位点交叉问题，易引起非特异性结合，导致结合偏差致使灵敏度较差、而间接竞争免疫检测方法稳定性较差、抗干扰能力较弱。
发明内容
本发明的目的是提供一种动物源性食品兽药残留物检测试剂盒及其检测方法；在本发明中采用抗原和抗体的直接竞争免疫反应以及采用生物素—亲和素放大反应系统；特异性较强，灵敏度较高，稳定性较好，抗干扰能力较强。
本发明所述的上述技术问题是通过以下技术方案得以实现的一种动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，包括盒体，其特征在于，该试剂盒还包括生物素化用该试剂盒检测的动物源性食品兽药残留物所对应的抗原或抗体及包被有相对应的单克隆抗体的预包被板或酶标板和亲和素酶标记物。
其中所述的单克隆抗体通常为鼠源抗体，生物素是一种维生素H，亲和素是一种存在于卵清中的碱性糖蛋白，一个亲和素分子可与4个生物素分子稳定结合。亲和素与生物素可与蛋白质(包括抗原、抗体、酶等)分子结合而不影响亲和素与生物素的生物活性，是理想的标记剂。一个抗原分子可偶联数十个生物素和亲和素分子，而亲和素或生物素分子又可与酶结合，从而组成一个分子放大系统，显著提高检测的灵敏度。
在上述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒中，所述的亲和素标记酶亲和素标记的辣根过氧化氢酶。
为了更方便现场监控和大量样本筛查，在动物源性食品兽药残留物检测试剂盒中，所述的试剂盒还包括动物源性食品兽药残留物的标准溶液、生物素化抗原稀释液、显色剂、终止液、浓缩洗涤液。
在上述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒中，所述的生物素化抗原稀释液为含聚乙二醇2万的磷酸盐缓冲液。
在上述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒中，所述的显色剂由显色剂A和显色剂B组成，所述的显色剂A为含无水乙醇、过氧化脲的柠檬酸盐缓冲液，所述的显色剂B为含四甲基联苯胺柠檬酸盐缓冲液。
在上述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒中，所述的终止液为2M H2SO4。
在上述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒中，所述的浓缩洗涤液为1％吐温的磷酸盐缓冲液。
一种动物源性食品兽药残留物检测试剂盒的检测方法包括以下步骤
1、在预包被板上或称微孔条上预包被用该试剂盒检测的一种动物源性食品兽药残留物所对应的单克隆抗体；2、相对应动物源性食品兽药残留物的标准品或样本中的残留物及相对应的生物素化抗原，二者与抗体竞争反应，形成抗体—生物素化抗原复合物；3、加入酶标记的亲和素，形成抗体—生物化抗原—亲和素的复合物；4、TMB底物显色。样本的吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关，与标准曲线比较，即可得出相应残留物链霉素的含量。
本发明具有以下优点1、适用范围较广适用于水产品、蜂蜜、饲料、牛奶及制品、动物尿液、肌肉、组织等各种动物源性食品兽药残留物残留量的检测。
2、本发明与仪器分析方法相比较具有快速、简便、准确、抗干扰性强和灵敏度高等特点，操作时间仅须1.5小时，检测下限达到0.05ppb以下，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
3、本发明采用独特的生物素—亲和素放大系统，具有比传统的二抗酶技术方法更加灵敏、更加稳定、抗干扰性强的特点。若用于蜂蜜加工厂原料验收时的快速筛选检测，可将蜂蜜直接稀释后检测，节省大量的样本前处理时间和费用。
图1为本发明的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒的结构示意图。
图2是本动物源性食品兽药残留物检测试剂盒中96孔链霉素单克隆抗体预包被板的结构示意图。
具体实施例方式
以下接合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例一、链霉素残留物检测试剂盒及其检测方法实施例1生物素化链霉素抗原及链霉素单克隆抗体的制备(1)生物素化链霉素抗原的合成抗原(抗体)在碱性(碳缓PH9.6)条件下透析八小时以上，再加入活化生物素与之合成反应，最后在中性(一般磷酸盐缓冲液PH7.5)透析，除去多余的活化生物素。
(2)链霉素单克隆抗体制备免疫小鼠二周以上，取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，进行细胞株克隆筛选，挑选出最佳分泌抗体的细胞株。以上单抗克隆抗体细胞株、注入小鼠腹腔即可获得单克隆抗体腹水。此细胞株不用时冻存，用时进行复苏、培养。
所用单抗都需要经过盐析、分子筛以及亲合层析进行纯化提取。
实施例2(1)链霉素残留物检测试剂盒的结构试剂盒的结构如图1和图2所示，主要有盒体1、96孔链霉素单克隆抗体预包被板2、6瓶链霉素系列浓度标准品3、生物素化链霉素抗原工作液4、生物素化抗原稀释液5、亲和素酶标记物工作液6、底物显色剂A液7、底物显色剂B液8、终止液9、浓缩洗涤液10和泡沫托架，泡沫托架上设有凹孔，上述3-10安放在泡沫托架的凹孔内，泡沫托架及包被板2安放在盒体1内，其中96孔链霉素单克隆抗体预包被板2由微孔条组成。
(2)所用试剂的配制a.链霉素标准溶液链霉素系列标准溶液6瓶，1～3ml/瓶
b.生物素化链霉素抗原工作液，50％的甘油溶液；C.生物素化抗原稀释液，含聚乙二醇2万的磷酸盐缓冲液；d.亲和素酶标记物工作液，含牛血白蛋白的磷酸盐缓冲液；e.底物显色剂A液，含无水乙醇过氧化脲的柠檬酸盐缓冲液；f.底物显色剂B液，含四甲基联苯胺柠檬酸盐缓冲液；g.终止液，2M H2SO4；h.浓缩洗涤液，1％吐温的磷酸盐缓冲液i.正己烷；j.PBST缓冲液配制(提取用)1.15g Na2HPO40.2g kH2PO40.2gKCl 9g NaCl；0.5ml Tween-20加蒸馏水或去离子水1000ml为PBST缓冲液。
k.提取缓冲液1g庚烷-磺酸钠盐(M＝202.2)，1.5gNa2HPO4·12H2O。加入蒸馏水至100ml，加入0.75ml浓磷酸调PH至2.0。
(3)96孔链霉素单克隆抗体预包被板的制备含单抗的磷酸盐缓冲液(PH9.6)，包被24小时以上，加入封闭液(含牛血白蛋白的磷酸盐缓冲液)封闭、冻干、真空包装。
(4)所用的仪器——酶标仪，——均质器，——振荡器，——离心机，——微量加样器单道20ul-200ul、200ul-1000ul、多道250ul。
实施例3、样品的前处理(1)牛奶样品取牛奶2ml，将其置5000rpm离心10min，去除上层脂肪；取下层50ul，用PBS缓冲液按1∶40倍稀释。(1950ulPBS缓冲液加50ul牛奶)样品稀释倍数40倍。
(2)鸡肉样品2g去除脂肪的粉碎样品与8ml PBST缓冲液混合5min，加入正己烷5ml充分上下混合10min静置1h。室温离心15mim，10000rpm；用移液器取中间层1ml，加入1ml正己烷，充分振荡5min；室温离心15min，4000rpm；去除上层，取下层以1∶10倍稀释(450ul PBS缓冲液加50ul上清)；样品稀释倍数40倍。
(3)肝脏样品5.0g去除脂肪的粉碎样品与20ml PBST缓冲液混合30min；室温离心10min，10000rpm；2ml上清与3ml正己烷混合振荡5min；室温离心10min，4000rpm；去除上层脂肪层，用稀释后的PBS缓冲液以1∶10稀释(900ul稀释液加100ul上清)；取60ul水相进行分析；样品稀释倍数40倍。
(4)血清样品取离心后的血清样品20ul，用PBS缓冲液按1∶200稀释(3980ul PBS缓冲液加20ul血清)；样品稀释倍数200倍；(5)蜂蜜产品样品实施例4、检测样品中的残留的链霉素(1)称取称量1g样品加入提取缓冲液至10ml；振荡10min完全溶解，室温离心10min/4000rpm直至清亮；用RIDA C18柱(纯化提取物(2)用2ml甲醇(100％)洗柱子，流速为60d/min；——用2ml水洗柱子，流速为60d/min；上样，取2ml样本，流速为15d/min；用氮气或空气吹干柱子，3min。(除去柱中水份)；用1ml甲醇(100％)洗脱样品，流速为15d/min；在40-50℃，弱空气或氮气流下完全蒸发溶剂；用2ml稀释后的PBS缓冲液溶解干燥的残留物，取60ul进行分析；稀释倍数10倍；检测下限3ppb。其中以上所有试剂和样品处理必须室温下进行
(3)样品检测所有试剂及标本在检测实验前必须置室温(20℃±5℃左右)，将试剂盒打开，平衡1小时以上；取出框架及需要数量的微孔条，将不用的微孔条放入自封袋，保存于(2-8℃)；根据所需用量将生物素化抗原用稀释液1∶20稀释(1份加19份稀释液)，仅供现检测用。(未经稀释的生物素化抗原于-20℃保存)；加样设空白孔一孔，加PBS或生理盐水100ul；将标准溶液及待测样品进行双孔平行加样50ul，同时加入生物素化链霉素抗原50ul；封板振荡混匀1分钟，置入37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴箱温育30分钟；洗板机洗板5次。手工洗板3次将孔内液体甩掉，用吸水纸扣干，加入洗液250ul/孔，静置1分钟，再甩掉液体，扣干。重复操作3次；每孔加入酶标记亲和素溶液100ul(空白孔加入PBS或生理盐水100ul)，封板置入37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴箱温育30分钟；洗板机洗板5次，手工洗板3次，每次间隔1分钟；加入显色剂A、显色剂B各50ml，封板混匀15秒，37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴箱温育15分钟；每孔加入终止液50ul，轻轻振荡混匀，读取450nm吸光值(以空白孔作零吸光值，建议用双波长450/630nm检测，在加入终止液15分钟内读完数据)。
本实施例中所用的试剂按照实施例2中的试剂配制方法进行配制。
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)的吸光度值再乘以100。因此0标准等于100％并且以百分比给出吸光值度值。
计算的标准值绘成为一个对应链霉素浓度(ug/kg)的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在0.3～24.3ug/kg(ppb)范围内应当成为线性。相对应每一个样品的浓度(ug/kg)可以从校正曲线上读出。
本发明的链霉素试剂盒在使用过程中注意的事项1、室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温(25℃左右)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后立即进行下一步操作。
3、混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、储存条件试剂盒于2℃-8℃保存，将不用的微孔条放进自封袋重新密封；由于标准物质和无色的发色剂对光敏感，一定要避免直接暴露在强光下。
6、试剂变质的现象显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.8个单位(A450＜0.8)时，表示试剂可能变质。
7、加A、B液后一般显色15min即可，若颜色较浅，可适当延长显色时间，但不能超过20min。
8、不得使用失效期后的试剂盒组分，不同批次试剂盒组分不得混合使用。
9、各板孔最后均用于测定光学曲线，应防止孔底内外遭受污损。
实施例5、(1)氯霉素残留物检测试剂盒组成
a.氯霉素标准溶液氯霉素系列标准溶液6瓶，1～3ml/瓶b.生物素化氯霉素抗体工作液，c.生物素化抗体稀释液，d.亲和素酶标记物工作液，e.底物显色剂A液，f.底物显色剂B液，g.终止液，h.浓缩洗涤液，(2)96孔预包被酶标板以上物质的制备方法同实施例2(3)所用仪器同实施例2、试剂试剂以下所有试剂均推荐使用分析纯或优级纯；水为蒸馏水或去离子水。
——乙酸乙酯——乙腈——正己烷——亚硝基铁氰化钠——硫酸锌实施例6、样品的前处理将浓缩稀释液用蒸馏水按1∶10稀释，(用于抗体的稀释和样本提取后的稀释)(a)组织(鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)前处理方法用均质器均质组织样品；称3g±0.1g均质后的样品于离心管中，加入6ml乙酸乙酯，振荡10min，室温3000g以上，离心10min；取出4ml上层液体(约相当于2g的样品)在氮气流下50～60℃干燥；加入1ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释液强烈振荡1min，室温3000g以上，离心5min；去除上层正己烷相，取下层水相50μl进行分析；样品稀释倍数0.5倍。
(b)血清血浆前处理方法取1ml血清或血浆至试管中，加2ml乙酸乙酯振荡1min；静置使水相与有机相分层或室温3000g，离心5min；移取上层的乙酸乙酯至另一试管中，用氮气流50℃水浴中吹干；残留物用1ml稀释液溶解；取50μl进行分析；注样本稀释倍数为1倍。
(c)尿液前处理方法移取2ml尿液到离心管中，加pH4.8100mM醋酸钠缓冲液0.5ml混合；加40ul葡萄糖苷酸酶(Merck，Art.No.4114)到稀释的尿液中，在37℃水解至少2小时(或过夜)；该溶液恢复至室温后加入8ml乙酸乙酯混合1min；室温3000g离心10min，取出4ml上层液体(相当于0.5ml尿样)在氮气下50～60℃干燥；用1ml稀释液溶解干燥的残留物取50μl进行分析；注样本稀释倍数为1倍。
(d)蜂蜜前处理方法取2g蜂蜜，放入离心管中，用4ml去离子水溶解；加入4ml乙酸乙酯上下震荡10min；室温3000g以上离心10min；移取1ml上层乙酸乙酯(相当于0.5g样品)到另一离心管中，50～60℃氮气流下蒸干；残留物用稀释后的0.5ml稀释液溶解；取50ul进行分析；样品稀释倍数为1倍。
(e)肠衣前处理方法称1g±0.1g均质后的样品于离心管中，加入10ml乙酸乙酯，振荡10min，室温3000g以上，离心10min；取出5ml上层液体(相当于0.5g的样品)在氮气流下50～60℃干燥；加入1ml正己烷溶解干燥的残留物，再加0.5ml稀释液强烈振荡1min，室温3000g以上，离心5min；去除上层相，取下层水相50μl进行分析；样品稀释倍数1倍。注干样本需剪碎(长度不超5mm)后再均质，湿样本需用去离子水漂洗20min以上(去除表面的盐份)，沥干后再进行均质。
(f)牛奶和奶粉前处理方法需配制的液体C液0.36M亚硝基铁氰化钠(Na2Fe(CN)5·NO·2H2O)称取10.7g亚硝基铁氰化钠，溶于100ml去离子水中。
D液1M硫酸锌(ZnSO4·7H2O)称取28.8g硫酸锌，溶于100ml去离子水中。
牛奶样品处理方法一牛奶样品，10℃3000g以上离心10min，吸除上层脂肪；取5ml去除脂肪奶样至离心管中，加入150ul C液出现沉淀，短暂振荡后加入150ul D液混合；15℃3000g以上离心10min，移取上层液；用稀释液以等体积稀释上层液；取50ul进行分析；注意如果离心后仍然浑浊，再重复沉淀过程。稀释倍数为2.1倍。
牛奶样品处理方法二取5ml去除脂肪奶样至离心管中；加入250ul C液和250ul D液彻底混合，4-12℃3000g以上离心10min。如果没有冷冻离心机，请预先将样品冷却到8℃；转移出2.2ml上层液(相当于2ml奶样)至一个新的离心管中，加入4ml乙酸乙酯上下振荡10min；室温(20-25℃)3000g以上离心10min；转移出2ml乙酸乙酯上层液体(相当于1ml奶样)，60℃氮气流下完全干燥；用0.5ml稀释液溶解干燥的残留物；取50ul进行分析；稀释倍数为0.5倍。
奶粉样品处理方法称2g奶粉至离心管中，加入10ml去离子水，振荡溶解；加1ml C液和1ml D液彻底混合。4-12℃3000g以上离10min。若无冷冻离心机，请预先将样品冷却到8℃；转移出3.6ml上层液(相当于0.6g奶粉)至一个新的离心管中，加入6ml乙酸乙酯上下来回振荡10min；室温(20-25℃)3000g以上离心10min；转移出4ml乙酸乙酯上层液体(相当于0.4g奶粉)，60℃氮气流下完全干燥；用0.4ml稀释液溶解干燥的残留物；取50ul进行分析；稀释倍数为1倍。
蛋类前处理方法用均质器低速均质样品(蛋黄或全蛋)；称取3g均质过的样品，与9ml乙腈-水溶液(84+16；V+V)振荡提取10min，15℃3000g以上离10min；取3ml上层液与3ml蒸馏水混合，加入4.5ml乙酸乙酯混合5min，15℃3000g以上离心10min；将上层有机相转移到试管中用氮气吹干；加入1ml正己烷溶解残留物后，用2ml稀释液反萃取混合1min，离心去除正己烷相；取50ul下层相进行分析；注样本稀释倍数为2。
样本定量检测下限鸡肉/鸡肝、猪肉/猪肝、虾、鱼----------0.05ppb蜂蜜----------------------------------0.15ppb尿液、血清----------------------------0.1ppb肠衣----------------------------------0.1ppb牛奶----------------------------------0.05ppb蛋类----------------------------------0.1ppb实施例7、检测样品中的残留的氯霉素1、所有试剂及标本在检测实验前必须置室温(20℃±5℃左右)，将试剂盒打开，平衡1小时以上。
2、取出框架及需要数量的微孔条，将不用的微孔条放入自封袋，保存于(2-8℃)。
3、根据所需用量将生物素化抗体用生物素化抗体稀释液1∶20稀释(1份加19份稀释液)，仅供现检测用。(未经稀释的生物素化抗体于-20℃保存)。
4、加样设空白孔一孔，加PBS或生理盐水100ul；将标准溶液及待测样品进行双孔平行加样50ul，同时加入生物素化氯霉素抗体50ul；封板振荡混匀1分钟，置入37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴箱温育30分钟。
5、洗板机洗板5次。手工洗板将孔内液体甩掉，用吸水纸扣干，加入洗液250ul/孔静置1分钟，再甩掉液体，扣干。重复此次操作3次。
6、每孔加入酶标记亲和素溶液100ul(空白孔加入PBS或生理盐水100ul)，封板置入37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴箱温育30分钟。
7、洗板机洗板5次，手工洗板3次，每次间隔1分钟。
8、加入显色剂A、显色剂B各50ml，封板混匀15秒，37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴箱温育15分钟。
9、每孔加入终止液50ul，轻轻振荡混匀，读取450nm吸光值(以空白孔作零吸光值，建议用双波长450/630nm检测，在加入终止液15分钟内读完数据)。
所获得的标准和样品吸光度(OD)值的平均值除以第一个标准(0标准)的OD值再乘以100。因此0标准等于100％并且以百分比给出OD值。
计算的标准值绘成一个对应氯霉素浓度(ug/kg)的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在0.05～4.05ug/kg(ppb)范围内应当成为线性。相对应每一个样品的浓度(ug/kg)可以从校正曲线上读出。
本发明中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。
权利要求
1.一种动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，包括盒体，其特征在于，该试剂盒还包括生物素化用该试剂盒检测的动物源性食品兽药残留物所对应的抗原或抗体及包被有相对应的单克隆抗体的预包被板或酶标板和亲和素酶标记物。
2.根据权利要求1所述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，其特征在于，所述的单克隆抗体通常为鼠源抗体，生物素是一种维生素H，亲和素是一种存在于卵清中的碱性糖蛋白，一个亲和素分子可与4个生物素分子稳定结合。
3.根据权利要求1所述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，其特征在于，所述的亲和素标记酶亲和素标记的辣根过氧化氢酶。
4.根据权利要求1或2或3所述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括动物源性食品兽药残留物的标准溶液、生物素化抗原稀释液、显色剂、终止液、浓缩洗涤液。
5.根据权利要求1所述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，其特征在于，所述的生物素化抗原稀释液为含聚乙二醇2万的磷酸盐缓冲液。
6.根据权利要求4所述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，其特征在于，所述的显色剂由显色剂A和显色剂B组成，所述的显色剂A为含无水乙醇、过氧化脲的柠檬酸盐缓冲液，所述的显色剂B为含四甲基联苯胺柠檬酸盐缓冲液。
7.根据权利要求4所述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，其特征在于，所述的终止液为2M H2SO4。
8.根据权利要求4所述的动物源性食品兽药残留物检测试剂盒，其特征在于，所述的浓缩洗涤液为1％吐温的磷酸盐缓冲液。
9.一种动物源性食品兽药残留物检测试剂盒的检测方法包括以下步骤(1)、在预包被板上或称微孔条上预包被用该试剂盒检测的一种动物源性食品兽药残留物所对应的单克隆抗体；(2)、相对应动物源性食品兽药残留物的标准品或样本中的残留物及相对应的生物素化抗原，二者与抗体竞争反应，形成抗体—生物素化抗原复合物；(3)、加入酶标记的亲和素，形成抗体—生物化抗原—亲和素的复合物；(4)、TMB底物显色样本的吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关，与标准曲线比较，即可得出相应残留物链霉素的含量。
全文摘要
本发明提供了一种动物源性食品兽药残留物检测试剂盒及其检测方法，涉及农产品检测分析技术领域。本试剂盒包括盒体，该试剂盒还包括生物素化用该试剂盒检测的动物源性食品兽药残留物所对应的抗原或抗体及包被有相对应的单克隆抗体的预包被板或酶标板和亲和素酶标记物。本动物源性食品兽药残留物检测试剂盒的检测方法是通过加入酶标记的亲和素，形成抗体－生物化抗原－亲和素的复合物，然后TMB底物显色。样本的吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关，与标准曲线比较，即可得出相应残留物链霉素的含量。本发明不仅适用范围较广，而且还具有快速、简便、准确、抗干扰性强和灵敏度高的特点。
文档编号G01N21/78GK1811453SQ200610023659
公开日2006年8月2日 申请日期2006年1月26日 优先权日2006年1月26日
发明者王华全, 刘建中, 林荣业 申请人:台州金芯生物工程有限公司