1.一种血管内皮生长因子检测试剂盒,其特征在于:所述检测试剂盒包括包被有vegf抗体的磁性微球混悬液、vegf参考品、vegf质控品、vegf标记物、浓缩洗涤液和发光底物液;其中所述vegf标记物通过吖啶酯修饰物对改造的vegf抗体进行标记。
2.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒,其特征在于:所述吖啶酯修饰物为吖啶酯dems-nhs,所述改造的vegf抗体是指将vegf抗体与双功能螯合剂反应制备而成。
3.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒,其特征在于:所述包被vegf抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:50-1:100的比例配制;
所述vegf标记物的浓度按照其与标记物稀释液1:500-1:10000的比例稀释;
所述vegf参考品和所述vegf质控品均由vegf标准品与参考品稀释液配制而成,所述vegf参考品的浓度范围为0-2500pg/ml;
所述vegf质控品的浓度为125pg/ml、1000pg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒,其特征在于:所述包被vegf抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:50的比例配制,所述vegf标记物的浓度按照其与标记物稀释液1:2000的比例稀释。
5.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒,其特征在于:所述参考品稀释液为ph7.5的hepes缓冲液,且每1l缓冲液中还含有18-22g酪蛋白钠盐、14-15gsds、3.8-4gdtt和0.3-0.5ml的pc300。
所述浓缩洗涤液按照每1lph7.5的tris-hcl缓冲液中含有7-10gnacl、0.3-0.6ml吐温-80和6-8mlproclin-300进行配制。
6.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒,其特征在于:所述发光底物液包括发光底物液a和发光底物液b,所述发光底物液a的ph为2.5-2.6,所述发光底物液a的成分为双氧水和硝酸;
所述发光底物液b的ph为12.3-12.7,所述发光底物液b的成分为氢氧化钾和tritonx-100。
7.一种如权利要求1所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒的制备方法,其特征在于所述制备方法包括以下步骤:
(1)制备vegf磁性微球混悬液
取磁珠母液,加入磁珠包被缓冲液i混匀,吸取液体后再加入磁珠包被缓冲液i混匀,加入vegf抗体混匀后再加入磁珠包被缓冲液ii,混匀经过一段时间的反应,反应结束后吸取液体,再加入磁珠包被缓冲液iii混匀,反应结束后吸取液体,再加入磁珠保存液混匀,再加入磁珠包被缓冲液iv,混匀后得到vegf磁性微球混悬液;
(2)制备vegf参考品及质控品
用参考品稀释液将vegf标准品按一定的比例稀释成系列参考品,其参考品浓度范围为0pg/ml-2500pg/ml;按照上述操作制备浓度为125pg/ml、1000pg/ml的质控品,分装、冻干;
(3)vegf标记物的制备
①溶液配制
用0.1m,ph7.5的n-2-羟乙基哌嗪-n-2-乙磺酸溶液作为缓冲体系,配制浓度为1mg/mlvegf抗体工作液;
②蛋白交联反应
取2ml,1mg/mlvegf抗体溶液,加入300μl,体积浓度为25%戊二醛,经过反应得到蛋白复合物vegf-ga,再将该蛋白复合物置于hbs缓冲液中透析8h,备用;
③吖啶酯标记
取0.1mg/ml的吖啶酯dmae-nhs溶液,按照体积比1:1的比例加入1mg/ml透析后的vegf-ga溶液,搅拌混匀经过反应得到的vegf-ga-dmae反应标记物经过透析,备用;
④vegf-ga-dmae标记物配置
将透析后的vegf-ga-dmae反应标记物与标记物稀释液按照体积比1:1000-5000的比例进行配置;
(4)配制浓缩洗涤液
按照每1l、0.1mhepes缓冲体系中含有7-10gnacl、0.5-2gkcl、0.3-0.6mltritonx-100、6-8mlproclin-300和0.5-1gnan3进行配置;
(5)配制发光底物液a和发光底物液b
发光底物液a:取10-20l纯水,再加入200-278.4mlhno3,100-132.8mlh2o2,纯水定容至30-40l,调ph到2.55±0.5;
发光底物液b:取10-20l纯水,再加入300-400gkoh和600-800mltritonx-100,纯水定容至30-40l,调ph到12.50±0.2;
(6)将上述步骤(1)-(5)制备的磁性微球混悬液、vegf标记物、参考品、质控品、浓缩洗涤液、发光底物液a和发光底物液b分别进行分装。
8.根据权利要求7所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述包被缓冲液i的ph为7.0±0.1,每1l包被缓冲液i中含有0.97gtris、6.59gtris-hci、9.00gnacl;所述包被缓冲液ii的ph为9.5±0.1,每1l包被缓冲液ii中含有9.54g硼砂和6.18g硼酸;所述包被缓冲液iii由bs31mg和tris缓冲液配置100μl,所述磁珠保存液的ph为7.4±0.1,每1l磁珠保存液中含有0.97gtris、6.59gtris-hci和9.00gnacl;所述包被缓冲液iv的ph为9.5±0.1,每1l包被缓冲液iv中含有14.5gna2hpo4.12h20、1.48gnah2po4.2h20、0.50gpc300、5.00gbsa和0.50g吐温-20。
9.根据权利要求7所述的一种血管内皮生长因子检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中标记物稀释液为ph7.5的pbs缓冲液,且每1lpbs缓冲液中还含有5-6g氯化钙、0.02-0.04%v/v的proclin-300和0.3~1.0%v/v的aes。