1.一种泰乐菌素及替米考星乳胶微球免疫层析试纸条,其特征在于,由pvc板、样品垫、nc膜、吸水纸以及乳胶微球样品孔组成,所述乳胶微球样品孔中吸附有由蓝色乳胶微球标记的泰乐菌素单克隆抗体;nc膜上划有泰乐菌素抗原tyl-cmo-bsa和羊抗鼠igg,抗原tyl-cmo-bsa为t线,羊抗鼠igg为c线;
所述蓝色乳胶微球标记的泰乐菌素单克隆抗的制备包括以下步骤:
s1.溶解:向蓝色乳胶微球中加入ph为5~6.5的mes缓冲溶液,制备蓝色乳胶微球溶液;
s2.活化:在步骤s1溶液中加入0.5mg/mledc溶液、0.5mg/mlnhs溶液;200rpm反应15min,随后在2~4℃下10000~14000rpm/min,离心10~20min;
s3.标记:将离心后的沉淀溶解至0.01mpb溶液中,再加入经0.01mpb稀释的泰乐菌素单克隆抗体溶液,200rpm反应1h;所述pb溶液的ph为7.4;
s4.封闭:在步骤s3反应后的溶液中加入20%(w/v)bsa溶液,200rpm反应3h,随后在2~4℃下10000~14000rpm/min,离心10~20min;
s5.复溶:去除上清液,加入复溶液,复溶液为ph7.4的0.02mpb溶液,其中还含有0.5~1%tween-20、3~5%海藻糖、0.5%bsa、0.3%pvp和0.03%procline-300。
2.根据权利要求1所述试纸条,其特征在于,所述标记泰乐菌素单克隆抗体的蓝色乳胶微球溶液的制备中,步骤s1所述mes缓冲溶液的浓度为0.05m,ph6.0。
3.根据权利要求1所述试纸条,其特征在于,所述标记泰乐菌素单克隆抗体的蓝色乳胶微球溶液的制备中,步骤s1所述制备的蓝色乳胶微球溶液浓度为5mg/ml。
4.根据权利要求1所述试纸条,其特征在于,所述蓝色乳胶微球溶液、edc溶液、nhs溶液的用量比为1ml:15μl:20μl。
5.根据权利要求1所述试纸条,其特征在于,所述标记泰乐菌素单克隆抗体的蓝色乳胶微球溶液的制备中,步骤s3所述泰乐菌素单克隆抗体溶液浓度为0.062mg/ml。
6.根据权利要求1所述试纸条,其特征在于,步骤s3所述溶解沉淀的pb溶液与泰乐菌素单克隆抗体溶液的用量比为1ml:90μl。
7.权利要求1所述试纸条的制备方法,其特征在于,包含以下步骤:
s1.划膜:泰乐菌素抗原tyl-cmo-bsa和羊抗鼠igg通过ph7.4的0.02mpb溶液稀释,将抗原tyl-cmo-bsa、羊抗鼠igg划到nc膜上,抗原tyl-cmo-bsa为t线,羊抗鼠igg为c线,划膜后干燥;
s2.样品垫处理:将玻纤膜浸泡于样品垫处理液中,取出至垂直放置无液体滴落,再将其水平放置干燥;所述样品垫处理液为ph8.4的0.05mbbs缓冲液,其中还含有0.1~0.5%tritonx-100;
s3.试纸条组装:在pvc背板上贴上步骤s1制备的nc膜,pvc板的一端与样品垫重叠1~2mm相连,另一端与吸水纸重叠1~2mm相连,组装好后裁剪、干燥即得;
s4.乳胶微球样品孔的制备:将标记泰乐菌素单克隆抗体的蓝色乳胶微球溶液以3μl/孔的用量加入酶标孔中,干燥备用。
8.根据权利要求6所述制备方法,其特征在于,步骤s1所述泰乐菌素抗原tyl-cmo-bsa稀释后的浓度为0.096mg/ml,所述羊抗鼠igg浓度为0.2mg/ml。
9.利用权利要求6所述方法制备得到的试纸条检测鸡蛋样品中泰乐菌素及替米考星的方法,其特征在于,包括以下步骤:
s1.鸡蛋样品前处理:将鸡蛋样品混合均匀,加入乙腈溶液,振荡、超声、离心,取上清液用氮气吹干后,加入复溶液复溶;所述复溶液为ph7.4的0.02mpb溶液,其中还含有0.5~1%tween-20;
s2.取经过前处理的鸡蛋样品加入乳胶微球样品孔中,孵育3min,再将检测试纸条样品垫端插入乳胶微球样品孔中,计时5min后将试纸条取出,通过t线、c线显色判断检测结果。
10.根据权利要求8所述方法,其特征在于,步骤s1所述鸡蛋样品与乙腈的用量比为1~2g:2~6ml。