专利名称：选择性测定唾液酸糖脂复合物的分析方法
技术领域：
本发明与选择性测定唾液酸糖脂复合物的方析方法有关。
唾液酸(N-乙酰神经氨酸)在生物体内以游离和结合状态存在(AdvancesinCancerRes.38289-350;1983)。唾液酸可以作为末端基团通过一个寡糖链结合到与生物膜联系的神经鞘脂上(J.ofSupramolecularStrcture9157-1771978)。在文献中，包括糖神经鞘脂在内的神经节甘脂的命名并非总是明确的。根据Svennerholm所述，这些化合物可分为一唾液酸神经节甘脂，二唾液酸神经节甘脂和三唾液酸神经节甘脂(ComprehensiveBiochemistry18201，Elsevier，Amstrdam，1970)。神经节甘脂的疏水部分是酰基神经鞘氨醇，后者与具有不饱和长链脂肪酸的生物膜结合。酰基神经鞘氨醇通过一个氨基基团与寡糖(诸如葡萄糖，半乳糖N-乙酰半乳糖胺和唾液酸)结合。
由于被结合的唾液酸存在，糖神经鞘脂巨分子带负电荷，该负电荷影响某些细胞间的相互作用。在肿瘤机体内，由于生物化学平衡紊乱，细胞间相互作用发生变化。因此，血液中与糖脂结合的唾液酸含量增加。
基于对上述理论的认识，建立了几种测定血糖脂一唾液酸含量的方法。按照Svenerholm的方法，血浆经氯仿/甲醇(2∶1混合)液提取，使糖神经鞘脂类与血中其他脂类分开，唾液酸在二价铜盐存在下与间苯二酚发生颜色反应，糖神经鞘脂中唾液酸的含量即可通过比色法测定(Biochem.Biophys.Acta24604-6111957)。根据Katopodis(美国专利4，342，567)所述，经磷钨酸作用，糖神经鞘脂成分首先自甲醇上清液中沉淀出来，再溶解沉淀物进行比色测定。这样，Svennerholm法得到了改进。当然，唾液酸亦可用酶反应法测定。按照文献(Clin.Chim.Acta108493-4981980)报告的方法，糖蛋白经神经氨酸甘酶裂解，释放出的唾液酸再与N-乙酰神经氨酸醛缩酶作用，形成丙酮酸和N-乙酰-D-甘露糖胺。产生的丙酮酸经丙酮酸氧化酶氧化，形成过氧化物，后者在过氧化酶存在下转变成含P-氯酚和4-氨基-安替比林的颜色物质，生成的颜色物质的量可在505nm波长下测定。
上述所有方法的共同缺点是测定误差均超过20%。由于这些作者所测唾液酸水平在正常人和病人之间差异很小(正常＜18mg%病人＞20mg%)，故结果虽能提示可能存在恶性病，但对是否确实存在肿瘤不能提供明确的依据。另一缺点是，某些良性病，诸如关节炎，牛皮癣，溃疡、炎症和妇科疾病，也可导致血唾液酸含量的增加(J.Clin.Chem.Biochem.22，647-6511984)。所以，迄今已发表的测定血唾液酸含量的方法仅能怀疑癌的存在，不能作为更精确诊断的根据。
我们的目的是提供一个能导致更可靠诊断的分析方法，以利于早期发现肿瘤的存在，鉴别肿瘤和非肿瘤疾病及推断肿瘤的可能部位。
本发明基于以下认识在合适pH和离子强度下，不同金属盐能从血糖脂复合物的复杂成份中分离出意义明确的主要成份。在不同来源的肿瘤和非肿瘤疾病中，唾液酸优先与不同糖脂成份结合。因此，测定被分离的糖脂亚成份中唾液酸的含量或测定结合了唾液的糖脂性质，可以确定唾液酸水平的增高是由于被检者肿瘤所引起的，还是由于良性病(如炎症、关节炎，妇科病等等)所引起的，如为肿瘤还可确定其部位或转移瘤的存在。此外，还观察到，用某些金属盐(主要是镉盐)作为沉淀剂，比应用磷钨酸作为沉淀剂可更早地发现肿瘤。
综上所述，本发明涉及血(主要是人血)中唾液酸糖脂复合物的选择性测定方法。在该方法中，血清经水稀释后，用与水不能混溶的有机溶剂或混合溶剂除去中性脂;使含唾液酸糖脂的脂蛋白成份从水相中沉淀出来;使沉淀重新溶解;用本身已知方法测定溶液中唾液酸的含量或测定唾液酸糖脂的含量和性质。本发明使用水溶性的一价、二价或三价金属盐作为沉淀剂，而不是用碱性金属作为沉淀剂;混合液中，金属离子的最终浓度为0.005～0.1mole/1，沉淀时pH为1.5至8.0。
最好用美国专利4，342，567介绍的方法，从用水稀释的血清中除去中性脂，用氯仿/甲醇(体积比2∶1)混合液作为提取液。水甲醇上清液(以后通称为甲醇上清液)再次进行沉淀，而下层是中性脂的氯仿溶液，被丢弃。
以后，将沉淀剂加到水中醇相中或加到部分水甲醇相中，使混合物中金属离子的浓度为0.005-0.1mole/1。沉淀剂最好以水溶液的形式使用。对一些金属离子最好选用的沉淀pH值列于下表中
金属离子pH亚铁(Fe2+) 3.0-3.5铁(Fe3+) 3.0-5.0钴(Co2+) 4.0-5.5镍(Ni2+) 4.5-5.5镉(Cd2+) 4.5-6.0锌(Zn2+) 1.5-5.0银(Ag+) 6.0-8.0汞(Hg2+) 1.5-3.0铜(Cu2+) 3.0-4.5钙(Ca2+) 4.5-5.5镁(Mg2+) 5.5-7.0产生的沉淀被分离，然后，a)用一已知方法检测沉淀物中唾液酸含量，如按美国专利4，342，567所述的用一种矿物酸、二价铜盐及间苯二酚产生的颜色反应作为依据。或用文献(Clin.Chim.Acta108493-4981980)介绍的酶法，或，b)用已知方法测定结合唾液酸的糖脂的类型和量，如文献(Clin.Chem.221516-15211976)中所述高压液相色谱法。
本发明方法的鉴别诊断价值很明显提高，当完全一样的血标本中唾液酸的含量顺序地用至少5种不同的金属离子测定后，测定值与正常值的比值相加(此处“正常值”指用已知金属离子作为沉淀剂，测得非病人唾液酸浓度的统计计算值)。根据我们的经验，测定值/正常值比值之和对于局部肿瘤来说，按以下顺序递减乳腺肿瘤-结肠肿瘤-卵巢肿瘤-头/颈部肿瘤-腺癌-非肿瘤性疾病-健康无病状态。
同样，可以获得一个鉴别诊断系列。根据本发明，用至少5种不同金属离子所测唾液酸的结果被已知唾液酸测定的结果(如美国专利4，342，567发表的结果，不同来源的唾液酸测定结果各异)除，并将商相加。不同的商也可能具有鉴别诊断的价值。
本发明借助于下面非限制性的实例加以详细阐明。在实例中，血标本预先被处理，沉淀物中唾液酸含量用以下方法测定静脉血用于检测，取血后，标本经4000rpm，离心15分钟，将0.6ml标本冻存。标本中脂结合的唾液酸浓度在-20℃可保持6个月不变。
开始分析以前，试管先用甲醇彻底浸泡，干燥后置冰箱中预冷。向每只试管中加0.2ml血清标本和0.2ml双蒸水，混合液经Vortex搅拌器搅拌15秒钟，然后置于冰水浴(0℃)中。每份待测和对照血清均制备二个平行标本。
向每个试管中加入3ml预冷的氯仿/甲醇(体积比2∶1)混合物，用Vortex搅拌器搅拌30秒钟。试管再置于冰水浴;每管再加0.5ml预冷至4℃的双蒸水，试管内容物用Vortex搅拌器搅拌15秒钟，混合液于室温下放置5分钟;然后，将标本经3000rpm离心10分钟;每管取1ml上清液小心加入刻度离心管内，加入实例中指定浓度和量的水溶性金属盐溶液，调整混合液pH值至实例中指定值，各离心管的内容物用Vortex搅拌器搅拌后，静置5分钟。
静置后将离心管的内容物以4000rpm离心15分钟，用倾注法将上清液与沉淀完全分离(丢弃上清液)。
向每个离心管中加1mlTris缓冲液，将沉淀再溶解。Tris缓冲液的制备用1升双蒸水溶解10mM三(羟甲基)氨基甲烷，调节生成溶液的pH值至8.6。
用于光度测定的标准和空白样本制备如下在100ml双蒸水中溶解50mg分析纯唾液酸，所得溶液作为用来配制两种双蒸水稀释液(浓度分别为25mg/100ml和12.5mg/100ml)的储备溶液。标准溶液在+4℃保存。三种不同浓度的标准溶液各取0.2ml，分装入离心管，用双蒸水将每管溶液加至1ml。另取1ml双蒸水作为空白。
所有样品管(包括标准、空白、对照、实验血清管)中各加1ml间苯二酚试剂溶液。间苯二酚试剂溶液制备如下在100ml双蒸水中，溶解2g分析纯间苯二酚;另100ml双蒸水中，溶解2.49g无水硫酸铜;然后，取10ml间苯二酚溶液与0.25ml硫酸铜溶液、9.75ml双蒸水和100ml浓盐酸(分析纯)混合。
试管在100℃水浴中精确放置10分钟;然后，立即将所有试管浸入0℃冰水浴，保持10分钟。每管加入2ml醋酸丁酯/正丁酸(体积比85∶15)混合液，试管内容物用Vortex搅拌器搅拌5分钟。使混合液静置并间或搅拌。样品经2500rpm离心10分钟。每管中的蓝色上清液分别装入测定管。6小时内，蓝色的密度保持不变。
在580nm波长下进行光度测定。用双蒸水调整光度计的零点;以后，根据所用光度计的类型(单光束或双光束)，测定时或与空白进行对比，或用测得的样本消光值减去空白的消光值从而获得校正值。
E(校正)＝E(测定值)-E(空白值)唾液酸含量通过下述两种方法之一进行计算。
1)从已知唾液酸浓度的标准唾液酸样本所测结果经计算或作图获得消光值对浓度的曲线。由于稀释步骤，原来的浓度应根据下表重新计算。
原始浓度测定浓度消光值(mg/100ml)·(μg/200ml)501000.50825500.25212.5250.127从前述所得校准曲线可测得1ml上清液样本中唾液酸的含量。曲线标出的唾液酸含量以每ml上清液中μg唾液酸表示。血清中唾液酸含量可按下式计算唾液酸含量(mg/100ml)＝A×0.72式中A指上清液中唾液酸含量，单位是μg/ml;0.72是一个系数，包括稀释度和μg和mg之间的换算。
2)第二种计算方法，应用已知唾液酸浓度的标准血清样本，从几个平行测定值按下式术得因子F。
F＝C(ref)/E(ref)式中C(ref)是标准血清中唾液酸含量，单位mg/100ml;E(ref)是标准血清的消光值。由下式求得试验样本的唾液酸含量。
唾液酸含量(mg/100ml)＝E(m)×F，式中E(m)是试验样本测得的消光值。
例1来自一健康人的血清，按上述方法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.5mole/1氯化镍(NiCl2)溶液按10∶1混合，在pH5.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为4.65mg%。
例2来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镍溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为6.43mg%。
例3来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1氯化镉(CdCl2)溶液按10∶1混合，在pH5.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为11.52mg%。
例4来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合物提取，将甲醇上清液与0.5mole/1氯化镉溶液按10∶1混合，在pH5.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为10.48mg%例5来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镉溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为14.81mg%例6来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1硫酸亚铁(FeSO4)溶液按10∶1混合，在pH3.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为9.08mg%。
例7来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.5mole/1硫酸亚铁溶液按10∶1混合，在pH3.0时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为9.54mg%。
例8来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/l硫酸亚铁溶液接10∶1混合，在pH2.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为9.52mg%。
例9来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1氯化锌(ZnCl2)溶液按10∶1混合，在pH2.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为6.52mg%。
例10来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.5mole/1氯化锌溶液按10∶1混合，在pH1.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为12.34mg%。
例11来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1硝酸铅(Pb(NO3)2)溶液按10∶1混合，在pH4.4时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为8.61mg%。
例12来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合物提取，将甲醇上清液与0.5mole/1硝酸铅溶液按10∶1混合，在pH3.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸含量为12.11mg%。
例13来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸铅溶液按10∶1混合，在pH3.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为12.35mg%。
例14来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1硝酸银(AgNO3)溶液按10∶1混合，在pH8.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为9.89mg%。
例15来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合物提取，将甲醇上清液与0.5mole/1硝酸银溶液按10∶1混合，在pH6.0时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为14.67mg%例16来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸银溶液按10∶1混合，在pH5.8时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为14.81mg%例17来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1氯化汞(HgCl2)溶液按10∶1混合，在pH1.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为6.05mg%。
例18来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合物提取，将甲醇上清液与0.5mole/1氯化汞溶液按10∶1混和，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为7.68mg%。
例19来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合物提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化汞溶液按10∶1混合，在pH1.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为11.99mg%。
例20来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1硫酸铜(CuSO4)溶液按10∶1混合，在pH4.2时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为10.13mg%。
例21来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.5mole/1硫酸铜溶液按10∶1混合，在pH3.8时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为10.48mg%例22来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸铜溶液按10∶1混合，在PH3.6时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为12.22mg%。
例23来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1氯化钙(CaCl2)溶液按10∶1混合，在pH5.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为3.72mg%。
例24来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.5mole/1氧化钙溶液按10∶1混合，在pH5.4时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为3.02mg%。
例25来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化钙溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为7.05mg%。
例26来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.1mole/1氯化镁(MgCl2)溶液按10∶1混合，在pH6.1时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为4.19mg%。
例27来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与0.5mole/1氯化镁溶液按10∶1混合，在pH6.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为3.61mg%。
例28来自一健康人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镁溶液按10∶1混合，在pH6.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为4.81mg%。
例29来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镍溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为28.87mg%。
例30来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镉溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为41.31mg%。
例31来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸亚铁溶液按10∶1混合，在pH2.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为33.39mg%。
例32来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为39.41mg%。
例33来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为38.90mg%。
例34来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸铅溶液按10∶1混合，在pH3.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为45.02mg%。
例35来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸银溶液按10∶1混合，在pH5.8时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为29.58mg%。
例36来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化汞溶液按10∶1混合，在pH1.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为33.89mg%。
例37来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸铜溶液按10∶1混合，在pH3.6时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为37.20mg%。
例38来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化钙溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为28.18mg%。
例39来自一乳腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镁溶液按10∶1混合，在pH6.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为25.67mg%。
例40来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镍溶液按10∶1混合，在PH5.3时形成沉淀，沉淀物中唾液酸的含量为22.09mg%。
例41来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镉溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为25.80mg%。
例42来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸亚铁溶液按10∶1混合，在pH2.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为18.75mg%。
例43来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为23.77mg%。
例44来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为26.87mg%。
例45来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸铅溶液按10∶1混合，在pH3.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为26.63mg%。
例46来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸银溶液按10∶1混合，在pH5.8时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为28.66mg%。
例47来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化汞溶液按10∶1混合，在pH1.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为33.08mg%。
例48来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸铜溶液按10∶1混合，在pH3.6时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为26.63mg%。
例49来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯试钙溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为13.26mg%。
例50来自一卵巢癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镁溶液按10∶1混合，在pH6.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为11.82mg%。
例51来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镍溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为12.62mg%。
例52来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镉溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀液中唾液酸的含量为21.99mg%。
例53来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸亚铁溶液按10∶1混合，在pH2.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为16.09mg%。
例54来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为19.56mg%。
例55来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为21.41mg%。
例56来自一头/颈癌病人血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸铅溶液按10∶1混合，在pH3.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为29.98mg%。
例57来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸银溶液按10∶1混合，在pH5.8时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为14.93mg%。
例58来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化汞溶液按10∶1混合，在pH1.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为18.87mg%。
例59来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸铜溶液按10∶1混合，在pH3.6时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为14.70mg%。
例60来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化钙溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为9.72mg%。
例61来自一头/颈癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镁溶液按10∶1混合，在pH6.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为12.27mg%。
例62来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镍溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为11.77mg%。
例63来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镉溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为20.09mg%。
例64来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清与1.0mole/1硫酸亚铁溶液按10∶1混合，在pH2.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为16.13mg%。
例65来自一腺癌病人的血清，按上法经氯仿-甲醇混合物提取;甲醇上清与1.0mole/1氯化锌液按10∶1混合，在pH1.7形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸含量为18.69mg%。
例66来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为17.15mg%。
例67来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸铅溶液按10∶1混合，在pH3.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为22.66mg%。
例68来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合物提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸银溶液按10∶1混合，在pH5.8时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为16.51mg%。
例69来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合物提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化汞溶液按10∶1混合，在pH1.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为18.94mg%。
例70来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取;将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸铜溶液按10∶1混合，在pH3.6时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为17.41mg%。
例71来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化钙溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为9.73mg%。
例72来自一腺癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取;将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镁溶液按10∶1混合，在pH6.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为7.94mg%。
例73来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镍溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为20.70mg%。
例74来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镉溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为32.14mg%。
例75来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸亚铁溶液按10∶1混合，在pH2.9时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为24.23mg%。
例76来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为27.52mg%。
例77来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸锌溶液按10∶1混合，在pH1.7时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为3.63mg%。
例78来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸铅溶液按10∶1混合，在pH3.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为35.55mg%。
例79来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硝酸银溶液按10∶1混合，在pH5.8时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为29.46mg%。
例80来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化汞溶液按10∶1混合，在pH1.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为31.66mg%。
例81来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1硫酸铜溶液按10∶1混合，在pH3.6时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为32.51mg%。
例82来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化钙溶液按10∶1混合，在pH5.3时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为18.51mg%。
例83来自一结肠癌病人的血清，按上法用氯仿-甲醇混合液提取，将甲醇上清液与1.0mole/1氯化镁溶液按10∶1混合，在pH6.5时形成沉淀，测定沉淀物中唾液酸的含量为16.68mg%。
权利要求
1.血中唾液酸糖脂的选择性测定方法，该方法包括将血清用水稀释，然后，用与水不混溶的有机溶剂或混合溶剂提取，以便除去中性脂，使含唾液酸糖脂的脂蛋白成份从相水沉淀，重新溶解沉淀物，溶液中的唾液酸含量或含唾液酸的糖脂的性质和含量可以用本身已知的方法测定，其特征在于一价、二价或三价水溶性金属盐作为沉淀剂而不是用碱性金属作为沉淀剂，沉淀剂用的量相当于混合物中最终金属离子浓度为0.005-0.1mole/1，并在PH为1.5至8.0进行沉淀。
2.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性的二价铁盐并在pH为3.0至3.5下进行沉淀。
3.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性的三价铁盐，并在pH为3.0至5.0下进行沉淀。
4.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性的二价钴盐并在pH为4.0至5.5下进行沉淀。
5.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性的二价镍盐并在pH为4.5至5.5下进行沉淀。
6.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性的二价镉盐并在pH为4.5至6.0下进行沉淀。
7.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性的二价锌盐并在PH为1.5至5.0下进行沉淀。
8.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性一价银盐，并在pH为6.0至8.0下进行沉淀。
9.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性二价汞盐，并在pH为1.5至3.0下进行沉淀。
10.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性二价铜盐，并在pH3.0至4.5下进行沉淀。
11.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性二价钙盐并在pH为4.5至5.5下进行沉淀。
12.权利要求1的方法，其特点在于沉淀剂为水溶性二价镁盐并在pH为5.5至7.0下进行沉淀。
全文摘要
本发明与血中唾液酸糖脂的选择性测定方法有关。在该方法中，将血清用水稀释，然后，用与水不混溶的有机溶剂或混合溶剂提取，以便除去中性脂，含唾液酸糖脂的脂蛋白成分从水相中沉淀，重新溶解沉淀物，溶液中的唾液酸含量或含唾液酸的糖脂的性质和含量可以用本身已知的方法测定。本发明所用的沉淀剂为一价、二价或三价水溶性金属盐而不是碱性金属，在pH1.5至8.0条件下进行沉淀混合液中金属离子的最终浓度为0.005—0.1mole/l。
文档编号G01N33/66GK1044537SQ8910420
公开日1990年8月8日 申请日期1989年6月20日 优先权日1989年1月23日
发明者百乐·斯扎杰尼, 费里恩克·普瑞比克, 百乐·舒曼, 安娜·吉兹提斯, 埃迪特·金科扎尔, 爱伦·米罗范, 约兰·巴巴科兹, 埃迪特·施科劳斯, 卡塔琳·伊瓦尼 申请人:雷纳尔菲诺夫吉泽吉亚尔公司