一种肉或肉制品中11种食用合成色素的hplc-ms/ms检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品技术领域，具体设及一种肉或肉制品中11种食用合成色素的 HPLC-MS/MS检测方法。
【背景技术】
[0002] 色泽是食品的重要属性，直观地影响着顾客的购买意愿。为了令产品更有吸引 力，食品企业常使用色素，用于恢复加工过程中损失的色泽，减少批次生产中颜色的变化， 使食品具备有吸引力的颜色，看上去更能引起食欲。由于天然色素的着色力比合成色素低， 对光照、温度、抑值更敏感，目前更多是使用单种或多种合成色素。然而，合成色素都源于 工业染料，多含苯环、氧杂慈等结构，部分色素还含有硝基，在人体经代谢后可生成具有致 癌作用的蒙胺，长期摄入该类物质会对人体产生毒害作用，安全性一直存在问题。
[0003] 本发明中设及的11种食用合成色素，按照它们化学结构的特点，可分为偶氮化合 物（日落黄）、=芳基甲烧（亮藍）、咕吨（赤薛红）和說藍类（說藍）着色剂类。我国食品 安全法规定合成色素的使用必须遵守《食品安全国家标准GB 2760-2011食品添加剂使用 标准》，根据GB 2760-2011的规定，共有11种合成色素被列为允许添加到食品中，分别是： 诱惑红、览菜红、偶氮玉红、亮藍、赤薛红、說藍、姻脂红、新红、日落黄、嗟咐黄和巧樣黄。尽 管它们都经过风险评估，安全系数相对较高的，但是仍有一定风险，如；赤薛红具有酶抑制 剂作用，可抑制蛋白间的相互作用，对脑垂体和精子形成毒性，过量使用会发生致癌、致崎 效应；巧樣黄对生殖细胞有影响，具有一定的遗传毒性，过量使用也会发生致癌、致崎效应， 对动物的记忆和学习能力也有负面影响；因此严格限定了它们的使用范围和使用量，在肉 制品中超量超范围使用食用合成色素会都是违法行为。
[0004] 对于肉与肉制品中11种食用合成色素的测定，由于肉与肉制品蛋白和脂肪含量 高，在制作过程中又加入了大量调味料，基质非常复杂，色谱分析过程中存在很多共流出 物，导致HPLC检测的结果不准确，灵敏度差，所W有必要用HPLC-MS/MS进行准确的定性定 量检测，提高结果准确性和可靠性。
[0005] 本发明采用的HPLC-MS/MS能快速准确定性定量检测肉与肉制品是否存在11种食 用合成色素。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种HPLC-MS/MS同时定量测定肉与肉制品中11种食用合成 色素的分析方法。
[0007] 本发明的目的是通过W下技术方案来实现的；一种高灵敏度同时测定肉与肉制品 中11种食用合成色素的检测方法，所述11种食用合成色素包括；诱惑红、览菜红、偶氮玉 红、亮藍、赤薛红、說藍、姻脂红、新红、日落黄、嗟咐黄（嗟咐黄二钢盐，嗟咐黄一钢盐）和巧 樣黄。该方法包括如下步骤：
[000引 A.样品处理；
[0009] 将样品揽拌混合均匀后，称取置于离屯、管中，加入正己烧和石油離混合溶剂，在 祸流振荡器中振摇混合，弃去混合溶剂；再加入提取溶剂，縱祸混合均匀后超声提取；所述 样品为肉或肉制品中的一种W上；所述的正己烧和石油離混合溶剂按照体积比70:30? 30:70混合配制的；所述的样品与正己烧、石油離混合溶剂W 1 ;5?1 ;10(g/ml)的比例混 合；所述的提取溶剂是甲醇与高纯水的混合溶剂（体积比为70:30?80:20,用氨水调节抑 至8?12);所述的样品与提取溶剂W 1:5?l:10(g/ml)的比例混合。
[0010] B.提取与分离：
[0011] 将步骤A装有肉与肉制品与提取溶剂混合物的离屯、管置于30?40°C水浴中进行 超声振荡提取5?20min，然后W 3500?4500r/min的转速离屯、3?5min，回收上清液，重 复上述水浴、超声振荡提取到离屯、取上清液的过程一次；最后，将所有上清液置于旋转蒸发 器，30?35°C下蒸发至干后，得到的残留物使用按照体积比10:90?90:10混合配制的水 与甲醇混合溶剂进行复溶，再用阴离子固相萃取柱净化，洗脱后定容到0. 5?2mU接着使 用0. 22 ym聚四氣己締滤膜进行过滤，得到一种肉与肉制品提取液；
[0012] C. HPLC-MS/MS 分析
[0013] 在步骤B得到的肉与肉制品提取液在下述条件进行HPLC-MS/MS分析；S重四级杆 质谱检测器，色谱柱InertsilODS-3C18柱（3. 0 X 75mm，2. 2 y m);流动相A为甲醇，流动相B 是浓度为2?lOmmol/L的己酸锭水溶液；色谱柱温度40°C，流速0. 3血/min ;HPLC色谱分 离梯度条件见下表1 ;
[0014] 表1 HPLC分离梯度条件
[0015]
【主权项】
1. 一种肉或肉制品中同时测定食品中11种食用合成色素的检测方法，其特征在于，包 括如下步骤： A. 样品处理： 将样品搅拌混合均匀后，称取置于离心管中，加入正己烷和石油醚混合溶剂，在涡流 振荡器中振摇混合，弃去混合溶剂；再加入提取溶剂，漩涡混合均匀；所述样品为肉或肉制 品中的一种以上； B. 提取与分离： 将步骤A装有肉与肉制品与提取溶剂的离心管置于30?40°C水浴中进行超声振荡提 取5?20min，然后以3500?4500r/min的转速离心3?5min，回收上清液，重复上述水 浴、超声振荡提取到离心取上清液的过程一次；最后，将所有上清液置于旋转蒸发器，30? 35°C下蒸发至干后，得到残留物，使用混合溶剂进行复溶，再用阴离子固相萃取柱净化，洗 脱后定容到0. 5?2mL，接着使用0. 22ym聚四氟乙烯滤膜进行过滤，得到提取液； C. HPLC-MS/MS分析 将步骤B得到的提取液在下述条件进行HPLC-MS/MS分析：三重四级杆质谱检测器，色 谱柱InertsilODS-3C18柱（3. 0X75mm，2. 2ym);流动相A为甲醇，流动相B是浓度为2? 10mm〇l/L的乙酸铵水溶液；色谱柱温度40°C，流速0. 3mL/min;HPLC色谱分离梯度条件见 下表1 : 表1HPLC分离梯度条件
电喷雾离子源条件为：加热温度550?650°C，毛细管电压-4500V?-3500V;气帘气 (N2)69?138kPa，雾化气体（N2)310?379kPa，辅助气（N2) 276?379kPa，11种色素的定量 离子对，定性离子对，母离子类型，去簇电压，碰撞电压等质谱条件列于下表2， 表2.食用色素MS/MS检测参数
表中a为定量离子对；定性离子对； D. 11种食用合成色素标准样品的HPLC-MS/MS分析 在与步骤C相同的HPLC-MS/MS条件下对11种食用合成色素进行HPLC-MS/MS分析，将 其分析结果与步骤C得到的肉与肉制品提取液HPLC-MS/MS分析结果进行比对，对肉与肉制 品提取液中11种食用合成色素进行定性定量检测。
2. 根据权利要求1所述的肉或肉制品中11种食用合成色素的HPLC-MS/MS检测方法， 其特征在于，步骤A中，所述的正己烷和石油醚混合溶剂按照体积比70:30?30:70混合配 制的。
3. 根据权利要求1所述的肉或肉制品中11种食用合成色素的HPLC-MS/MS检测方法， 其特征在于，步骤A中，所述的样品与正己烷和石油醚混合溶剂以1 :5?1 :10g/ml的比例 混合。
4. 根据权利要求1所述的肉或肉制品中11种食用合成色素的HPLC-MS/MS检测方法， 其特征在于，步骤A中，所述的提取溶剂为甲醇与高纯水的混合溶剂，提取溶剂中甲醇与高 纯水的体积比为70:30?80:20,并用氨水调节pH至8?12 ;所述的样品与提取溶剂以 1:5?1:10g/ml的比例混合。
5. 根据权利要求1所述的肉或肉制品中11种食用合成色素的HPLC-MS/MS检测方法， 其特征在于，步骤B中，所述混合溶剂为水与甲醇的混合溶剂，其中水与甲醇按照体积比 10:90 ?90:10 混合。
【专利摘要】本发明公开了一种肉或肉制品中11种食用合成色素的HPLC-MS/MS检测方法。该方法为：将肉或肉制品经正己烷、石油醚组成的混合溶剂浸泡去除脂肪后，置于甲醇、氨水、高纯水组成的混合溶剂中超声提取，取上清液,重复提取一次，合并上清液并用旋转蒸发仪蒸发近干，残渣用水与甲醇组成的混合溶剂复溶，再用阴离子固相萃取柱净化，聚四氟乙烯滤膜过滤，得到的滤液和11种食用合成色素标准溶液经高效液相色谱串联质谱法分析,分别采用两对高灵敏度的离子对进行定性定量检测,检出限0.007~0.096mg/kg。本发明方法检测周期短,灵敏高，抗干扰能力强,非常适合基质复杂的肉与肉制品中11种食用合成色素的定性定量检测。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104569273
【申请号】CN201510031380
【发明人】张学武, 戚平, 林子豪, 罗莉妮, 郑春浩
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月21日