化嗜碱性粒细胞；
[0032](3)每例样本检测仅需不超过100 μ L的全血；
[0033](4)本发明方法重复性好，误差小于10%
[0034](5)能可靠鉴定嗜碱性粒细胞激活和/或脱颗粒状态。
【附图说明】
[0035]图1.1所表达的是血液中⑶123阳性细胞群；
[0036]图1.2所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性细胞群；
[0037]图1.3所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性CCR3阳性细胞群即嗜碱性粒细胞；
[0038]图1.4所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性CCR3阳性细胞⑶63表达情况即脱颗粒检测结果；
[0039]图1.5所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性CCR3阳性细胞⑶203c表达情况即激活检测结果；
[0040]本发明的检测结果，血液中嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒检测结果。
[0041]图2.1所表达的是血液中⑶123阳性细胞群；
[0042]图2.2所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性细胞群；
[0043]图2.3所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性CCR3阳性细胞群即嗜碱性粒细胞；
[0044]图2.4所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性CCR3阳性细胞⑶203c表达情况即激活检测结果；
[0045]本发明的检测结果，血液中嗜碱性粒细胞激活检测结果。
[0046]图3.1所表达的是血液中⑶123阳性细胞群；
[0047]图3.2所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性细胞群；
[0048]图3.3所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性CCR3阳性细胞群即嗜碱性粒细胞；
[0049]图3.4所表达的是血液中⑶123阳性HLA阴性CCR3阳性细胞⑶63表达情况即脱颗粒检测结果；
[0050]本发明的检测结果，血液中嗜碱性粒细胞脱颗粒检测结果。
【具体实施方式】
[0051]为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0052]实施例1
[0053]—种嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，如图1.1、1.2、1.3、1.4、1.5所示，包括如下步骤:
[0054](I)首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态。注意:红细胞裂解液建议现用现配；
[0055](2)按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；
[0056](3)在每个流式上样管内加入所需的抗体组合:抗人⑶123、抗人CCR3、抗人Hla-DRJAA⑶203c和抗人⑶63荧光标记流式抗体组合，如FITC标记的抗人⑶123、APC标记的抗人CCR3、APC/Cy7标记的抗人HLA-DR，PE标记的抗人CD203c、PE/Cy7标记的抗人CD63，用量为每人份五种抗体各5 μ L，以鉴定嗜碱性粒细胞激活和脱颗粒状态；
[0057](4)患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25 μ L至125 μ L全血加到标记好的流式管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3?5s，室温避光孵育15min ;
[0058](5)孵育结束后，每个样本管内加入ImL的红细胞裂解液，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3?5s，室温避光孵育1min ；
[0059](6)孵育结束后，1200rpm/min转速离心6min，离心结束后，弃去上清液，加入ImL的PBS缓冲液，以同样的速度离心，(离心结束取样操作时，应避免剧烈晃动引起细胞沉淀悬浮);
[0060](7)离心后，以同样的方式去上清液，加入300 μ L的PBS缓冲液，用流式细胞仪检测；
[0061](8)用不同流式细胞仪相应的分析软件分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。
[0062]本实施例中所述荧光标记流式抗体包括FITC、APC、APC/Cy7、PE、PE/Cy7或PerCP荧光标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c和抗人CD63抗体。
[0063]本实施例中所述的抗体组合为任何荧光标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人Hla-DRJAA⑶203c、抗人⑶63五种抗体组合。
[0064]本实施例中所述的抗体组合为任何分子标记的抗人CD 123、抗人CCR3、抗人Hla-DRJAA⑶203c、抗人⑶63五种抗体组合。
[0065]实施例2
[0066]一种嗜碱性粒细胞激活的鉴定方法，如图2.1,2.2,2.3,2.4所示，包括如下步骤:
[0067](I)首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态。注意:红细胞裂解液建议现用现配；
[0068](2)按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；
[0069](3)在每个流式上样管内加入所需的抗体组合:抗人⑶123、抗人CCR3、抗人HLA-DRJ^A⑶203c荧光标记流式抗体组合，如FITC标记的抗人⑶123、APC标记的抗人CCR3、APC/Cy7标记的抗人HLA_DR，PE标记的抗人CD203c，用量为每人份四种抗体各5 μ L，以鉴定嗜碱性粒细胞激活状态；
[0070](4)患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25 μ L至125 μ L全血加到标记好的流式管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3?5s，室温避光孵育15min ;
[0071](5)孵育结束后，每个样本管内加入ImL的红细胞裂解液，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3?5s，室温避光孵育1min ；
[0072](6)孵育结束后，1200rpm/min转速离心6min，离心结束后，弃去上清液，加入ImL的PBS缓冲液，以同样的速度离心，(离心结束取样操作时，应避免剧烈晃动引起细胞沉淀悬浮);
[0073](7)离心后，以同样的方式去上清液，加入300 UL的PBS缓冲液，用流式细胞仪检测；
[0074](8)用不同流式细胞仪相应的分析软件分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。
[0075]本实施例中所述荧光标记流式抗体包括FITC、APC、APC/Cy7、PE、PE/Cy7或PerCP荧光标记的抗人⑶123、抗人CCR3、抗人HLA-DR和抗人⑶203c抗体。
[0076]本实施例中所述的抗体组合为任何荧光标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DRJjtA CD203c四种抗体组合。
[0077]本实施例中所述的抗体组合为任何分子标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DRJjtA CD203c四种抗体组合。
[0078]实施例3
[0079]一种嗜碱性粒细胞脱颗粒的鉴定方法，如图3.1、3.2、3.3、3.4所示，包括如下步骤:
[0080](I)首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态。注意:红细胞裂解液建议现用现配。
[0081](2)按一定的顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；
[0082](3)在每个流式上样管内加入所需的抗体组合:抗人⑶123、抗人CCR3、抗人HLA-DRj^A⑶63荧光标记流式抗体组合，如FITC标记的抗人⑶123、APC标记的抗人CCR3、APC/Cy7标记的抗人HLA_DR，PE标记的抗人CD63，用量为每人份四种抗体各5 μ L，以鉴定嗜碱性粒细胞脱颗粒状态；
[0083](4)患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25 μ L至125 μ L全血加到标记好的流式管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3?5s，室温避光孵育15min ;
[0084](5)孵育结束后，每个样本管内加入ImL的红细胞裂解液，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3?5s，室温避光孵育1min ；
[0085](6)孵育结束后，1200rpm/min转速离心6min，离心结束后，弃去上清液，加入ImL的PBS缓冲液，以同样的速度离心，(离心结束取样操作时，应避免剧烈晃动引起细胞沉淀悬浮);
[0086](7)离心后，以同样的方式去上清液，加入300 μ L的PBS缓冲液，用流式细胞仪检测。
[0087](8)用不同流式细胞仪相应的分析软件分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光