同时测定水环境中6种痕量酚类环境内分泌干扰物的分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及环境分析化学领域，具体设及一种同时测定水环境中6种痕量酪类环 境内分泌干扰物的分析方法。
【背景技术】
[0002] 环境内分泌干扰物巧DCs)是指通过干扰生物体内保持自身平衡和调节发育过程 中天然激素的合成、分泌、运输、代谢、结合、反应、消除等生物过程的外源性化学物质。该些 有机污染物具有毒性持久性、危害潜伏性和生物积累性，可通过人们的工农业生产和生活 活动进入水环境，并经食物链富集逐级放大，直接或间接地进入人体并造成健康危害。水环 境中最具代表性的酪类邸Cs主要是辛基酪（4-t-OP)、枯締基酪（4-CP)、壬基酪（4-NP)、双 酪A炬PA)、壬基酪二氧己締離（NP2EO)和壬基酪单氧己締離（NP1EO)。在已有的公开发明 专利及科研论文中，并没有形成统一的环境水样品中酪类邸Cs的分析方法，尤其是同时分 析上述6种典型痕量酪类邸Cs的方法在我国水监测规范、方法标准中至今仍为空白。本发 明方法旨在建立一种环境水样品中典型邸Cs的分析方法。
[000引已公开的申请专利"一种同时测定水环境中16种酪类化合物的分析（公开号；CN104267129A)"特征为目标物质的检测浓度范围为5-1000yg/L、检测限为0. 04-4. 0yg/L 和加标回收率为77%~112%，其衍生化过程中采用五氣苄基漠作为衍生化试剂，而五氣 苄基漠刺激皮肤和粘膜，且对眼睛有催泪效果，造成腐蚀性影响，对研究人员的身体健康构 成了潜在风险。与本发明专利方法相比，其它已公开的申请专利"一种水中苯二酪类物质 的检测方法（公开号；CN104280447A)"、"同时检测对笨二酪和邻苯二酪的方法及应用的 氮渗杂石墨締修饰玻碳电极的制备方法（公开号；CN103267787A)"、"环境废水中酪类化 合物的检测方法"（公开号；CN104215696A)、"一种检测痕量酪类环境雌激素的方法（公 开号为CN103558305A)"和"一种测定水中痕量氯酪类内分泌干扰物的方法（公开号为 CN102768245A)"，所建立方法的目标物质不同，且种类单一、检测范围较窄，其采用的前处 理设备和分析仪器存在一定差异，极大的限制了其应用价值。另外，该几项已公开方法的检 测浓度范围和检测限远远高于本方法，无法满足环境水样品中低浓度、痕量酪类邸Cs分析 的要求。更为重要的是，它们不包括本方法研究的辛基酪（4-t-OP)、枯締基酪（4-CP)、壬基 酪（4-NP)、壬基酪二氧己締離（NP2EO)和壬基酪单氧己締離（NP1E0)6种典型的酪类邸Cs。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种同时测定水环境中6种痕量酪类环境内分泌干扰物的分析方 法，可W同时测定环境水样中6种典型痕量酪类环境内分泌干扰物（4-t-0P、4-CP、4-NP、BPA、NP1E0和NP2EO)的分析方法，其中，对4-t-辛基酪（4-t-OP)、4-枯締基酪（4-CP)、4-壬 基酪（4-N巧和双酪A炬PA)的检测线性范围为0. 5-5(K)ng/L，壬基酪单氧己締離（NP1EO) 和壬基酪二氧己締離（NP2EO)的检测线性范围为5-5(K)ng/L;标准曲线线性系数（R2)大 于0.99,相对标准偏差巧SD)小于5.02%;检出限（LOD)、定量限（LO曲和回收率分别为 0. 10-2. 30ng/L、0. 20-11. 50ng/L和 84. 65% -101. 38%。
[0005] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0006] 同时测定水环境中6种痕量酪类环境内分泌干扰物的分析方法，其特征在于，包 括如下步骤：
[0007] S1、将1L环境水样经0. 45ym微孔滤膜过滤后，用盐酸溶液调节抑至4. 5 ;
[000引 S2、用己酸己醋、甲醇和超纯水活化Sep-PakC-18固相小柱；
[0009]S3、将步骤S1所得的水样通过大体积进样器进入步骤S2所得的固相小柱后，在负 压条件下，W低于5mL/min的流速过柱，水样富集后，用lOmL甲醇-水（1 ; 9，v/v)混合溶 液淋洗固相萃取小柱，W排除小柱上富集杂质的干扰，真空干燥40min;
[0010]S4、加入10血二氯甲烧，缓慢打开固相萃取仪阀口，使二氯甲烧完全浸没小柱填 料后，迅速关闭阀口，待浸泡l-2min后，打开阀n，W小于0. 5mL/min的洗脱速率将洗脱液 收集到12血的栋色试剂瓶中，并用温和氮气浓缩至约500yL;
[0011] S5、将浓缩后的洗脱液转移至1. 5血GC小瓶中，用200uL二氯甲烧，在縱祸振荡 器上润洗试剂瓶，重复S次，将润洗液一并转移至1.5mLGC小瓶中；
[001引S6、将GC小瓶中的溶液用高纯温和氮气吹干后，加入50yLBSTFA和30yL化晚， 盖紧瓶盖，振荡混合均匀，在70°C条件下，衍生化反应40min后，静置至室温；
[001引S7、加入20yL内标工作液，振荡混合均匀，取1yL进行GC-MS分析。
[0014] 优选的，所述步骤S1中的微孔滤膜为GF/F玻璃纤维滤纸，水样通过微孔滤膜流速 为 6mL/min。
[0015] 优选的，所述步骤S2中固相小柱的活化过程为，先用5血己酸己醋去除Sep-Pak C-18固相萃取小柱填料中残留的粘合剂，再用5mL甲醇低速过柱，速率为l-2mL/min，最后 加入3X5mL超纯水，并保持液面W上约3mL的超纯水。
[0016] 优选的，所述步骤S3萃取过程中小柱的内液层水样体积始终大于ImL。
[0017] 优选的，所述步骤S4洗脱过程中，为确保固相萃取小柱富集的目标物被完全洗 脱，故二氯甲烧的流出速度应小于〇.5mL/min，且当二氯甲烧依靠重力作用流出后，应缓慢 开启真空累，并使其处于低压状态，将柱内液体全部抽出、并收集。
[001引优选的，所述步骤S7中的内标溶液采用正己烧溶解稀释至5ng/yL的雄烧溶液 (S-D)
[0019] 优选的，步骤S7中的GC-MS分析采用DB-5MS毛细色谱柱，W氮气作为载气，其流 速为1血/min;柱温箱起始温度为60°C，W15°C/min的升温速率升温至150°C，再W8°C/ min的升温速率升温至220°C，保持Imin，最后W15°C/min的升温速率升温至290°C，保持 5min;离子源为EI源，温度为250°C，电子轰击能量为70eV;扫描方式为全扫面模式定性， 扫描范围m/z50-600,并W选择离子扫描模式（SIM)定量。
[0020] 优选的，所述步骤S7中的GC-MS分析的进样方式为不分流进样，进样口温度为 260°C，进样体积为1yL传输线温度为280°C。
[0021] 本发明具有W下有益效果：
[002引采用沁p-Pak-C18固相萃取小柱富集酪类邸Cs，并W甲醇-水溶液淋洗小柱，用 二氯甲烧洗脱富集的酪类邸Cs至试剂小瓶中，经氮气浓缩后，加入BSTFA和化晚进行衍生 化反应，最后利用GC-MS测定环境水样中的痕量酪类邸Cs;通过衍生化反应，能够改善色谱 峰型，降低检测限，提高GC-MS分析的灵敏度和准确度；本发明简化了操作，具有分相时间 短、不易乳化、仪器精密度高、重现性好等优势，在水环境的相关研究中具有较大实际应用 价值。
【附图说明】
[0023] 图1为本发明实施例中环境水样品中6种酪类邸Cs的选择性离子色谱图。
[0024] 图中，横坐标表示时间，纵坐标表示酪类邸Cs经BSTFA衍生化后产物BST-4-t-OP、 BST-4-CP、BST-4-NP、BST-NP160、851'-8口4-(116、851'-8口4、851'-邮260和内标1.5.的响应值。
【具体实施方式】
[0025] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，W下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明，并不用于限定本发 明。
[0026] 本具体实施实施例中所有玻璃器皿均用纯水冲洗后置于高温程序烘箱中， 在450°C条件下，烘烤化，W去除粘着在器壁上的有机杂质，防止污染；除特殊说明外， 所有试剂纯度等级均为色谱纯级，实验用水为超纯水；所用试剂包括4-t-辛基酪标准 品，纯度大于99%，美国Sigma-Al化ich公司；4-枯締基酪标准品，纯度大于99%，美国 Sigma-Al化ich公司；4-壬基酪标准品，纯度大于99 %，美国Sigma-Al化ich公司；雄烧 标准品，纯度大于97 %，美国Sigma-Al化ich公司；双酪A标准品，纯度大于99 %，美国 Sigma-Al化ich公司；双酪A-die回收率指示物，纯度大于98%，美国Sigma-Al化ich公司； 壬基酪单氧己締離标准品，纯度大于99%，德国化.E虹enstorferGmbH公司；壬基酪二氧 己締離标准品，纯度大于99%，德国化.E虹enstorferGmbH公司；N，〇-双S甲基娃基S氣 己酷胺，美国Sigma-Al化ich公司；化晚；美国化uka公司；甲醇；德国Merck公司；二氯甲 烧；美国J.T.Baker公司；己酸己醋；德国Merck公司；正己烧；德国Merck公司。
[0027] 本发明方法的具体实施步骤如下：
[00測 S1、配制标准溶液
[0029] S11、配制标准储备液S-A(如表1):
[0030]准确称取 4-t-0P、4-CP、4-NP、BPA-die、BPA、NP2E0 和NP1E0 各 40mg，分别溶于 40血 的甲醇中，配成lOOOng/yL的酪类邸Cs标准储备液。
[0031]S12、配制标准工作液S-B(如表1):
[003引取10UL上述标准储备液S-A于12血玻璃瓶中，然后加入9990uL甲醇，稀释成 含各类目标物浓度为Ing/yL的标准工作液S-B。
[0033]S13、配制内标液储备液S-C(如表1);
[0034] 准确称取40mg雄烧溶于40血正己烧中，配成lOOOng/yL的内标储备液S-C，放入 冰箱（-45°C)冷冻待用。
[0035]S14、配制内标工作液S-D(如表1);
[0036] 取50uL上述标准储备液S-C于12血玻璃瓶中，然后加入9950uL正己烧，稀释 成含内标浓度为5ng/yL的标准工作液S-D。
[0037] 表1酪类邸Cs标准储备液
[00%]
[0039]S2、样品准备
[0040]S21、水样滤过及其抑值调节；环境水样通过Millipore微孔过滤系统，并将其抑 值用盐酸溶液调节至4. 5;
[004US22、S阳小柱选取及其活化；依次用5血己酸己醋、5血甲醇和3X5血超纯水活化 S巧-PakC-18固相萃取小柱；
[0042]S23、萃取；将水样通过Visiprep?大体积进样器进入S阳系统，在负压条件下W低 于5mL/min的流速过柱。水样富集后，用lOmL甲醇-水（1 ; 9,v/v)混合液淋洗小柱，真 空干燥40min。
[0043]S24、洗脱；加入10血二氯甲烧，使二氯甲烧完全浸没S阳小柱填料，待浸泡 l-2min后，再W小于0. 5mL/min的洗脱速率将洗脱液收集到12mL栋色试剂瓶中。
[0044] S3、衍生化过程
[0045] 酪类邸Cs的衍生化反应可W降低其极性，W期达到GC-MS分析的最佳条件，改善 色谱峰型、降低杂质干扰，提高仪器检测灵敏度等。本方法采用=甲基硅烷化衍生化法，将 酪类邸Cs的哲基进行S甲基硅烷化处理，具体步骤如下：
[0046] S31、将洗脱液在常温条件下用温和氮气缓慢吹至约500yL。
[0047