盐酸克伦特罗-莱克多巴胺-沙丁胺醇三联检测试剂卡的制作方法_3

文档序号:9373060阅读:来源:国知局
更佳,方便准确定性判定检测结果,并使得所述试剂条11的有效期显著延长。
[0045]所述壳体13为一端开口且内部中空的条形壳体,所述开口端用于所述试剂条11的插入和取出。所述壳体13包括贯穿其一侧表面设置的滴样窗131和显示窗133,所述滴样窗131正对所述样本吸收垫112设置,所述显示窗133正对所述硝酸纤维素膜114设置。通过所述滴样窗131进行加样操作,通过所述显示窗133观察检测结果。
[0046]所述壳体13还包括设于其外表面的卡套135,用于包含样本信息的卡片的存放,所述包含样本信息的卡片为条形码或二维码卡片,方便样本信息的录入与导出。
[0047]所述盐酸克伦特罗-莱克多巴胺-沙丁胺醇三联检测试剂卡I的制备方法:
[0048]I)实验仪器及试剂:
[0049]PVC板、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、切割机、台式离心机、真空冷冻干燥机等;盐酸克伦特罗标准品、羊或兔抗鼠抗体(Sigma公司)、抗盐酸克伦特轮抗体、抗沙丁胺醇抗体、抗莱克多巴胺抗体及盐酸克伦特罗-牛血清蛋白偶联物、沙丁胺醇-牛血清蛋白偶联物、莱克多巴胺-牛血清蛋白偶联物均由实验合成、聚乙烯二醇、聚乙二醇、甘氨酸、牛血清蛋白、I %氯金酸、I %柠檬酸钠、Tris-HCL缓冲液(PH= 7.5)及蒸馏水等。
[0050]2)胶体金溶液的制备:
[0051]取500mL蒸馏水于试剂瓶中,先滴加2500 μ L的氯金酸,加热至沸腾,再滴加进2500 μ L柠檬酸钠,观察溶液颜色变化,当其从紫红色逐渐变为红色时,小火加热5-10分钟后,冷却,再存储于4V冰箱待用。
[0052]3)胶体金垫的制备:
[0053]分别取5mL Tris-HCL缓冲液及20 μ L抗盐酸克伦特轮抗体、抗沙丁胺醇抗体及抗莱克多巴胺抗体混合并摇匀,再加入50mL胶体金溶液,之后于冰浴中放置5-10分钟,并将混合液PH调至8.5以上;静置30-40分钟后,继续加入600 μ L牛血清蛋白,之后静置5_10分钟,存储于离心管中,并以12000r/min离心处理,产生红色沉淀,再经洗涤液洗涤2_3次,将红色沉淀均匀滴加于玻璃纤维膜制成所述胶体金垫,冷冻保存待用;
[0054]将盐酸克伦特罗-牛血清蛋白偶联物、沙丁胺醇-牛血清蛋白偶联物及莱克多巴胺-牛血清蛋白偶联物和羊/兔抗鼠IgG抗体分别平行间隔喷涂在硝酸纤维素膜上,利用真空冷冻干燥机进行低温真空干燥,保存待用。
[0055]4)试剂条的封装:
[0056]在PVC底板上安装好之前保存待用的硝酸纤维素膜,在所述硝酸纤维素膜安装前对其先进行封阻,利用25g/L牛血清蛋白和1.5g甘氨酸来实现,消除非特异性结合的情况;然后在硝酸纤维素膜与所述PVC底板接触面的相对侧表面装配一层空气隔离防氧化聚乙烯保护膜;之后,再依次装配样本吸收垫、胶体金垫及吸水垫;最后,利用切割机进行切割加工,制成6cmX Icm的试剂条,瞭干备用。
[0057]5)试剂卡的制备:
[0058]提供一批厂家定制的一端开口且内部中空的条形壳体,中空空间尺寸与所述试剂条尺寸相适应,将所述试剂条通过壳体的开口端插入并卡合;所述壳体包括贯穿其一侧表面设置的滴样窗和显示窗,所述滴样窗正对所述样本吸收垫设置,所述显示窗正对所述硝酸纤维素膜设置,最后进行封口包装,至此所述盐酸克伦特罗-莱克多巴胺-沙丁胺醇三联检测试剂卡制备完毕,保存于低温密封环境,备用。
[0059]所述盐酸克伦特罗-莱克多巴胺-沙丁胺醇三联检测试剂卡I的使用方法:
[0060]I)样本的制备:
[0061 ] 尿液样本:随机抽样一定量牲畜尿液,3000r/min离心操作5分钟,取上清液100 μ L检测,检测液稀释倍数为I ;
[0062]饲料样本:随机抽样2g匀质化处理的饲料样本,加入20ml的0.1M HCL溶液,震荡操作5分钟,3000r/mmin离心操作10分钟,取上清液2ml加入40 μ L的IM NaOH溶液,再3000r/mmin离心操作10分钟,取100 μ L上清液进行检测,检测液稀释倍数为10 ;
[0063]组织样本:随机抽样5g粉碎组织样本,加入12ml 3 %的三氯乙酸,震荡颠倒混匀,3000r/mmin离心操作10分钟;取上清液6ml加6ml异丙醇-乙酸乙酯混合液,振荡10分钟,静置5分钟;再3000r/mmin离心操作10分钟,取100 μ L上清液进行检测,检测液稀释倍数为5 ;
[0064]2)加样检测:
[0065]将制备好的盐酸克伦特罗-莱克多巴胺-沙丁胺醇三联检测试剂卡取出,在室温环境下25 °C -35 °C进行样本检测;
[0066]分别将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺标准液0ng/ml、lng/ml、3ng/ml、5ng/ml、7ng/ml、9ng/ml分别滴加于试剂卡的滴样窗,作为对照组进行颜色观察;将待测样本分别滴样于试剂卡的滴样窗,每个滴样窗依次滴加3滴待测样本液;
[0067]3)结果判定:
[0068]通过试剂卡的显示窗进行颜色观察,对待测样本检测卡的颜色进行初步定性判断,以确定待测样本中是否含有盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺残留,具体为:
[0069]a)如果三条检测线1141、1142、1143和质控线1145同时显现紫红色,表示结果为阴性,说明被检测样本中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺含量没有超过允许值(3ng/ml);
[0070]b)如果检测线1141、1142、1143不显示颜色,质控线1145显示紫红色,检测结果为阳性,表明被检测样本中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺含量同时超过允许值(3ng/ml);
[0071]c)如果检测线1141、1142不显示颜色,检测线1143和质控线1145同时显示紫红色,检测结果为阳性,表明被检测样本中盐酸克伦特罗和沙丁胺醇含量超过允许值(3ng/ml),而莱克多巴胺含量没有超过允许值(3ng/ml);
[0072]d)如果检测线1141、1143不显示颜色,检测线1142和质控线1145同时显示紫红色,检测结果为阳性,表明被检测样本中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺含量超过允许值(3ng/ml),而沙丁胺醇含量没有超过允许值(3ng/ml);
[0073]e)如果检测线1142、1143不显示颜色,检测线1141和质控线1145同时显示紫红色,检测结果为阳性,表明被检测样本中沙丁胺醇和莱克多巴胺含量超过允许值(3ng/ml),而盐酸克伦特罗含量没有超过允许值(3ng/ml);
[0074]f)如果检测线1141不显示颜色,检测线1142、1143和质控线1145同时显示紫红色,检测结果为阳性,表明被检测样本中盐酸克伦特罗含量超过允许值(3ng/ml),而沙丁胺醇和莱克多巴胺含量没有超过允许值(3ng/ml);
[0075]g)如果检测线1142不显示颜色,检测线1141、1143和质控线1145同时显示紫红色,检测结果为阳性,表明被
当前第3页1 2 3 4 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1