一种植物叶片花青素的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于花青素提取技术领域，具体涉及一种植物叶片花青素的提取方法。
【背景技术】
[0002] 花青素是一种水溶性黄酮类化合物，广泛存在于植物的花、叶片、果实等植物器官 中，它是植物叶片色素中第三类主要色素，尤其在植物幼小和衰老叶片中含量丰富。花青素 的有效积累是由许多环境胁迫引起的，包括强光和中波紫外线照射、低温、干旱、损伤、细菌 及真菌感染、氮和磷的缺乏、除草剂及污染物，因此在许多植物种类中，花青素可以作为植 物叶片衰老及胁迫的指示器，它们的探测和定量评估，能够提供植物对环境胁迫的响应和 调整的重要信息。
[0003] 花青素具有抗氧化、预防心脑血管疾病、抗突变、保护肝脏等多种生理功能。植物 叶呈紫红色，富含花青素，是研究植物叶花青素的理想对象。现有技术中，郑永春等采用"将 不同时期的上、下两部分叶片粉末分别准确称量I.OOOg于试管中，加入20mL甲醇溶液（含 1%盐酸，体积比）提取液，轻轻混匀。将试管置于4°C避光浸提12小时，过滤，加入提取液 定容至50mL后，冷藏备用。所有样品平行处理3次。以高效液相色谱法测定提取液中的花 青素含量"（紫叶李叶中花青素含量动态变化的研究，郑永春等，湖北农业科学，第51卷第 8期，第1675-1677页，2012年）的方法对植物叶片中的花青素进行提取，该方法处理时间 较长，提取成本较高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种植物叶片花青素的提取方法，该方法提取过程简单易 操作，处理时间较短，成本较低，提取率较高。
[0005] 为实现以上目的，本发明采用的技术方案为：
[0006] -种植物叶片花青素的提取方法，包括将植物叶片碎片加入酸化甲醇中，在30~ 50°C条件下浸提至少2次，每次浸提时间为1. 5~2. 5h，每次浸提后对浸提液进行离心 分离，合并上清液，过滤，即得花青素提取液；所述酸化甲醇为盐酸与甲醇溶液的体积比为 0.837:100的混合液。
[0007] 所述盐酸的质量浓度为36~38%。
[0008] 所述植物叶片碎片为2X5mm的长条状碎片。
[0009] 所述植物叶片碎片通过将植物叶片洗净去杂、吸干后剪碎得到。
[0010] 所述酸化甲醇的用量为：每IL酸化甲醇加入10~20g植物叶片碎片。
[0011] 所述离心分离的转速为3000~7000r/min。
[0012] 所述甲醇溶液中甲醇的体积含量不小于95 %。
[0013] 植物叶片花青素的提取方法还包括得到花青素提取液后对植物叶片花青素提取 量的测定，测定方法包括以下步骤：
[0014] 1)将花青素提取液定容；
[0015] 2)利用分光光度计测定定容后花青素提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光 密度值；
[0016] 3)根据式（1)计算定容后花青素提取液中花青素的ODa;
[0017] 4)根据式（2)计算植物叶片花青素提取量，基于质量进行表达，单位为ymol/g;
[0018] ODx= (OD53O-OD620)-O.IX(OD650-OD620) (1)
[0020] 式中ODx -花青素提取液在530nm波长下修正后的光密度值；
[0021] ￡,-花青素摩尔消光系数，取4.62\104，17!11〇1;
[0022] V-花青素提取液总体积，mL;
[0023] m-植物叶片碎片质量，g;
[0024] Canth-植物叶片花青素提取量，ymol/g〇
[0025] 步骤1)中所述定容为取花青素提取液20mL用酸化甲醇定容至50mL。
[0026] 植物叶片花青素提取量的测定方法来自文献"熊庆娥等，植物生理学实验教程 [M]，第94-95页，成都，四川科学技术出版社，2003年"。
[0027] 本发明的植物叶片花青素的提取方法，优化采用酸化甲醇提取植物叶片花青素方 法参数得到花青素的最大提取率。提取植物叶片花青素时反应的温度与时间对花青素提取 率有很大影响；提取花青素时盐酸的作用主要是让花青素显红色，将溶液中叶绿素和花青 素区别开，酸化甲醇中盐酸含量需适中，盐酸含量太低无法将叶绿素和花青素区别开，盐酸 含量太高会引起化学反应，提取出的花青素减少；本发明优化了酸化甲醇提取花青素的温 度、时间及酸化甲醇中盐酸的含量，实现高效快速地提取植物叶片中花青素。酸化甲醇中的 甲醇可被回收，降低提取成本，该方法简单易操作，处理时间较短，提取率较高，成本较低。
[0028] 本发明的植物叶片花青素的提取方法，利用分光光度计测定植物叶片花青素提取 量，进一步降低成本。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限 制。
[0030] 实施例1
[0031] 本实施例的植物叶片花青素的提取方法，包括以下步骤：
[0032] 1)植物叶片样品采集与处理：2015年5月在西北农林科技大学校园内，采集了 紫叶李的不同树龄叶片，叶片基于可视化特征进行随机选择，叶片的颜色从绿、微红到完全 红，并且健康、无损伤，采集了 342个紫叶李叶片，每3个叶片为1个样本，共114个样本；取 紫叶李叶片用水洗净去杂、吸干，剪成2X5mm长条状碎片；
[0033] 2)取IOg步骤1)所述长条状碎片，加入到IL酸化甲醇（盐酸与甲醇溶液的体积 比为0. 837:100,盐酸的质量浓度为36%，甲醇溶液中甲醇的体积含量为95% )中进行2次 浸提，每次浸提温度为45°C，时间为2h，每次浸提后在5000r/min下离心分离，合并2次离 心上清液，过滤，即得花青素提取液。
[0034]利用分光光度计测定植物叶片花青素提取量，包括以下步骤：
[0035] 1)取花青素提取液20mL用酸化甲醇定容至50mL ;
[0036] 2)利用分光光度计测定定容后花青素提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光 密度值；
[0037] 3)根据式（1)计算定容后花青素提取液中花青素的ODa;
[0038] 4)根据式（2)计算植物叶片花青素提取量，基于质量进行表达，单位为ymol/g;
[0039] ODx= (OD53O-OD620)-O. IX (OD650-OD620) (1)
[0041] 式中ODx -花青素提取液在530nm波长下修正后的光密度值；
[0042] eX-花青素摩尔消光系数，取4. 62X 10 4, L/mol ;
[0043] V -花青素提取液总体积，mL ;
[0044] m -植物叶片碎片质量，g;
[0045] Canth-植物叶片花青素提取量，ymol/g 〇
[0046] 测得的植物叶片花青素提取量为4. 610ymol/g。
[0047] 实施例2
[0048] 本实施例的植物叶片花青素的提取方法，包括以下步骤：
[0049] 1)2015年4月初在西北农林科技大学牡丹园内，在牡丹开花前期采集了 14个不同 品种的叶片，叶片基于可视化特征进行随机选择，叶片的颜色从绿、微红到完全红，并且健 康、无损伤，采集了 396个牡丹叶片，每3个叶片为1个样本，共132个样本。取牡丹叶片用 水洗净去杂、吸干，剪成2X5_长条状碎片；
[0050] 2)取20g步骤1)所述长条状碎片，加入到IL酸化甲醇（盐酸与甲醇溶液的体积 比为0. 837:100,盐酸的质量浓度为36%，甲醇溶液中甲醇的体积含量为95% )中进行2次 浸提，每次浸提温度为45°C，时间为2h，每次浸提后在5000r/min下离心分离，合并2次离 心上清液，过滤，即得花青素提取液。
[0051] 利用分光光度计测定所提取的植物叶片花青素提取量，具体操作方法同实施例1， 植物叶片花青素提取量为0. 656ymol/g。
[0052] 实施例3
[0053] 本实施例的植物叶片花青素的提取方法，包括以下步骤：
[0054] 1)植物叶片处理：取紫叶李叶片用水洗净去杂、吸干，剪成2X5_长条状碎片；
[0055] 2)取15g步骤1)所述长条状碎片，加入到IL酸化甲醇（盐酸与甲醇溶液的体积 比为0. 837:100,盐酸的质量浓度为38%，甲醇溶液中甲醇的体积含量为98% )中进行3次 浸提，每次浸提温度为30°C，时间为2. 5h，每次浸提后在3000r/min下离心分离，合并3次 离心上清液，过滤，即得花青素提取液。
[0056] 利用分光光度计测定所提取的植物叶片花青素提取量，具体操作方法同实施例1， 植物叶片花青素提取量为4. 391ymol/g。
[0057] 实施例4
[0058] 本实施例的植物叶片花青素的提取方法，包括以下步骤：
[0059] 1)植物叶片处理：取牡丹叶片用水洗净去杂、吸干，剪成2X5mm长条状碎片；
[0060] 2)取15g步骤1)所述长条状碎片，加入到IL酸化甲醇（盐酸与甲醇溶液的体积 比为0. 837:100,盐酸的质量浓度为37%，甲醇溶液中甲醇的体积含量为97% )中进行3次 浸提，每次浸提温度为50°C，时间为I. 5h，每次浸提后在7000r/min下离心分离，合并3次 离心上清液，过滤，即得花青素提取液。
[0061] 利用分光光度计测定所提取的植物叶片花青素提取量，具体操作方法同实施例1， 植物叶片花青素提取量为0. 641ymol/g。
【主权项】
1. 一种植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，包括：将植物叶片碎片加入酸化甲 醇中，在30~50°C条件下浸提至少2次，每次浸提时间为1. 5~2. 5h，每次浸提后对浸提 液进行离心分离，合并上清液，过滤，即得花青素提取液；所述酸化甲醇为盐酸与甲醇溶液 的体积比为0. 837:100的混合液。2. 根据权利要求1所述植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，所述盐酸的质量浓 度为36~38%。3. 根据权利要求1所述植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，所述植物叶片碎片 为2X5mm的长条状碎片。4. 根据权利要求1或3所述植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，所述植物叶片碎 片通过将植物叶片洗净去杂、吸干后剪碎得到。5. 根据权利要求1所述植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，所述酸化甲醇的用 量为：每IL酸化甲醇加入10~20g植物叶片碎片。6. 根据权利要求1所述植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，所述离心分离的转 速为 3000 ~7000r/min。7. 根据权利要求1所述植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，所述甲醇溶液中甲 醇的体积含量不小于95%。8. 根据权利要求1所述植物叶片花青素的提取方法，其特征在于，还包括在得到花青 素提取液后，对植物叶片花青素提取量进行测定，测定方法包括以下步骤： 1) 将花青素提取液定容； 2) 利用分光光度计测定定容后花青素提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度 值； 3) 根据式（1)计算定容后花青素提取液中花青素的ODa; 4) 根据式（2)计算植物叶片花青素提取量，基于质量进行表达，单位为ymol/g; ODa=(OD530-OD620)-O.IX(OD650-OD620) (1)式中ODx-花青素提取液在530nm波长下修正后的光密度值； ea-花青素摩尔消光系数，取4. 62X10 4,L/mol; V-花青素提取液总体积，mL; m-植物叶片碎片质量，g; Qwra-植物叶片花青素提取量，ym〇l/g。
【专利摘要】本发明公开了一种植物叶片花青素的提取方法，属于花青素提取技术领域。该提取方法包括将植物叶片碎片加入酸化甲醇中，在30～50℃条件下浸提至少2次，每次浸提时间为1.5～2.5h，每次浸提后对浸提液进行离心分离，合并上清液，过滤，即得花青素提取液，酸化甲醇为盐酸与甲醇溶液的体积比为0.837:100的混合液。该方法所得植物叶片中花青素提取率较高，酸化甲醇中的甲醇可被回收利用，降低了提取成本，具有操作简单、处理时间短、成本较低等优点。
【IPC分类】G01N1/30, G01N1/28, G01N21/31
【公开号】CN105223049
【申请号】CN201510543620
【发明人】刘秀英, 熊建利, 常庆瑞, 申健, 王力, 宋荣杰, 高雨茜
【申请人】河南科技大学
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年8月28日