知的，且包括但不限于磷酸铝、氢氧化铝或其组合。合适的铝盐佐剂包括但不限于:Rehydragel ? HS、Alhydrogel ? 85、Rehydragel ? PM、Rehydragel ?AB、Rehydragel? HPA、Rehydragel? LV、Alhydrogel?或其组合。具体而言，本发明的方法用于测定Adjuphos、Rehydragel? HS (3%氢氧化招 /水[General Chemical])或Alhydrogel?85 (Brenntag B1Sector [Denmark])的内毒素含量。
[0024]具体而言，本发明的方法用于测定具有2.5至3.5、2.6至3.4、2.7至3.3或2.9至3.2,2.5至3.7,2.6至3.6,2.7至3.5或2.8至3.4蛋白(BSA)/ml铝盐的蛋白吸附能力的铝盐的内毒素含量。在本发明一个具体实施方案中，本发明的方法用于测定具有2.9至3.2 mg BSA/mg铝盐的蛋白吸附能力的铝盐的内毒素含量。铝盐的蛋白吸附能力可以通过技术人员已知的任何方式来测量。在本发明的一个具体实施方案中，铝盐的蛋白吸附能力使用W02012/136823的实施例1中所述的方法(其利用BSA)或其变型来测量。
[0025]本发明的方法用于测定本文所述的铝盐(即具有本文所述的蛋白吸附能力)的内毒素含量，所述铝盐具有如通过X-射线衍射测量的2.8至5.7nm，例如如通过X-射线衍射测量的2.9至5.6nm、2.8至3.5nm、2.9至3.4nm或3.4至5.6nm或3.3至5.7nm的晶体大小。X-射线衍射是技术人员众所周知的。在本发明的一个具体实施方案中，晶体大小使用TO2012/136823的实施例1中所述的方法或其变型来测量。
[0026]本发明的方法特别可用于质量控制测定中。术语“质量控制”测定在本文中用于意指质量控制(QC)是意欲确保制备的产品或进行的服务符合质量标准的定义集合或满足制造商的要求的程序或程序集合。因此，本发明的方法适合于在质量控制测定中使用。
[0027]在一个具体实施方案中，本文所述的本发明的方法用于在铝盐与其他疫苗组分配制之前测试铝盐制备物。在一个进一步实施方案中，本文所述的本发明的方法用于在铝盐与其他疫苗组分(例如特定抗原)配制之后测试铝盐制备物。在一个进一步实施方案中，本文所述的本发明的方法用于在铝盐制备物与其他疫苗组分(例如抗原，具体而言本文所述的那些)配制之前和之后测试铝盐制备物的内毒素含量。
[0028]本发明的方法可以涉及:从大量铝盐提取样品；通过本文定义的方法测试样品；且然后如果样品通过测试，则将一种或多种抗原(具体而言本文所述的那些)吸附至所述铝盐；和任选地组合所述铝盐与一种或多种其他抗原(具体而言，本文所述的那些)。
[0029]本发明的铝盐可以在测试其内毒素含量之前和/或之后与抗原配制。
[0030]可以与本发明的铝盐配制的抗原包括但不限于破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、乙型肝炎表面抗原、灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)、百日咳杆菌粘附素，丝状血凝素(FHA)百日咳类毒素和/或流感嗜血杆菌{Haemophilus influenzae) B型多糖(Hib)[具体而言，来自流感嗜血杆菌B型的磷酸聚核糖基核糖醇荚膜糖(PRP))、人乳头状瘤病毒(例如，来自HPV 6、11、16、18或其组合的病毒样颗粒)、缀合至载体蛋白(例如TT、DT和/或CRM197)的源自肺炎链球菌{Streptococcus pneumoniae)的多糖。
[0031]破伤风类毒素(TT)和它们的制备方法是本领域中众所周知的。TT可以通过从破伤风梭状芽孢杆菌{Clostridiim tetani)的培养物纯化毒素、随后化学脱毒来产生，但其或者通过纯化毒素的重组或遗传脱毒的类似物来制备(例如，如EP 209281中所述)。优选的脱毒方法如下。发酵之后，在作为助滤剂的硅藻土存在的情况下在0.1-0.3μπι过滤器上过滤培养液。收获物通过0.22Pm过滤器澄清、浓缩且在30kD平板膜(flatsheet membrane)上针对10倍体积的磷酸盐缓冲液(20mM - pH 7.3)进行渗滤。渗滤的毒素然后在37°C在以下条件中脱毒4周:甲醛20mM -赖氨酸3mM -磷酸钾100mM -初始pH 7.3 - 500Lf/mlo所得类毒素通过硫酸铵分级纯化、浓缩且针对WFI渗滤(30KD)以去除硫酸铵。将NaCl添加至0.9%的最终浓度，将pH调节至7.3且无菌过滤纯化的破伤风类毒素。
[0032]可以使用任何合适的破伤风类毒素。‘破伤风类毒素’可以涵盖全长蛋白的免疫原性片段(例如C片段-参见EP 478602)。
[0033]本发明的破伤风类毒素通常吸附至铝盐上。在本发明的一个具体实施方案中，所述铝盐是氢氧化铝。在另一个实施方案中，本发明的破伤风类毒素可以吸附至铝盐诸如磷酸铝上。在一个进一步实施方案中，破伤风类毒素可以吸附至氢氧化铝和磷酸铝两者的混合物上。
[0034]将蛋白(包括破伤风类毒素)吸附至铝盐上的方法是技术人员众所周知的(例如疫苗制备通常描述于 Vaccine Design “The subunit and adjuvant approach”(编辑Powell M.F.& Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York)。
[0035]白喉类毒素(DT)和它们的制备方法得到充分记录。任何合适的白喉类毒素可以在内毒素测试之后或之前与本文所述的铝盐配制。例如，DT可以通过从白喉棒杆菌(Corynebac terium diph theriae)的培养物纯化毒素、随后化学脱毒来产生，但或者通过纯化毒素的重组或遗传脱毒的类似物来制备(例如，CRM197，或如US 4，709,017、US5,843, 71UUS 5，601，827和US 5，917，017中所述的其他突变体)。优选的脱毒方法如下。发酵之后，白喉毒素通过TFF 0.45μπι收获，通过0.22μπι过滤器澄清、浓缩且在10kD平板膜上针对10倍体积的磷酸盐缓冲液(20mM - pH 7.2)进行渗滤。渗滤的毒素然后在37°C在以下条件中脱毒6周:甲醛50mM -赖氨酸25mM -磷酸钾50mM -初始pH 7.2 - 300Lf/mlo所得类毒素通过硫酸铵分级纯化、浓缩且针对WFI渗滤(30KD)以去除硫酸铵。将NaCl添加至0.9%的最终浓度，将pH调节至7.3且无菌过滤纯化的白喉类毒素。
[0036]灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV)可以包含IPV 1型或IPV 2型或IPV 3型，或IPV 1型和2型，或IPV 1型和3型，或IPV 2型和3型，或IPV 1型、2型和3型。
[0037]制备灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)的方法是本领域中众所周知的。在一个实施方案中，IPV应当包含如疫苗领域中常见的1型、2型和3型，且可以是用甲醛灭活的Salk脊髓灰质炎疫苗(参见例如，Sutter 等人，2000，Pediatr.Clin.North Am.47:287;Zimmerman & Spann 1999, Am Fam Physician 59:113; Salk 等人，1954, OfficialMonthly Publicat1n of the American Public Health Associat1n 44 (5):563;Hennesen, 1981, Develop.B1l.Standard 47:139; Budowsky, 1991, Adv.VirusRes.39:255)。或者，IPV 可以使用 Sabin 毒株制备(Sabin-1PV; Kersten 等人(1999)，Vaccine 17:2059)。
[0038]在一个实施方案中，没有吸附IPV (例如，与其他组分混合之前)。在另一个实