本文的术语“包含(comprising) ”、“包含(comprise)”和“包含(comprises) ”可以任选地分别由术语“由…组成(consisting of)”、“由…组成(consist of)”和“由…组成(consists of)” 替换。
[0059]本文使用的术语“约”意指量±10%。
实施例
[0060]1.解吸缓冲液的制备:
为了制备100ml解吸缓冲液，将17.8 g Na2HP04、0.224 g EDTA和90ml无致热原水(如果可能，在37°C培养箱中预热)置于250ml Nunc无致热原的容器中。
[0061]通过在搅拌桌上搅拌15分钟、在37°C ±1°C在培养箱中加热30分钟和重复搅拌和加热直至完全溶解而溶解盐和Η)ΤΑ。
[0062]为了调节pH，添加3ml HC1 1N，测量pH，且如果必要，用HC1 1N调节至ρΗ8.0。用无致热原水将体积补足至100ml。在1/100稀释度通过LAL分析测定内毒素的不存在。在37 °C ± 1 °C储存解吸缓冲液。
[0063]2.内毒素的测定:
为了测定铝样品(4ml)的内毒素含量，将解吸缓冲液^ml)添加至铝盐样品。将混合物搅拌1分钟，然后在室温孵育24小时。
[0064]孵育之后，通过将管上下颠倒5次而缓慢摇动混合物。取出样品(1.5ml)，且转移至2ml eppendorf管。将混合物以10，000 rpm离心10分钟。然后将上清液转移至无致热原管。然后在1/50稀释度使用LAL通过动态显色法定量内毒素含量。
【主权项】
1.用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤: a.混合所述铝盐与解吸缓冲液，由此从所述铝盐解吸任何内毒素； b.将所述铝盐与所述内毒素分离；和 c.测量内毒素的量。2.用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤: a.混合所述铝盐与解吸缓冲液，由此从所述铝盐解吸任何内毒素； b.离心混合物，由此将所述铝盐与所述内毒素分离；和 c.测量上清液的内毒素含量。3.用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤: a.混合所述铝盐与解吸缓冲液，由此从所述铝盐解吸任何内毒素； b.离心混合物，由此将所述铝盐与所述内毒素分离； c.将上清液转移至无致热原容器；和 d.测量所述上清液的内毒素含量。4.根据任一前述权利要求的方法，其中以1:9至9:1，例如2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:2或8:2(具体而言3:7、4:6、5:5、6:4、7:3之间，具体而言4:6、5:5和6:4)的比率混合所述铝盐制备物和解吸缓冲液。5.根据任一前述权利要求的方法，其中在混合之后和分离(具体而言离心)之前孵育(具体而言无搅拌)所述混合物(具体而言持续大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时，具体而言小于96或72小时，例如孵育期为1至96小时、5至72小时、10至48小时、15至36小时或20至28小时)。6.根据权利要求5的方法，其中在室温(约22°C)进行所述孵育(具体而言用于测定磷酸铝的内毒素的方法中使用)。7.根据权利要求5 的方法，其中在大于 30 °C、35 °C、40 °C、45 °C、50 °C、55 °C、60 °C、65 °C进行所述孵育(具体而言用于测定氢氧化铝的内毒素的方法中使用)。8.根据任一前述权利要求的方法，其中所述混合物在步骤a)之后搅拌多于30秒、40秒、50秒、1分钟、1分钟30秒或2分钟ο9.根据任一前述权利要求的方法，其中所述解吸缓冲液包含盐(具体而言Na2HP04[具体而言15至20%])和金属螯合剂(具体而言m)TA [具体而言0.2至0.3%])。10.根据任一前述权利要求的方法(具体而言用于测定氢氧化铝的内毒素的方法中使用)，其中所述解吸缓冲液包含其他盐(具体而言NaCl)。11.根据任一前述权利要求的方法，其中所述解吸缓冲液(具体而言用于测定磷酸铝的内毒素的方法中使用的解吸缓冲液)具有等于或大于PH5.5，例如约pH7至pH9的pH。12.根据任一前述权利要求的方法，其中所述解吸缓冲液(具体而言用于测定氢氧化铝的内毒素的方法中使用的解吸缓冲液)具有等于或大于PH9.5，例如pH9.5至ρΗΙΟ.5的pHo13.根据任一前述权利要求的方法，其中所述解吸缓冲液在约30°(:至45°(:、35°(:至40 °C、36 °C至38 °C或约37 °C的温度。14.根据任一前述权利要求的方法，其中所述解吸缓冲液在大于35°C、40°C、45°C、50 °C、55 °C、60 °C 或 65 °C 的温度。15.根据任一前述权利要求的方法，其中所述解吸缓冲液基本上无内毒素和/或是无菌的。16.根据任一前述权利要求的方法，其中以100至1500X g离心所述混合物。17.方法，其中通过鲎变形细胞溶解物(LAL)测定(具体而言通过动态显色法)测量/定量内毒素含量。18.根据任一前述权利要求的方法，其中所述铝盐是磷酸铝、氢氧化铝或其组合。19.质量控制测定，其包括权利要求1至18中任一项的方法。20.制备用于测定铝盐中的内毒素的方法的解吸缓冲液的方法，其包括以下步骤: a.混合碱(具体而言Na2HP04)、金属螯合剂(具体而言Η)ΤΑ)和水；任选地 b.搅拌混合物(具体而言持续等于或大于30秒，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15分钟)；和任选地 c.将所述混合物孵育等于或大于5、10、15、20、25或30分钟。21.制备用于测定铝盐中的内毒素的方法的解吸缓冲液的方法，其包括以下步骤: a.混合盐、金属螯合剂和水；任选地 b.在37°C+/_1°C搅拌组合的混合物至孵育期(以溶解)；任选地 c.添加酸或碱以固定pH;任选地 d.添加水以达到制备物的最终体积；和任选地 e.在37°C+/_1°C 储存。22.根据权利要求20的方法，其中步骤b)和/或c)重复1次、2次或更多次。23.根据权利要求20至22中任一项的方法，其中所述水基本上无内毒素。24.根据权利要求20至23中任一项的方法，其中将步骤a)的水预热至约30°C至45°C、35°C至 40°C、36°C至 38°C或约 37°C (±1°C )。25.根据权利要求20至24中任一项的方法，其中将pH调节至7至9，特别是约pH8或9.5 至 10.5。26.根据权利要求25的方法，其中当所述缓冲液在约30°C至45°C、35°C至40°C、36°C至38°C或约37°C (±1°C )时，调节所述pH。27.根据权利要求20至26中任一项的方法，其进一步包括d)在约30°C至45°C、35°C至40°C、36°C至38°C或约37°C (±1°C )储存所述解吸缓冲液的步骤。
【专利摘要】本发明提供用于测定用于药物中的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤：a.混合所述铝盐制备物与解吸缓冲液，由此从所述铝盐解吸任何内毒素；b.将所述铝盐与所述内毒素分离；和c.测量内毒素的量。
【IPC分类】G01N33/579, G01N1/40, G01N33/569, G01N1/34, A61K39/39, A61K39/00
【公开号】CN105247369
【申请号】CN201480031800
【发明人】C.马斯科
【申请人】葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2014年6月5日
【公告号】CA2913025A1, EP3004886A1, US20160131652, WO2014195387A1