施方案中，本发明的IPV组分可以吸附至铝盐诸如氢氧化铝上(例如，与其他组分混合之前或之后)。在另一个实施方案中，本发明的IPV组分可以吸附至铝盐诸如磷酸铝上。在一个进一步实施方案中，IPV组分可以吸附至氢氧化铝和磷酸铝两者的混合物上。如果吸附，则一种或多种IPV组分可以分别吸附或作为混合物一起吸附。在一个进一步实施方案中，IPV如本文所述吸附至铝盐/颗粒上。
[0039]百日咳杆菌粘附素(百日咳的69 kDa抗原)是外膜蛋白，其是热稳定的并且可以通过本领域已知的方法制备(参见EP0162639)。任选地将百日咳杆菌粘附素吸附至铝盐颗粒上。在本发明的一个实施方案中，将百日咳杆菌粘附素吸附至氢氧化铝上。在本发明的一个具体实施方案中，如本文描述将百日咳杆菌粘附素吸附至铝盐上。
[0040]可以以本领域众所周知的方法制备丝状血凝素(FHA)(参见W0/1990/013313(US7479283)中公开且引用的方法)。任选地将FHA吸附至铝盐颗粒上。在本发明的一个实施方案中，将FHA吸附至氢氧化铝上。在本发明的一个具体实施方案中，如本文描述将FHA吸附至铝盐上。
[0041 ] 产生百日咳类毒素的方法对于技术人员是众所周知的。可以通过众所周知的甲醛处理的方法或通过突变方法(PT衍生物)将百日咳毒素脱毒。已经发现蛋白的S1亚基内的残基取代导致产生保留百日咳毒素的免疫学和保护特性但具有降低的或没有毒性的蛋白(EP 322533)。在EP322533的权利要求中讨论的脱毒突变是本发明的PT脱毒突变体的实例。任选地将百日咳类毒素吸附至铝盐颗粒上。在本发明的一个实施方案中，将百日咳类毒素吸附至氢氧化铝上。在本发明的一个具体实施方案中，如本文描述将百日咳类毒素吸附至铝盐上。
[0042]来自流感嗜血杆菌b型的磷酸聚核糖基核糖醇荚膜糖(PRP)可以缀合至载体蛋白。所述糖是核糖、核糖醇和磷酸的聚合物。如W097/00697中所述可以任选地将Hib抗原吸附至磷酸铝上，或者如W002/00249中所述可以是未吸附的或者可以不进行特定的吸附方法。
[0043]本文中的抗原‘未吸附至铝佐剂盐上’(“未吸附(unadsorbed) ”或“没有吸附(notadsorbed) ”)意指例如在组合物的配制方法中不涉及明确的或专门的抗原在新的招佐剂盐上的吸附步骤。
[0044]Hib可以缀合至任何载体，所述载体可以提供至少一种T辅助细胞表位，并且可以是破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM-197(白喉类毒素突变体)或来自非分型流感嗜血杆菌的蛋白 D(EP0594610)。
[0045]在一个进一步实施方案中，提供本发明的方法，其进一步包括配制免疫原性组合物与乙型肝炎表面抗原的步骤。
[0046]乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的制备得到充分记录。参见例如Hartford等人，1983, Develop.B1l.Standard 54:125; Gregg 等人，1987，B1technology 5:479;EP0226846; EP0299108。其可以如下制备。由于在HBV感染过程中，大量HBsAg在肝脏中合成且释放至血流中，所以一种方法涉及从慢性乙型肝炎携带者的血浆中纯化微粒形式的抗原。另一种方法涉及通过重组DNA方法表达蛋白。可以通过在酿酒酵母{Sacclmromycescerevisiae)酵母、毕赤酵母、昆虫细胞(例如Hi5)或哺乳动物细胞中表达来制备HBsAg。可以将HBsAg插入至质粒中，并且可以通过启动子诸如“GAPDH”启动子(来自甘油醛_3_磷酸脱氢酶基因)来控制其从质粒的表达。酵母可以在合成培养基中培养。然后可以通过涉及步骤诸如沉淀、离子交换层析和超滤的方法来纯化HBsAg。纯化之后，HBsAg可以进行透析(例如用半胱氨酸)。HBsAg可以以微粒形式使用。
[0047]如本文所使用，表述“乙型肝炎表面抗原”或“HBsAg”包括展示出HBV表面抗原的抗原性的任何HBsAg抗原或其片段。应当理解，除了 HBsAg S抗原的226个氨基酸序列以外(参见T1llais等人，1985，Nature 317:489和其中的参考文献)，如果需要，如本文所述的HBsAg可以含有如以上参考文献中和EP0278940中描述的前S序列的全部或部分。具体而言，HBsAg可以包含含有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列包含相对于ad血清型的乙型肝炎病毒上的开放阅读框的HBsAg的L-蛋白的残基133-145和随后为残基175-400 (该多肽称为L*;见EP0414374)。在本发明的范围内，HBsAg还可以包括EP0198474(Endotronics)中描述的前SI (preSl)-前S2 (preS2) -S多肽或者其类似物诸如EP0304578(McCormick和Jones)中描述的那些。如本文所使用的HBsAg还可以指突变体，例如W091/14703或EP0511855A1中描述的“逃逸突变体”，特别是其中在145位上的氨基酸取代是甘氨酸取代为精氨酸的HBsAg。
[0048]HBsAg可以是颗粒形式。所述颗粒可以包含例如单独S蛋白或者可以是复合颗粒，例如L*，S)，其中L*如上文所定义并且S表示HBsAg的S蛋白。所述颗粒有利地是其在酵母中表达的形式。
[0049]在一个实施方案中，HBsAg是用于? (GlaxoSmithKline B1logicalsS.A.)中的抗原，其进一步描述于W093/24148中。
[0050]可以将乙型肝炎表面抗原任选地吸附至铝盐、具体而言磷酸铝上，其可以在与其他组分混合之前完成(描述于W093/24148)。乙型肝炎组分应当基本上无硫柳汞(无硫柳汞的HBsAg的制备方法先前已经公开于EP1307473中)。
[0051 ] 本发明进一步提供制备用于测定铝盐中的内毒素的方法的解吸缓冲液的方法，其包括以下步骤:
a)混合如本文所定义的一种或多种盐、如本文所定义的金属螯合剂和水；任选地
b)搅拌混合物(具体而言持续等于或大于30秒，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15分钟)；和任选地
c)将混合物孵育等于或大于5、10、15、20、25或30分钟。
[0052]本发明进一步提供制备用于测定铝盐中的内毒素的方法的解吸缓冲液的方法，其包括以下步骤:
a)混合盐、金属螯合剂和水；任选地
b)在37°C+/_1°C搅拌组合的混合物至孵育期(以溶解)；和任选地
c)添加酸或碱以固定pH
d)添加水以达到制备物的最终体积；任选地
e)在37°C+/_1°C 储存。
[0053]步骤a)和b)可以进行多于一次，提供制备如本文所定义的解吸缓冲液的方法，其中步骤b)和/或c)重复1次、2次或更多次。
[0054]提供制备如定义的解吸缓冲液的方法，其中水基本上无内毒素。
[0055]提供制备如定义的解吸缓冲液的方法，其中将步骤a)的水预热至约30°C至45°C、35°C至 40°C、36°C至 38°C或约 37°C (±1°C )。
[0056]提供制备如定义的解吸缓冲液的方法，其中将pH调节至7至9，特别是约pH 8。任何酸都可以用于调节该PH，同时不影响解吸缓冲液从铝盐解吸内毒素的能力。具体而言，HC1可用于在本文所述的解吸缓冲液的制备中调节pH。具体而言，当缓冲液在约30°C至45°C、35°C至40°C、36°C至38°C或约37°C (±1°C)时，调节pH。任何合适的碱或酸都可以用于调节该PH，同时不影响解吸缓冲液从铝盐解吸内毒素的能力。
[0057]提供制备如本文所定义的解吸缓冲液的方法，其进一步包括d)在约30°C至45°C、35°C至40°C、36°C至38°C或约37°C (±1°C )储存解吸缓冲液的步骤。
[0058]在每种情况下，发明人意欲