表示未显示红色条带：
[0079]
[0080] 采用上述方法对临床已经确诊的阳性血清和阴性血清进行检测，结果见表2 :
[0081] 表2实际样本的检测率
[0083] 尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的 条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利 要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。
【主权项】
1. 检测IgM抗体的胶体金试纸条，其特征在于，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体 特异性IgM抗体，所述胶体金试纸条包括在聚氯乙烯底板上依次贴附的样品垫、结合物垫、 硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合物垫为包覆有兔抗人IgM抗体-胶体金结合物的玻璃纤 维膜；所述硝酸纤维素膜依次包被有9条检测线和1条质控线，所述9条检测线分别为肺炎 支原体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病 毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原，所述质控 线为二抗。2. 根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维膜；优选 地，所述吸水垫为吸水纸。3. 根据权利要求1或2所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述检测线和质控线的各相 邻线的间隔为3~4_，优选为3mm;优选地，所述胶体金试纸条的宽度为3~5_，优选为 4mm〇4. 根据权利要求1至3中任一项所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品垫与结合 物垫之间重叠1~2mm，优选为1mm，所述结合物垫与硝酸纤维素膜之间重叠1~2mm，优选 为1mm，所述硝酸纤维素膜与吸水垫之间重叠1~2mm，优选为1mm。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的胶体金试纸条，其特征在于，选用的二抗为羊抗 兔IgG抗体。6. 权利要求1至5中任一项所述的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，该方法包括 以下步骤： (1) 处理兔抗人IgM抗体：取200μg兔抗人IgM抗体置于透析袋中对5mMTris-HCl进 行透析24h，期间每隔2h换一次水；透析完成后，将抗原取出置于离心管中，加入三蒸水至 2mL，离心后弃去沉淀杂质，得到经处理的兔抗人IgM抗体； (2) 采用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金溶液：向烧杯中加入1000mL三蒸水，然后 加入10mL的1质量％的柠檬酸钠溶液，加热至沸腾后，再加入15mL1质量％的氯金酸溶 液，煮沸15min后至冷却，置于4°C保存，得到胶体金溶液，其中金颗粒直径约为30~40nm; 优选地，该步骤中使用的玻璃仪器事先用洗液过夜浸泡，然后冲洗干净； (3) 制备结合物垫：取步骤（2)制备的胶体金溶液20mL置于烧杯中，加入150yL0. 1M 的1(20)3溶液调节溶液的pH至7. 0,搅拌均匀，然后加入步骤（1)的经处理的兔抗人IgM抗 体，搅拌20min，然后加入2mL10质量％的牛血清白蛋白溶液，进行离心，离心时间40Min，转 速为lOOOOrpm，然后弃去上清液，再加入1质量％的牛血清白蛋白的溶液继续离心，弃去上 清液，对沉淀物进行恢复，恢复液的成分为质量％的牛血清白蛋白，0. 5质量％的蔗糖， 〇. 5质量％的酪蛋白钠，将其涂覆在200平方厘米大小的玻璃纤维膜上面，-45°C冷冻后，作 为结合物垫冻干备用；优选地，所述结合物垫在冻干后在室温下避光保存备用； (4) 组装试纸：将样品垫、步骤（3)制备的结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫顺次彼此 邻接地贴附在聚氯乙烯底板上，得到组装试纸； (5) 包被硝酸纤维素膜：使用划膜仪将肺炎支原体重组抗原溶液、肺炎衣原体重组抗 原溶液、甲型流感病毒抗原溶液、乙型流感病毒抗原溶液、副流感病毒抗原溶液、嗜肺军团 菌抗原溶液、Q热立克次体抗原溶液、呼吸道合胞病毒抗原溶液、腺病毒抗原溶液和二抗溶 液分别包被在步骤（4)的组装试纸的硝酸纤维素膜上作为9条检测线和1条质控线； (6)将步骤（5)处理后的组装试纸切割为宽度3~5mm，优选4mm的试纸条，即得到所 述胶体金试纸条。7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在步骤（5)中，所述肺炎支原体重组 抗原的溶液、肺炎衣原体重组抗原溶液、甲型流感病毒抗原溶液、乙型流感病毒抗原溶液、 副流感病毒抗原溶液、嗜肺军团菌抗原溶液、Q热立克次体抗原溶液、呼吸道合胞病毒抗原 溶液和腺病毒抗原溶液的浓度均为〇. 5mg/mL，所述二抗溶液的浓度为0. 3mg/mL;优选地， 所述划膜仪的设定参数为：所述检测线和质控线的各相邻线的间隔为3~4mm，优选为3mm; 划线浓度均为1μL/cm;更优选地，所述划膜仪为三维平面划膜仪。8. 检测IgM抗体的胶体金试纸卡，其特征在于，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体 特异性IgM抗体，所述胶体金试纸卡包括壳体和位于所述壳体中的权利要求1~5中任一 项所述的胶体金试纸条或按照权利要求6或7所述的方法制备的胶体金试纸条，所述壳体 上设置有加样孔和显色观察窗，所述加样孔对准所述样品垫的位置，所述显色观察窗对准 所述包被有9条检测线和1条质控线的硝酸纤维素膜的位置。9. 检测IgM抗体的胶体金试剂盒，其特征在于，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体 特异性IgM抗体，所述胶体金试剂盒包括铝箱袋和密封在所述铝箱袋中的干燥剂、滴管以 及权利要求1~5中任一项所述的胶体金试纸条或按照权利要求6或7所述的方法制备的 胶体金试纸条或权利要求8所述胶体金试纸卡。10. 使用权利要求1~5中任一项所述的胶体金试纸条或按照权利要求6或7所述的 方法制备的胶体金试纸条或权利要求8所述胶体金试纸卡或权利要求9所述的胶体金试剂 盒进行检测的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： (1) 收集待测样品：待测样品为全血或血清；其中，当血清存在浑浊时，对其进行高速 离心并去除浑浊的杂质； (2) 将胶体金试纸条或胶体金试纸卡平放在检测台面上，将步骤（1)的血清10倍稀释 后滴加在样品垫上，在10~20分钟内，优选10~15分钟内，进一步优选在15分钟时观察 检测线和质控线的显色结果；20分钟后的显色结果和/或质控线未显示红色条带，视为检 测结果无效，需重新检测； (3) 根据下表判断待测样品中九项呼吸道感染病原体的特异性IgM抗体的情况，其中 " + "表示显示红色条带，表示未显示红色条带：
【专利摘要】本发明提供一种检测IgM抗体的胶体金试纸条，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，其包括在聚氯乙烯底板上依次贴附的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合物垫为包覆有兔抗人IgM抗体-胶体金结合物的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜依次包被有9条检测线和1条质控线，所述9条检测线分别为肺炎支原体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原，质控线为二抗。还提供了包括该胶体金试纸条的胶体金试纸卡及胶体金试剂盒，及其制备方法和使用该胶体金试纸条、试纸卡或试剂盒进行检测的方法。
【IPC分类】G01N33/68, G01N33/558
【公开号】CN105259345
【申请号】CN201510801825
【发明人】蒋兴宇, 曹丰晶, 张伟
【申请人】国家纳米科学中心
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月19日