头孢孟多酯钠中甲酸的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及甲酸的检测方法，具体涉及头孢孟多酯钠中甲酸的检测方法。
【背景技术】
[0002] 头孢孟多酯钠，又名头孢羟唑；第二代头孢菌素类抗生素。头孢孟多酯钠进入体 内迅速水解为头孢孟多，起到杀菌作用。作用机制为与细菌细胞膜上的青霉素结合蛋白 (PBPs)结合，使转肽酶酰化，抑制细菌中隔和细胞壁的合成，影响细胞壁粘肽成分的交叉连 结，使细胞分裂和生长受到抑制，细菌形态变长，最后溶解和死亡。
[0003] 头孢孟多酯钠分解成游离头孢孟多时，会伴随甲酸的产生。而甲酸属于第三类试 剂，根据ICH Q3c指导原则，第三类试剂残留限度为0. 5%。
[0004] 现在施行的中国药典关于头孢孟多酯钠质量标准中并没对甲酸进行控制，也没有 相关的检验方法。
[0005] 目前甲酸的检测方法主要采用气相色谱检测法。但由于气相色谱法往往在高温条 件下进行，而头孢孟多酯钠在溶液状态下极其不稳定，会解离出甲酸，影响准确性，高温下 解离更为剧烈。因此气相色谱法不适用于头孢孟多酯钠中甲酸残留量的检测。而液相色谱 法的检测条件较为温和，且甲酸在紫外下有末端吸收，相对更适用于甲酸的检测方法。
[0006] 甲酸为有机酸，在水系流动相中极易解离而不被非极性键合相吸附，有机流动相 可以有效抑制甲酸解离，但由于甲酸以及常用的有机流动相甲醇、乙腈等均有末端吸收，因 而流动相中不宜含有有机相成分。现有液相色谱法中检测甲酸的流动相多为含有有机相 (如甲醇、乙腈等）的有机流动相。
[0007] 现有技术中也有采用磷酸氢盐缓冲液作为流动相检测甲酸的报道（如HPLC测定 塞克硝唑中甲酸的含量，林道明，符兆理，梁国栋等.HPLC测定塞克硝唑中甲酸的含量 [C]. //2006第六届中国药学会学术年会论文集.2006.;高效液相色谱法同时测定饲料添 加剂中6种有机酸含量，赵艳，张凤枰，杨发树等.高效液相色谱法同时测定饲料添加剂 中6种有机酸含量[J].中国粮油学报，2015, 30(2) : 127-130.;高效液相色谱法测定尿中 的甲酸和乙酸，冯斌，邵华，程学美等.高效液相色谱法测定尿中的甲酸和乙酸[J].中国卫 生检验杂志，2006, 16 (2) : 207-208)，但是，磷酸氢盐属于大极性物质，以离子形式存在，而 HPLC实验经常使用有机溶剂极性偏小，当磷酸氢盐冲洗不彻底的时候，下一次实验一旦用 到高浓度有机溶剂时，残留的磷酸氢盐因无法溶于有机溶剂而结晶析出，容易导致色谱系 统堵塞等问题，对色谱系统产生不利影响。
【发明内容】
[0008] 本发明要解决的技术问题是提供一种头孢孟多酯钠中甲酸的检测方法。该方法可 以有效抑制甲酸解离，并很好地改善甲酸的保留时间和分离度。
[0009] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0010] 头孢孟多酯钠中甲酸的检测方法，具体是采用液相色谱法进行检测，检测时所用 的流动相为体积浓度为0. 02~0.1 %的磷酸水溶液。
[0011] 上述检测方法中，其它的色谱条件如色谱柱、检测波长、流速、柱温等色谱条件可 以与现有技术相同。但采用下述限定条件的色谱条件时可以更好地抑制甲酸解离和改善甲 酸的保留时间和分离度，具体如下：采用C18色谱柱，检测波长为205~215nm，流动相的洗 脱流速为〇. 9~I. lml/min。进一步优选流动相为体积浓度为0. 02~0. 08%的磷酸水溶 液，更优选流动相为体积浓度为0. 02~0. 05%的磷酸水溶液。色谱柱的柱温则优选为25~ 35°C，更优选为30°C。
[0012] 上述检测方法中，采用液相色谱法进行检测时最佳的色谱条件为：
[0013] 色谱柱：C18 ;
[0014] 流动相：体积浓度为0. 02 %的磷酸水溶液；
[0015] 检测波长：2IOnm;
[0016] 流速：1.0 ml/min。
[0017] 当采用上述最佳色谱条件对头孢孟多酯钠中的甲酸进行检测时，甲酸保留时间为 3. 2~3. 5min，头孢孟多酯钠的保留时间为12. O~14. 5min(是破坏了头孢孟多酯钠以后 的保留时间）。甲酸与前后相邻杂质峰的分离度分别为3. 68和1. 78。
[0018] 申请人通过采用体积浓度为0. 02~0. 1 %的磷酸水溶液作为液相色谱法检测头 孢孟多酯钠中甲酸的流动相，不仅可以有效抑制甲酸解离，还能很好地改善甲酸的保留时 间和分离度，使甲酸与前后相邻杂质峰的分离度分别为3. 68和1. 78 ;也不会造成色谱柱的 堵塞。此外，本发明所述方法准确度和精密度高，稳定性好，易于在产业化中使用。
【附图说明】
[0019] 图1为空白溶剂的色谱图，横坐标为时间（min);
[0020] 图2为甲酸定位色谱图，横坐标为时间（min);
[0021] 图3为标准头孢孟多酯钠产品的局部放大色谱图，横坐标为时间（min);
[0022] 图4为按本发明实施例1所述方法经过60°C水浴破坏后的头孢孟多酯钠色谱图， 横坐标为时间（min);
[0023] 图5为按对比例1所述方法经过60°C水浴破坏后的头孢孟多酯钠色谱图，横坐标 为时间（min);
[0024] 图6为以甲酸浓度为横座标、对应峰面积为纵座标制作的标准曲线；
[0025] 图7为标准头孢孟多酯钠产品的色谱图，横坐标为时间（min)。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述，以更好地理解本发明的内容，但 本发明并不限于以下实施例。
[0027] 实施例1
[0028] 1、使用的仪器：安捷伦1260型高效液相色谱仪（安捷伦公司），DAD G4212B检测 器（安捷伦公司）。
[0029] 2、色谱条件：
[0030] 色谱柱：Thermo Hypersil Gold aQ 4. 6*250mm，5 μ m ;
[0031] 流动相：体积浓度为0. 02 %的磷酸水溶液；
[0032] 检测波长：2IOnm ;
[0033] 流速：1.0 ml/min ;
[0034] 柱温：30 Γ。
[0035] 3、试样：
[0036] 3. 1)甲酸溶液：
（即取甲酸0· 1034g (质 量分数为93. 38% )加水定容至100ml，之后从中再取Iml加水定容至100mL)。
[0037] 3. 2)头孢孟多酯钠溶液：
（即取头孢孟多酯钠成品（本 申请人生产）1.0 lOlg加水定容至IOml)。
[0038] 3. 3)将上述3. 2)所述头孢孟多酯钠溶液置于60°C水浴中保温破坏30min，取出冷 却，得到破坏后的头孢孟多酯钠溶液。
[0039] 分别进样空白试剂、甲酸溶液、头孢孟多酯钠溶液以及60°C水浴破坏后的头孢孟 多酯钠溶液各20 μ 1进行检测分析，结果如下：
[0040] 空白试剂（即体积浓度为0. 02%的磷酸水溶液）的色谱图如图1所示。
[0041] 甲酸溶液的定位色谱图如图2所示，其中，甲酸的保留时间为3. 300min)。已经核 对
[0042] 头孢孟多酯钠溶液的色谱图如图7所示，其局部放大图如图3所示，其中头孢孟多 酯钠的保留时间为14. 223min。
[0043] 破坏后的头孢孟多酯钠溶液中，甲酸的保留时间为3. 300min，头孢孟多酯钠的保 留时间为14. 052min，如图4所示。甲酸与前后相邻杂质峰的分离度分别为3. 68、1. 78,符 合分离度R彡1. 5的要求。
[0044] 对比例
[0045] 重复实施例1，只是将色谱条件中的流动相修改为：流动相比例：0. 02% (v/v)磷 酸水溶液：乙腈90:10 (体积比）。
[0046] 结果：色谱图如图5所示，当采用0.02% (v/v)磷酸水溶液：乙腈90:10(体积比） 作为流动相以后，多种干扰峰扎堆出现，极度干扰甲酸检测。
[0047] 实施例2 :本发明所述方法的方法学验证
[0048] 1、检测限、定量限、线性实验
[0049] 检测限：12. Ing
[0050] 定量限：43. 56ng
[0051] 线性范围：称取甲酸试液（质量分数为93. 38 % )0. 1169g，折算成甲酸为 0. 1090g，用水定容至100ml，摇匀作为贮备液。
[0052] 分别移取甲酸贝士备液 0· 2ml、0. 5ml、1.0 ml、I. 5ml、I. 8ml、2. Oml，定容至 10.0 ml ; 各进样20ul检测，以横座标为甲酸浓度、纵座标为对应峰面积，制作标准曲线，如图6所示。
[0053] 回归方程：Area = I. 1433*Amt+2· 2狀4
[0054] 相关系数 R~2 = 0· 9994。
[0055] 实验表明，在甲酸浓度为21.8 μ g/ml~218. O μ g/ml范围内，线性良好。
[0056] 2、进样精密度：
[0057] 取甲酸试样
（即取甲酸〇· 1142g(质量分