洗脱液制备的溶液作为供试 品溶液。另取天麻素对照品，加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色 谱法（中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10 μ 1，对照品溶液1 μ 1点 于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（8 :1 :3 :0. 1)为展开剂，展 开15cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0037] (2)大黄的鉴别：采用大黄对照药材和大黄素为鉴别对象，对三批样品进行检验， 斑点显色清晰，得到较好的分离效果，说明此法可行。实验结果见附图2。具体方法如下：
[0038] 取【鉴别】（1)项下95%乙醇洗脱液制备的溶液作为供试品溶液。另取大黄对照 药材〇. lg，加甲醇20ml超声15分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水IOml使溶解，再加 盐酸lml，置水浴中加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚 液，蒸干，残渣加水2ml溶解，同供试品制备方法相同收集95 %乙醇洗脱液，制成对照药材 溶液。另取大黄素对照品，加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法（中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液4 μ 1、对照药材溶液8 μ 1、对 照品溶液2 μ 1分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30-60°C )-甲酸乙酯-甲酸（15 : 5:1)上层液为展开剂，展开8cm，取出，瞭干，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点。在与对照品色谱相应 的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。
[0039] (3)丹参的鉴别：对丹参中的有效成分原儿茶醛进行鉴别，对三批样品进行检验， 斑点显色清晰，得到较好的分离效果，说明此法可行。实验结果见附图3。具体方法如下：
[0040] 取【鉴别】（1)项下30%乙醇洗脱液制备的溶液作为供试品溶液。另取原儿茶醛 对照品，加乙醇制成每1ml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典 2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液6 μ 1，对照品溶液4 μ 1分别点于同一硅胶 G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8:1 :0.8)为展开剂，展开8cm，取出，晾干，喷以1% 三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0041] (4)三七的鉴别：对三七中的有效成分人参皂苷RgU三七皂苷Rl进行鉴别，对三 批样品进行检验，斑点显色清晰，得到较好的分离效果，说明此法可行。实验结果见附图4。 具体方法如下：
[0042] 取本品5g，研细，加甲醇30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至2ml，通过 硅胶柱（层析用硅胶100-200目，内径lcm，5g)，用三氯甲烷-甲醇-水（65 :35 :10) 10°C以 下放置的下层溶液洗脱，初洗脱液3ml弃去，收集续洗脱液10ml，蒸干，残渣加乙醇Iml溶 解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rgl、三七皂苷Rl对照品，加乙醇制成每1ml各含Img的 混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取 供试品溶液5 μ 1，对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水 (65 :35 :10) 10°C以下放置的下层溶液为展开剂，预平衡20分钟，展开16cm，取出，晾干，喷 以10%硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点；置紫外灯（365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。
[0043] 含量测定
[0044] 熊胆粉为本方的贵细药材，对通络化痰胶囊中熊胆粉的含量测定方法，使用高效 液相法对熊胆粉中有效成分牛磺熊去氧胆酸进行测定，对该含量测定方法学进行验证。结 果表明本方法具有分离效果好、灵敏、快速、准确等优点。可以作为控制产品质量的重要手 段。
[0045] (1)仪器与试药
[0046] 仪器：LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-20A检测器，SIL-20全自动进样器
[0047] 试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
[0048] 对照品：牛磺熊去氧胆酸钠为中国药品生物制品检定所提供（110816-200507供 含量测定用）。
[0049] 牛磺熊去氧胆酸钠与牛磺熊去氧胆酸换算关系：lmg牛磺熊去氧胆酸钠相当于牛 磺熊去氧胆酸〇. 96mg。
[0050] 样品：通络化痰胶囊由山东沃华医药科技股份有限公司有限公司提供（批号： 20090701，20090702, 20090703,091101，091102,091103)，由中国中医研究院试验药厂提供 通络化痰胶囊（批号：090301)。
[0051] (2)色谱条件：
[0052] 十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-0· 03mol/L磷酸二氢钠 （pH = 3. 5) (26 :74) 为流动相检测波长为205nm，流速lml/min，柱温：35°C。理论板数按牛磺熊去氧胆酸钠峰计 算均应不低于2000。
[0053] (3)线性关系的考察：
[0054] 精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥至恒重的牛磺熊去氧胆酸钠22. 20mg， 置25ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇勾，即得。精密吸取牛磺熊去氧胆酸钠对 照品溶液0. 5,1. 0, 2. 0,4. 0,6. 0,8. 0ml，置IOml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。吸取上述 溶液各5 μ 1，注入色谱仪，测定其峰面积，绘制标准曲线，结果见表10。
[0055] 表10.牛磺熊去氧胆酸钠对照品测定结果
[0058] 回归方程 Y = 190351. 499X-1119. 9887r = 0· 9999。结果表明进样量在 0. 22-3. 55ug范围内线性关系良好。
[0059] 峰面积一浓度标准曲线如图5所示。
[0060] (4)供试品溶液的制备
[0061] I .提取方法的考察：取本品内容物约5g，研细，取约0. 5g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，用不同的提取方法提取30分钟，取出，放冷，再称定重 量，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 摇匀，以微孔滤膜滤过，测其含量。结果见表11。
[0062] 表11不同提取方法的比较（η = 3)
[0064] 以上结果表明：超声处理（功率500W，频率1800Hz)与回流提取牛磺熊去氧胆酸 钠含量相差不大，因超声处理方法较为简单，故提取方法确定为超声处理。
[0065] II .提取时间的考察：取本品内容物约5g，研细，取约0. 5g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，分别超声（功率500W，频率1800Hz)处理20、30、40分 钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，滤过，精密量取续滤液2ml，置5ml量瓶中，加 甲醇稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜滤过，测其含量。结果见表12。
[0066] 表12.不同超声时间对样品中牛磺熊去氧胆酸钠含量测定的影响（η = 3)
[0068] 以上结果表明：超声处理20分钟以上，含量基本保持不变，为确保提取完全，故确 定超声处理时间为30分钟。
[0069] (5)精密度实验吸取对照品溶液（0. 7104mg/ml)，重复进样5次，各5 μ 1，计算峰面 积积分值的相对偏差，结果见表13。
[0070] 表13精密度试验结果
[0072] 结果表明：精密度良好。
[0073] (6)重现性实验取同一批号（20090702)的样品5份，分别按拟订方法制备、测定， 结果牛磺熊去氧胆酸含量见表14。
[0074] 表14重现性试验结果
[0076] 结果表明：试验方法的重现性良好。
[0077] (7)稳定性试验：取供试品溶液（批号：20090701)分别于0小时、1小时、2小时、 4小时、6小时、8小时，进样，结果见表15。
[0078] 表15稳定性试验结果
[0080] 结果表明：供试品溶液在8小时内稳定性良好。
[0081] (8)回收率实验：（采用加样回收法）取已知含量的通络化痰胶囊（批号： 20090703含量12. 575mg/g)内容物5g，研细，取约0. 25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入 牛磺熊去氧胆酸钠对照品溶液（3. 243mg/ml) lml，照样品测定方法测定，计算回收率，结果 见表16。
[0082] 表16回收率试验结果
[0084] 备注：lmg牛磺熊去氧胆酸钠相当于牛磺去氧胆酸0· 96mg
[0085] 结果表明：平均回收率为97. 56%，RSD为2. 01%，加样回收良好。
[0086] (9)样品测定：取三批样品，按标准中方法测定，牛磺熊去氧胆酸含量结果见表 17。
[0087] 表17样品中熊果酸含量测定结果
[0089] 根据上述实验结果，通络化痰胶囊中熊胆粉的含量测定方法可行，本品每粒含牛 磺熊去氧胆酸计，应不低于4. 26mg。
[0090] 本发明对通络化痰胶囊的质量检测方法包括对中药原料的鉴别和有效成分的含 量测定，结果显示通络化痰胶囊质量检测方法中的各项目操作简单、重现性好、稳定性好、 检测效果准确度高，有效的控制通络化痰胶囊的质量。同时，填补了该产品定量控制的空 白，使得对该产品能够进行更有效的质量分析，更全面反映产品的质量状况，保证该产品 的质量稳定性。
【附图说明】
[0091] 图1通络化痰胶囊天麻的TLC鉴别照片
[0092] 图中：
[0093] 1、5·通络化痰胶囊供试品（批号：140901沃华医药生产）
[0094] 2.通络化痰胶囊供试品（批号：140902沃华医药生产）
[0095] 3.通络化痰胶囊供试品（批号：140903沃华医药生产）
[0096] 4.天麻素对照品
[0097] 图2通络化痰胶囊大黄的TL