一种西罗莫司的高效液相色谱分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体而言，涉及一种西罗莫司的高效液相色谱分 析方法。
【背景技术】
[0002] 西罗莫司（sirolimus)又称雷帕霉素（rapamycin)，是一种大环内酯抗生素类免 疫抑制剂。1977年西罗莫司被发现具有免疫抑制作用，1989年开始把西罗莫司作为治疗器 官移植排斥反应的新药进行试用。经过III期临床试验，1999年10月惠氏制药研制的西罗莫 司口服溶液在美国首次上市，FDA允许它作为一种安全性较高的药物应用于临床防治肾移 植排斥反应。
[0003] 为了保证西罗莫司后续的研发和生产质量，需要对原料药及其制剂的质量进行控 制。因此，研究获得一种西罗莫司的有关物质杂质检查和含量测定的检测方法，这对医药生 产企业来说显得尤为迫切。在现有技术中，通常采用等度解决含量问题，采用梯度解决杂质 问题，但因梯度的急剧变化常出现实验结果稳定性较差，数据偏差较大。
[0004] 有鉴于此，有必要对现有技术中的西罗莫司的含量及其杂质含量的分析方法予以 改进，以解决上述问题。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种西罗莫司的高效液相色谱分析方法，它能够同时准确 测定出西罗莫司的含量和杂质。
[0006] 为实现上述发明目的，本发明提供了一种西罗莫司的高效液相色谱分析方法，
[0007] 将含有西罗莫司的样品溶液通入色谱柱中，采用反向液相色谱外标百分比法定量 分析，所述液相色谱条件为：
[0008] 色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料，规格4. 6mm X 150mm，3 μ m ;
[0009] 流动相为：体积配比为18 :82~22:78的流动相A与流动相B的混合溶液，等度洗 脱，所述流动相A中磷酸、庚烷磺酸钠、水的质量配比为0. 1:0. 01:1，所述流动相B中甲醇与 乙腈的体积配比为15:85;
[0010] 检测波长为270nm~280nm ;
[0011] 流速为 1. 5 ~2. Oml/min ;
[0012] 柱温 25 ~35 °C;
[0013] 进样体积15~30 μ L。
[0014] 在一些实施方式中，样品溶液由含有西罗莫司的制剂与稀释剂组成。
[0015] 在一些实施方式中，稀释剂由0. 1 %磷酸溶液与乙腈组成，所述0. 1 %磷酸溶液与 乙腈的体积配比为50:65~50:75。
[0016] 在一些实施方式中，制剂包括西罗莫司原料、西罗莫司片剂、西罗莫司胶囊或者西 罗莫司口服溶液。
[0017] 在一些实施方式中，稀释剂中0.1 %磷酸溶液与乙腈的体积配比为50:70。
[0018] 在一些实施方式中，制剂为西罗莫司片剂。
[0019] 在一些实施方式中，检测波长为277nm，流速为1.8ml/min，柱温30°C，进样体积 20 μ L0
[0020] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明所提供的西罗莫司的高效液相分 析方法具有实用可靠，稳定性较好，数据重现性强的优点，并且能够从西罗莫司中有效分离 出3个关键杂质，即杂质RRTL 07、杂质C与杂质RRTL 14。
【附图说明】
[0021] 图1是实施例一中的西罗莫司原料的高效液相色谱图；
[0022] 图2是实施例二中的西罗莫司制剂的高效液相色谱图；
[0023] 图3是实施例一中的西罗莫司空白辅料的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合附图所示的各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些 实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、 或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。
[0025] 实施例一:
[0026] 西罗莫司原料含量和杂质的测定。
[0027] 高效液相色谱条件：
[0028] 色谱柱：Zorbax Eclipse plus C18,规格为 4. 6mmX 150mm，3 μ m ;
[0029] 流动相配比为：流动相A :流动相B = 20:80 (体积配比），流动相A由磷酸：庚烷 磺酸钠：水=〇. 1:0. 01:1(质量配比）组成，流动相B中由甲醇：乙腈=15:85(体积配 比）组成；
[0030] 检测波长为277nm ;
[0031] 流速为 I. 5ml/min ;
[0032] 柱温 30 Γ;
[0033] 进样体积20 μ L ;
[0034] 稀释剂：0. 1 %磷酸溶液：乙腈=50:70 (体积配比）。
[0035] 实验步骤：
[0036] 溶液配制：
[0037] 取西罗莫司原料约25mg，精密称定，置于25ml容量瓶中，加适量稀释剂溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液lml，置100mL量瓶中，加稀释剂稀 释至刻度，摇匀，作为杂质对照溶液；精密量取西罗莫司对照品l〇mg，置IOml量瓶中，加稀 释剂至刻度，摇匀，作为含量对照品溶液。精密量取供试品溶液、杂质对照溶液和含量对照 品溶液各20 μ 1注入液相色谱仪，记录液相色谱图，如图1所示，按照不加校正因子的自身 对照法计算其杂质，按照外标法计算其含量。
[0038] 表1 :系统适用性测试结果
[0039]
[0040] 根据表1可以看出，西罗莫司原料中各杂质可以得到有效分离，分离度均大于 1. 8,，峰形良好，峰纯度良好，理论塔板数大于3000,拖尾因子小于1. 5,符合标准。
[0041] 西罗莫司原料药，含量结果：为97. 4%;杂质结果：杂质RRTL 07的含量为0.5%、 杂质C的含量为1. 2%、杂质RRTL 14的含量为0. 3%。西罗莫司中关键的3个杂质均能准 确测定出。同时对西罗莫司原料药进行破坏试验，降解杂质也得到了有效的分离，分离度大 于1.8,主峰纯度较好，本发明可以有效的评价西罗莫司原料药的质量。
[0042] 本发明提供的分析方法，根据中国药典2010版，完成方法学验证，包括系统适性 试验、破坏性试验、影响因素试验、回收率试验、以及耐用性试验。经过这些验证，本发明提 供的分析方法实用可靠，稳定性较好。
[0043] 实施例二:
[0044] 西罗莫司片剂的含量和杂质的测定。
[0045] 高效液相色谱条件：
[0046] 色谱柱：岛津 Inertsil C18,规格为 4. 6mmX 150mm，3 μ m ;
[0047] 流动相配比为：流动相A :流动相B = 18:82 (体积配比），流动相A由磷酸：庚烷 磺酸钠：水=〇· 1:0. 01:1(质量配比）组成，流动相B由甲醇：乙腈=15:85(体积配比） 组成；
[0048] 检测波长为277nm ;
[0049] 流速为 I. 6ml/min ;
[0050] 柱温 25 Γ;
[0051] 进样体积20 μ L。
[0052] 稀释剂：0. 1 %磷酸溶液：乙腈=50:75 (体积配比）。
[0053] 实验步骤：
[0054] 溶液配制：
[0055] 取西罗莫司片剂适量（约相当于西罗莫司25mg)，精密称定，置于25ml容量瓶中， 加适量稀释剂稀释至刻度，55°C超声30分钟、3000RPM离心15分钟、0. 45微米滤膜过滤， 续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液lml，置100mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度 作为杂质对照溶液；取片剂空白辅料适量，置于25ml容量瓶中，加适量稀释剂稀释至刻度， 55°C超声30分钟、3000RPM离心15分钟、0. 45微米滤膜过滤，续滤液作为空白辅料溶液； 精密量取西罗莫司对照品l〇mg，置IOml量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，作为含量对照品溶 液。精密量取供试品溶液、杂质对照溶液、空白辅料和含量对照品溶液各20 μ 1注入液相色 谱仪，记录液相色谱图，如图2所示，按照不加校正因子的自身对照法计算其杂质，按照外 标法计算其含量。
[0056] 表2 :系统适用性测试结果
[0058] 根据表2可以看出，空白辅料不干扰西罗莫司的含量检测，也不干扰其杂质检测。 西罗莫司片剂中各杂质可以得到有效分离，分离度均大于1.8,，峰形良好，峰纯度良好，理 论塔板数大于3000,拖尾因子小于1. 5,符合标准。
[0059] 西罗莫司片剂，含量结果：相当于标示量的99. 2% ;杂质结果：杂质RRTL 07的含 量为0. 04%、杂质C的含量为2. 5%、杂质RRTL 14的含量为0. 3%。西罗莫司片剂中关键 的3个杂质均能准确测定出。同时对西罗莫司片剂进行破坏试验，降解杂质也得到了有效 的分离，分离度大于1. 8,主峰纯度较好，本发明可以有效的评价西罗莫司片剂的质量。
[0060] 本发明提供的分析方法，根据中国药典