一种甾体生物碱含量的测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种甾体生物碱含量的测定方法，包括以下步骤：(1)生物碱的提取与制备；(2)称取步骤(1)中制备的样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用；(3)高效液相色谱分析测定峰面值(4)标准曲线的建立：高效液相色谱分析法测定各浓度对照品的吸光度，对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程；(5)甾体生物碱含量的测定：根据步骤(3)中测得的峰面值和步骤(4)中的回归方程y＝1185050.6095x-37397.6623计算出样品的甾体生物碱含量。本发明利用超声技术，溶剂使用量相对较少，降低成本，利用旋转蒸发器减压蒸馏溶剂，借助于真空泵降低系统内压力，降低液体的沸点，较低温度下得到生物碱浓缩液。
【专利说明】一种留体生物碱含量的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种留体生物碱含量的测定方法。
【背景技术】
[0002]传统提取生物碱的方法有煎煮法、浸溃法、回流法和渗漉法操作简单易行，能够提取较多的有效成分，但提取过程中存在着能耗大、有效成分损耗大、杂质较多、效率较低等问题。随着物理科学的发展，针对传统提取过程中存在的问题，一些新技术应用于生物碱提取工艺中，新技术的强化作用或流体在超临界状态下进行萃取，大大提高了提取效率，降低了过程能耗，因其显著优势而成为研究热点。孙志良等探索出提取白毛藤生物碱比较合适的方法:生物碱及其生物碱盐都能溶于甲醇或乙醇，但甲醇毒性很大，应采用95%乙醇回流提取，然后减压回收溶剂得生物碱粗品，将生物碱粗品溶于酸水，用亲脂性有机溶剂除去不溶于水的脂溶性杂质，再酸水碱化使生物碱游离，用氯仿萃取，回收氯仿得到脂溶性生物碱。剩下的碱性水母液需用极性较大的有机溶剂正丁醇萃取，回收正丁醇得到水溶性生物碱。
【发明内容】
[0003]针对现有技术的上述不足，本发明的目的是提供一种留体生物碱含量的测定方法，利用超声技术，溶剂使用量相对较少，降低成本，利用旋转蒸发器减压蒸馏溶剂，借助于真空泵降低系统内压力，降低液体的沸点，较低温度下得到生物碱浓缩液。
[0004]为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的:
[0005]一种留体生物碱含量的测定方法，包括以下步骤:
[0006](I)生物碱的提取与制备:将待测器官洗净37°C下烘干，并粉碎至40目，准确称取1.0g，置于超声波清洗器中用50ml95%乙醇水溶液超声提取30min，以同样的方法超声提取第二次，经过滤渣弃去，合并二次滤液，利用旋转蒸发器减压蒸馏浓缩，挥发回收乙醇，得浓缩液，浓缩液溶于稀酸溶液至PH值为3，过滤，滤液加氨水至pH值为10，过滤，得清夜，直冰箱中备用；
[0007](2)精密称取步骤(I)中制备的样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用；
[0008](3)高效液相色谱分析测定峰面值:所述的液相色谱条件如下:
[0009]色谱柱:Cosmosil5C18AR-1I(250X4.6mm);
[0010]流动相:乙腈一磷酸二氢钾(75:25)；
[0011]检测波长:205nm;流速:1.0mL/min ；
[0012]进样量IOyL,柱温:25°C ;
[0013](4)标准曲线的建立:精密吸取对照品0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mg用冰乙酸定容至5mL，在20°C静置一定的时间备用，以步骤(3)中的液相条件，高效液相色谱分析法测定各浓度对照品的吸光度，对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程:y =1185050.6095x-37397.6623，其中y为吸光度，x为样品含量，其中相关系数r = 0.9960，r为样品含量与吸光度二组数据间的相关性，与朗伯.比尔定律相符；
[0014](5)甾体生物碱含量的测定:根据步骤(3)中测得的峰面值和步骤(4)中的回归方程y = 1185050.6095χ-37397.6623，其中y为峰面值，x为样品碱含量，计算出样品的甾体生物碱含量。
[0015]本发明的有益效果如下:
[0016]本发明留体生物碱含量的测定方法，利用超声技术缩短提取时间、提高提取率，并且无需加热，提高了热敏性生物碱的提取率且对其生理活性基本没有影响，溶剂使用量相对较少，降低成本。利用旋转蒸发器减压蒸馏溶剂，借助于真空泵降低系统内压力，降低液体的沸点，较低温度下得到生物碱浓缩液。高效液相色谱分析法具有高、灵敏度高、分离速度快，适用范围广、重现性好、操作方便等优点。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
[0018]实施例1—6
[0019]本发明的留体生物碱含量的测定方法，包括以下步骤:
[0020](I)生物碱的提取与制备:将待测器官洗净37°C下烘干，并粉碎至40目，准确称取1.0g，置于超声波清洗器中用50ml95%乙醇水溶液超声提取30min，以同样的方法超声提取第二次，经过滤渣弃去，合并二次滤液，利用旋转蒸发器减压蒸馏浓缩，挥发回收乙醇，得浓缩液，浓缩液溶于稀酸溶液至PH值为3，过滤，滤液加氨水至pH值为10，过滤，得清夜，置冰箱中备用；此步骤(1)分别制备6组，编号为1-6 ；
[0021](2)精密称取步骤(1)中制备的6组样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用；
[0022](3)高效液相色谱分析测定6组样品的峰面值见表1:
[0023]表1
[0024]
【权利要求】
1.一种留体生物碱含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤: (1)生物碱的提取与制备:将待测器官洗净37°c下烘干，并粉碎至40目，准确称取1.0g，置于超声波清洗器中用50ml95%乙醇水溶液超声提取30min，以同样的方法超声提取第二次，经过滤渣弃去，合并二次滤液，利用旋转蒸发器减压蒸馏浓缩，挥发回收乙醇，得浓缩液，浓缩液溶于稀酸溶液至pH值为3，过滤，滤液加氨水至pH值为10，过滤，得清夜，置冰箱中备用； (2)精密称取步骤(1)中制备的样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用； (3)高效液相色谱分析测定峰面值:所述的液相色谱条件如下:
色谱柱:Cosmosil5C18AR-1I (250X4.6mm)； 流动相:乙腈一磷酸二氢钾(75:25)； 检测波长:205nm ;流速:1.0mL/min ； 进样量10 μ L，柱温:25°C ; (4)标准曲线的建立:精密吸取对照品0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mg用冰乙酸定容至5mL,在20°C静置一定的时间备用，以步骤(3)中的液相条件，高效液相色谱分析法测定各浓度对照品的吸光度，对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程:y =1185050.6095x-37397.6623，其中y为吸光度，x为样品含量，其中相关系数r = 0.9960，r为样品含量与吸光度二组数据间的相关性，与朗伯.比尔定律相符； (5)甾体生物碱含量的测定:根据步骤(3)中测得的峰面值和步骤(4)中的回归方程y=1185050.6095X-37397.6623，其中y为峰面值，x为样品碱含量，计算出样品的留体生物碱含量。
【文档编号】G01N30/02GK104020228SQ201410216741
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年5月21日 优先权日:2014年5月21日
【发明者】吕洪飞, 梁宗锁, 姜波, 丁先锋, 皮二旭, 祁哲晨, 熊杰, 李华磊 申请人:浙江理工大学