一种替格瑞洛原料中异构体杂质含量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学中的分析检测领域，具体涉及一种替格瑞洛原料中异构体杂质含 量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 本领域公知的，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素，如果药物中所含杂质 超过质量标准规定的限量要求，极有可能造成药物的外观性状、理化参数发生改变，甚至影 响药物的稳定性，使药物活性降低而毒副作用增加，严重危害药物的产品质量和患者的用 药安全；同时，药物中杂质的来源非常广泛，既可能来源于生产过程，也可能来源于贮藏过 程，其中，生产过程中的原料不纯是很重要的一个来源(参见:刘文英主编.《药物分析》第6 版，第三章:人民卫生出版社，2007年.）。
[0003] 化合物M3(即本发明式I所示化合物），是一种重要的药物原料，主要用于制备选择 性的二磷酸腺苷(ADP)受体拮抗剂：替格瑞洛（Ti eagre lor，商品名：BRILINTA，化学名为 (IS，2S，3R, 5S)-3_[7_[ [ (1R, 2S)_2_(3，4_二氣苯基)环丙基]氛基]_5_丙硫基-3H-1，2，3_ 三唑基[4，5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)-1，2-环戊烷二醇（分子式:C2 3H28F2N6〇4S)，以 化合物M3为原料制备替格瑞洛的合成路线如下：
[0004]
[0005] 替格瑞洛产品中存在的多种异构体杂质(例如，（lR，2R，3S，5R)-3-[7-{[(lR，2S)_ 2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基}-5-丙硫基-3!1-1，2,3-三唑[4,5-(1]嘧啶-3-基]-5-(2-羟 乙氧基)环戊烧 _1，2-二醇、（1R,2R,3S,5R)-3_[7_{ [ (IS,2R)_2_(3，4_二氣苯基)环丙基]氨 基}_5_丙硫基-3H-1，2,3-三唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基）环戊烷-1,2-二醇、 (IS，2S，3R, 5S)-3_[7_{ [ (IS, 2R)_2_(3，4_二氣苯基)环丙基]氛基}_5_丙硫基-3H-1，2，3_ 三唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)环戊烷-1，2-二醇等；参见：替卡格雷杂质列表， http: //wenku. bai du. com/view/69885bd8f d0a79563c 1 e72aa. html ?re = vi ew，公开时间为 2014年10月17日），很可能就是由于生产过程中的原料(化合物M3)不纯所造成的。
[0006] 然而，目前未见有替格瑞洛原料(化合物M3)中异构体杂质含量的相关报道，自然 也就无法从原料开始控制替格瑞洛中异构体杂质的引入。
[0007] 为了进一步保证替格瑞洛的产品质量和患者的用药安全，有必要对替格瑞洛原料 的产品质量进行监控，特别是，需要发明一种新方法，对替格瑞洛原料(化合物M3)中的异构 体含量进行检测。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于提供一种替格瑞洛原料中异构体杂质含量的检测方法，具体为 提供一种式I所示化合物中异构体杂质含量的检测方法。
[0009] 本发明提供的一种式I所示化合物中异构体杂质含量的检测方法，它包括以下步 骤：
[0010]
[0011] a、取所不化甘物的丼构体，制爸对照品浴淞；
[0012] b、取待检的式I所示化合物，制备供试品溶液；
[0013] c、采用高效液相色谱方法分别对对照品溶液、供试品溶液进行检测，所述高效液 相色谱方法的检测条件为：
[0014] 色谱柱：固定相为直链淀粉-三(3，5-二甲苯基氨基甲酸酯）；
[0015] 流动相:正己烷-乙醇-异丙醇，正己烷、乙醇、异丙醇的体积比为90% :5% :5% ;
[0016] 检测波长：200nm ~300nm;
[0017] d、按外标法以峰面积计算，或者根据峰面积与浓度之间的标准曲线计算，得到式I 所示化合物中的异构体杂质含量。
[0018] 进一步的，所述的异构体杂质至少包括2-{((3aS，4R，6S，6aR))-6-[7-((lS，2R)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺基)-5-丙硫基-3H-[l，2,3]三氮唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-2,2-二甲 基-四氢-环戊并-1，3-二恶茂-4-氧基}乙醇、2-{((3 &5,41?，65,6&1〇)-6-[7-((11?，25)-2-(3，4-二氟苯基)环丙胺基）-5-丙硫基-3H-[ 1，2，3]三氮唑[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，2-二甲 基-四氢-环戊并-1，3-二恶茂-4-氧基}乙醇中的一种。
[0019] 进一步的，所述的异构体杂质同时包括2-{((3aS，4R，6S，6aR))-6-[7-((lS，2R)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺基)-5-丙硫基-3H-[l，2,3]三氮唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-2,2-二甲 基-四氢-环戊并-1，3-二恶茂-4-氧基}乙醇和2-{((3 &3,41?，63,6&1〇)-6-[7-((11?，23)-2-(3，4-二氟苯基)环丙胺基）-5-丙硫基-3H-[ 1，2，3]三氮唑[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，2-二甲 基-四氢-环戊并-1，3-二恶茂-4-氧基}乙醇。
[0020] 进一步的，步骤a中，制备对照品溶液的溶剂为步骤c中的流动相;步骤b中，制备供 试品溶液的溶剂为步骤c中的流动相。
[0021] 进一步的，步骤c中，所述的色谱柱为CHIRALPA丨<K)AD-H。
[0022] 进一步的，步骤C中，色谱柱的长度为250mm，内径为4.6mm，填料的粒径为5μηι。
[0023]进一步的，步骤c中，色谱柱的柱温为25°C~40°C;优选的，色谱柱的柱温为30°C。
[0024] 进一步的，步骤C中，所述流动相的流速为0.9ml/min~1. lml/min;优选的，所述流 动相的流速为1 .Oml/min。
[0025]进一步的，步骤c中，所述的检测波长为200nm~300nm;优选的，所述的检测波长为 254nm〇
[0026] 进一步的，步骤c中，进样体积为10μ1~50μ1;优选的，进样体积为20μ1。
[0027] 本发明提供了一种式I所示化合物中异构体杂质含量的检测方法，式I所示化合物 色谱峰与异构体色谱峰之间的分离度高;而且，操作简便，容易控制，检测成本低，并具有良 好的线性关系、专属性、精密度、稳定性、灵敏度和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可 靠，为监控式I所示化合物的产品质量提供了一种行之有效的检测方法，并进一步保证了替 格瑞洛的产品质量和患者的用药安全。
[0028] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0029]以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0030]图1为本发明检测条件下杂质Α对照品溶液的HPLC图。
[0031]图2为本发明检测条件下杂质B对照品溶液的HPLC图。
[0032]图3为本发明检测条件下样品溶液的HPLC图。
[0033]图4为本发明检测条件下样品和杂质A、杂质B混合溶液的HPLC图。
[0034]图5为对比试验1色谱条件下杂质A对照品溶液的HPLC图。
[0035]图6为对比试验1色谱条件下杂质B对照品溶液的HPLC图。
[0036]图7为对比试验1色谱条件下样品溶液的HPLC图
[0037]图8为对比试验1色谱条件下样品和杂质A、杂质B混合溶液的HPLC图。
[0038]图9为对比试验2色谱条件下杂质A对照品溶液的HPLC图。
[0039]图10为对比试验2色谱条件下杂质B对照品溶液的HPLC图。
[0040]图11为对比试验2色谱条件下样品溶液的HPLC图
[00411图12为对比试验2色谱条件下样品和杂质A、杂质B混合溶液的HPLC图。
[0042]图13为对比试验3色谱条件下杂质A对照品溶液的HPLC图。
[0043]图14为对比试验3色谱条件下杂质B对照品溶液的HPLC图。
[0044] 图15为对比试验3色谱条件下样品溶液的HPLC图。
[0045] 图16为对比试验3色谱条件下样品和杂质的混合溶液HPLC图。
[0046] 图17为试验例1第1项下替格瑞洛的紫外光谱图。
[0047] 图18为试验例1第3项下杂质A的标准曲线图，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度。
[0048] 图19为试验例1第3项下杂质B的标准曲线图，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度。
【具体实施方式】
[0049] 本发明【具体实施方式】中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得；
[0050]例如，替格瑞洛原料(化合物M3,如式I所示）的批号为20140801;杂质A对照品的批 号为20140109,含量:99.3% ;杂质B对照品的批号为20140227,含量:98.4% ;均来源于成都 百裕科技制药有限公司。
[0051 ]杂质A为替格瑞洛原料(化合物M3，如式I所示）的异构体，其名称为2-{ ((3aS，4R， 63,6&1〇)-6-[7-((13,210-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺基)-5-丙硫基-3!1-[1，2,3]三氮唑[4， 5-d]嘧啶-3-基]-2,2-二甲基-四氢-环戊并-1，3-二恶茂-4-氧基}乙醇。
[0052]杂质B为替格瑞洛原料(化合物M3，如式I所示）的异构体，其名称为2_{ ((3aS，4R， 6S，6aR))-6-