测定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚残留量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种基于气相色谱一串联质谱仪测定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和 芝麻酚残留量的方法，属于食品添加剂理化指标检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 咪唑（分子结构式如下所示），即1，3-二氮唑，是一个五元杂环芳香性有机化合物， 化学式为C3H 4N2，分子量为68.08，CAS号为288-32-4，它也是一个生物碱，呈白色或浅黄色固 体结晶，易溶于水、乙醇、乙醚、氯仿、啦啶，微溶于苯，极微溶于石油醚，具有酸性，也具有碱 性。咪唑为平面五元环状化合物，它的两个氮原子间存在永久偶极，极性很强，偶极矩为 3.61D，并且分子间存在氢键缔合，导致了咪唑具有反常高的沸点（256°C)。分子中存在一个 6电子共辄大π键，故具有典型的芳香性。与氢以 〇键相连的氮原子提供一对电子，环内其余 四个原子各提供一个电子成键。毒理学数据表明该物质有毒，对小鼠经口 LD50为18.80mg/ kg，注射LD50为610mg/kg，其毒性及防护方法与乙二胺相似。此外，该物质对环境可能有危 害，对水体应给予特别注意。综合文献结果，一般说来，咪唑并不直接当作食品添加剂使用， 很大可能是作为副产物而被引入使用。
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[0004] -τ不厮甘〈刀、子结构式如下所示），又称2,4,6-三硝基-3,3-二甲基-5-叔丁基 苯，由间二甲苯用异丁烯烷基化后再硝化反应而得，它是单一的化合物，不同于麝香属于天 然的多组分混合物。化学式为&2Η 15Ν306，分子量为297.27，CAS号为81-15-2，呈现浅黄色粉 状或针状结晶，具较粗麝香香气，熔点为112.5-114.5°C，沸点为200-202°C，在95%乙醇中 的溶解度为7g/L(25°C)，易溶于苯甲酸苄酯和邻苯二甲酸二乙酯，不溶于水、甘油和丙二 醇，有干甜的麝香样动物香气，气势较弱但留香长。二甲苯麝香作为高持久性、高生物蓄积 性物质，已被欧盟化学品管理署(ECHA)列为高关注度物质（Substances of Very High 0)11(^?1，3￥!1〇。欧盟"保健和环境科学委员会"致癌、致突变或致生殖毒性(011〇专家工作 组在第29次会议上将二甲苯麝香列为第3类物质。国际日化香料协会（IFRA)计划在IFRA标 准第44次修订稿中建议二甲苯麝香不作为日化香料成分使用。国际日化香料研究所(RIFM) 也建议二甲苯麝香不得用于唇用产品或口腔卫生用品。我国化妆品卫生规范及欧盟化妆品 规程(Council Direc2tive 76/768/EEC)中规定二甲苯麝香为化妆品组分中限用物质（不 得用于口腔卫生用品），在香精、花露水和其它产品中的限量分别为1.〇%、〇.4%和0.03%。
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[0006] 芝麻酚(分子结构式如下所示），又称3，4-亚甲二氧基苯酚，化学式为C7H 6〇3，分子 量为138.12,043号为533-31-3，熔点为62-65°(3，沸点为113-116°(3，略溶于水，呈现白色至 浅黄色结晶性粉末或颗粒，易溶于乙醇、乙醚，芝麻酚的合成技术主要有三条:其一是从芝 麻油中提取，其二是从胡椒胺出发进行全合成，其三是从洋茉莉醛出发的半合成路线。芝麻 酚的致肿瘤数据表明：大鼠经口TDLo为874mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS标准，胃肠道-月中 瘤；小鼠经口 TDLo为1092mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS标准，胃肠道-肿瘤；大鼠经口 TD为 1092mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS标准，胃肠道-肿瘤；小鼠经口 TD为1612mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS标准，胃肠道-肿瘤。2006年，日本厚生劳动省宣布禁用的42种食品添加剂中就 包括芝麻酚。
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[0008] 工业生产中不可或缺的化合物质，其安全性是食品总体 安全性非常重要的一个方面，而食品安全性控制的源头，根本在于生产原料，为此，必须对 食用香精中关注的化合物质进行监控。文献调研表明，现行检测咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚 的方法主要有气相色谱和液相色谱。鉴于咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚在食用香精中有可能 被用到，因此探索一种快速、准确的同时检测咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的方法，对食用香 精中该系列物质的残留量进行有效控制，进而保障食用添加剂的使用安全性，就显得非常 迫切和十分必要。
【发明内容】
[0009] 本发明旨在克服现有的技术缺陷，提供一种采用气相色谱-串联质谱仪测定食用 香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚残留量的方法，该方法能准确量化分析食用香精中痕量 咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的残留量，测定结果准确、灵敏度高，基质干扰少。
[0010] 具体来说，本发明采用了以下技术方案：
[0011] -种测定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚残留量的方法，其特征在于，所述 方法包括以下步骤：
[0012] ⑴内标溶液的制备：以丙酸苯乙酯为内标物，使用乙醇为溶剂，制备内标溶液；
[0013] (2)标准工作溶液的制备：以咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的标准品为目标物，使用 乙醇为溶剂，经逐级稀释制备成标准储备溶液，然后分别加入一定量的内标溶液，制备成标 准工作溶液；
[0014] (3)样品溶液的制备:称取一定量的食用香精样品于离心管中，加入一定量的水， 再准确移入一定体积的内标溶液，用漩涡混合器分散均匀;接着再加入一定体积的乙醇，超 声萃取，加入一定量的无水硫酸钠，摇匀后静置，之后于离心机内离心，取上层清液过有机 相滤膜，得样品溶液；
[0015] (4)气相色谱-串联质谱仪分析：用气相色谱-串联质谱仪对标准工作溶液和样品 溶液进行检测分析；
[0016] (5)标准工作曲线的绘制及样品结果的计算。
[0017]其中，步骤(1)内标溶液的制备包括：
[0018] (la)内标储备液：称取0.2g丙酸苯乙酯，精确至O.OOOlg，用乙醇溶解并定容至 lOOmL容量瓶中，摇匀；
[0019] (lb)内标溶液:准确移取0 · lmL内标储备液，用乙醇定容至1 OOmL容量瓶中，摇勾。
[0020] 另外，步骤(2)标准工作溶液的制备包括：
[0021] (2a)-级标准储备液：分别称取咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚各O.lg，精确至 〇.〇〇〇lg，用乙醇溶解并定容至100mL容量瓶中，摇匀；
[0022] (2b)二级标准储备液:准确移取lmL-级标准储备液，于100mL的容量瓶中，用乙醇 稀释并定容至刻度；
[0023] (2c)标准工作溶液:分别准确移取二级标准储备液20yL、50yL、100yL、200yL、500y L和1000yL至10mL的容量瓶中，再分别准确加入100yL内标溶液，用乙醇稀释并定容至刻度， 得系列标准工作溶液。
[0024] 进一步，步骤(3)样品溶液的制备包括:称取0.5g样品，精确到0.0001 g，置于50mL 离心管中，加入lmL水，准确移入100yL内标溶液，用漩涡混合器分散均勾，再加入8mL乙醇， 置于超声波发生器内超声萃取20min，加入0.5g无水硫酸钠，摇勾后静置5min，之后于离心 机内在4000r/min转速下离心5min，取上层清液过0.45μηι有机相滤膜，得到样品进样溶液。 [0025] 优选地，步骤（4)GC-MS/MS分析的仪器分析条件为：采用规格为30m X 0.25mm X 0.25μπι的HP-INN0WAX毛细管色谱柱;载气为氦气，恒流速度为1. OmL/min;进样方式:进样量 为lyL，脉冲不分流进样，进样脉冲压力为25psi，时间为lmin;进样口温度为250°C;传输线 温度为260°C;升温程序为初始温度为100°C，以3°C/min的速率升高至240°C，保持5min;质 谱分析条件为：电离方式为EI源，正离子模式;离子源温度:230°C;四极杆温度:均为150°C; 碰撞气:氮气，流速1.5mL/min，载气氦气流速为2.25mL/min;多反应监测MRM模式，详细参数 列于下表：
[0026] 目标物的MRM参数情况
[0027]
Ο
[0028] 在以上方法中，步骤(5)标准曲线绘制及结果计算如下：以标准工作溶液中目标物 与内标的浓度之比为横坐标，以色谱图中目标物与内标的峰面积之比为纵坐标，进行线性 回归分析，得到标准工作曲线，将相同条件下测得的样品溶液中目标物与内标的色谱峰面 积比，代入标准工作曲线，根据下列公式求得食用香精样品中目标物的含量：
[0029]
[0030] _