一种抗膝沟藻毒素gtx2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条及其制备方法_2

文档序号:9765066阅读:来源:国知局
被浓度为lyg/ni; 胶体金的制备:每0.01%氯金酸溶液IOOlul与0.1%巧樣酸S钢2.加1混合,加热致100°C 制成胶体金溶液,用0.2%碳酸钟调至8.2; 胶体金标记抗体:按每ImL胶体金5ug抗GTX单抗的添加量加入到制备好的胶体金溶液 中,慢揽5min,4°C过夜,然后将其在4°C下15000g离屯、50min,弃上清,取其沉淀重悬于 0.02%叠氮钢、0.5%Tween-20的0.0 lMPBS中,真空冷冻干燥,备用; 试纸制备:硝酸纤维素膜层用将质量浓度为Ig/L包被GTX2,3-Gly-KLH包被于的检测线 (T线),包被量为0.扣L/cm;在距离检测线3 mm处将质量浓度为10 g/L的羊抗鼠二抗包被 于质控线(C线),包被量为0.化L/cm。包被完毕后将包被好的硝酸纤维素膜置于37 °C烘干 50min,取出;将样品吸收垫置于浓度为0.1 mol/L(抑值为7.2,体积分数0.5%)胶体金标记 抗体的憐酸盐缓冲液中浸泡5 h,37 °C烘干;最后吸附层从测试端依次为吸附纤维层、硝酸 纤维素膜层及末端的吸水材料层,再按试纸条底层为支撑层,中间层为吸附层,保护层固定 在吸附层上,安装好,按需切割成形,即得。
[0019] 实施例2 一种抗膝沟藻毒素 GTX2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条,所述的试纸条底层为 支撑层,中间层为吸附层,保护层固定在吸附层上,吸附层从测试端依次为吸附纤维层、硝 酸纤维素膜层及末端的吸水材料层,金标抗体纤维层中的金标抗体为抗Cl'S毒素单克隆抗 体;在硝酸纤维素膜层上设有膝沟藻毒素设有控制线(C)和检测线(T)。
[0020] -种抗膝沟藻毒素 GTX2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条的制备方法,包括 抗原GTX2,3-Gly-KLH的包被、膝沟藻毒素 GTX2,3的单克隆抗体的制备、胶体金的制备、胶体 金标记抗体、试纸制备步骤: 膝沟藻毒素 GTX2,3的单克隆抗体的制备:利用专利CN201210325168.0膝沟藻毒素 GTX2,3人工抗原加强免疫后的雌性BALB/C小鼠脾细胞中筛选培育的杂交瘤细胞系4C2, 2F10注射预先用无菌石蜡油处理过的BAIB/C小鼠,收集该小鼠的腹水,利用辛酸一硫酸锭 法对收集的腹水进行柱纯化处理得到抗膝沟藻毒素 GTX2,3单抗; 抗原GTX2,3-Gly-KLH的包被:封闭条件采用2%明胶37°C封闭40min,包被条件为37°C包 被化,包被浓度为2.5y g/mL 胶体金的制备:每0.01%氯金酸溶液IOOlul与0.1%巧樣酸S钢2.加 I混合,加热致100°C 制成胶体金溶液,用0.3%碳酸钟调至8.4; 胶体金标记抗体:按每ImL胶体金IOug抗GTX单抗的添加量加入到制备好的胶体金溶液 中,慢揽20min,4°C过夜,然后将其在4°C下ISOOOg离屯、70min,弃上清,取其沉淀重悬于 0.02%叠氮钢、0.5%Tween-20的0.0 lMPBS中,真空冷冻干燥,备用; 试纸制备,为硝酸纤维素膜层用将质量浓度为3 g/L包被GTX2,3-Gly-KLH包被于的检 测线(T线),包被量为2化/cm;在距离检测线3 mm处将质量浓度为50 g/L的羊抗鼠二抗包 被于质控线(C线),包被量为化L/cm。包被完毕后将包被好的硝酸纤维素膜置于37 °C烘干 80 min,取出;将样品吸收垫置于浓度为0.1 mol/UpH值为7.2,体积分数0.5%)胶体金标记 抗体的憐酸盐缓冲液中浸泡7 h,37 °C烘干;最后吸附层从测试端依次为吸附纤维层、硝酸 纤维素膜层及末端的吸水材料层,再按试纸条底层为支撑层,中间层为吸附层,保护层固定 在吸附层上,安装好,按需切割成形,即得。
[0021] 实施例3 一种抗膝沟藻毒素 GTX2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条,所述的试纸条底层为 支撑层,中间层为吸附层,保护层固定在吸附层上,吸附层从测试端依次为吸附纤维层、硝 酸纤维素膜层及末端的吸水材料层,金标抗体纤维层中的金标抗体为抗Cl'S毒素单克隆抗 体;在硝酸纤维素膜层上设有膝沟藻毒素设有控制线(C)和检测线(T)。
[0022] 一种抗膝沟藻毒素 GTX2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条的制备方法,包括 抗原GTX2,3-Gly-KLH的包被、膝沟藻毒素 GTX2,3的单克隆抗体的制备、胶体金的制备、胶体 金标记抗体、试纸制备步骤: 膝沟藻毒素 GTX2,3的单克隆抗体的制备:利用专利CN201210325168.0膝沟藻毒素 GTX2,3人工抗原加强免疫后的雌性BALB/C小鼠脾细胞中筛选培育的杂交瘤细胞系4C2, 2F10注射预先用无菌石蜡油处理过的BAIB/C小鼠,收集该小鼠的腹水,利用辛酸一硫酸锭 法对收集的腹水进行柱纯化处理得到抗膝沟藻毒素 GTX2,3单抗; 抗原GTX2,3-Gly-KLH的包被:封闭条件采用1%明胶37°C封闭30min,包被条件为37°C包 被化,包被浓度为2 yg/mL 胶体金的制备:每0.01%氯金酸溶液IOOlul与0.1%巧樣酸S钢2.加1混合,加热致100°C 制成胶体金溶液,用0.25%碳酸钟调至8.3; 胶体金标记抗体:按每ImL胶体金7ug抗GTX单抗的添加量加入到制备好的胶体金溶液 中,慢揽15min,4°C过夜,然后将其在4°C下ISOOOg离屯、50~70min,弃上清,取其沉淀重悬于 0.02%叠氮钢、0.5%Tween-20的0.0 lMPBS中,真空冷冻干燥,备用; 试纸制备,为硝酸纤维素膜层用将质量浓度为1.5 g/L包被GTX2,3-Gly-KLH包被于的 检测线(T线),包被量为1化/cm;在距离检测线3 mm处将质量浓度为30 g/L的羊抗鼠二抗 包被于质控线(C线),包被量为化L/cm。包被完毕后将包被好的硝酸纤维素膜置于37 °C烘 干60 min,取出;将样品吸收垫置于浓度为0.1 moVUpH值为7.2,体积分数0.5%)胶体金标 记抗体的憐酸盐缓冲液中浸泡化,37 °C烘干;最后吸附层从测试端依次为吸附纤维层、硝 酸纤维素膜层及末端的吸水材料层,再按试纸条底层为支撑层,中间层为吸附层,保护层固 定在吸附层上,安装好,按需切割成形,即得。
[0023] 实施例4 一种抗膝沟藻毒素 GTX2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条,所述的试纸条底层为 支撑层,中间层为吸附层,保护层固定在吸附层上,吸附层从测试端依次为吸附纤维层、硝 酸纤维素膜层及末端的吸水材料层,金标抗体纤维层中的金标抗体为抗Cl'S毒素单克隆抗 体;在硝酸纤维素膜层上设有膝沟藻毒素设有控制线(C)和检测线(T)。
[0024] -种抗膝沟藻毒素 GTX2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条的制备方法,包括 抗原GTX2,3-Gly-KLH的包被、膝沟藻毒素 GTX2,3的单克隆抗体的制备、胶体金的制备、胶体 金标记抗体、试纸制备步骤: 膝沟藻毒素 GTX2,3的单克隆抗体的制备:利用专利CN201210325168.0膝沟藻毒素 GTX2,3人工抗原加强免疫后的雌性BALB/C小鼠脾细胞中筛选培育的杂交瘤细胞系4C2, 2F10注射预先用无菌石蜡油处理过的BAIB/C小鼠,收集该小鼠的腹水,利用辛酸一硫酸锭 法对收集的腹水进行柱纯化处理得到抗膝沟藻毒素 GTX2,3单抗; 抗原GTX2,3-Gly-KLH的包被:封闭条件采用0.7%明胶37°C封闭25min,包被条件为37°C 包被1 h,包被浓度为1.化g/mL 胶体金的制备:每0.01%氯金酸溶液IOOlul与0.1%巧樣酸S钢2.加1混合,加热致100°C 制成胶体金溶液,用0.2%碳酸钟调至8.2; 胶体金标记抗体:每ImL胶体金6ug抗GTX单抗的添加量加入到制备好的胶体金溶液中, 慢揽Smin,加入4°C过夜,然后将其在4°C下ISOOOg离屯、55min,弃上清,取其沉淀重悬于 0.02%叠氮钢、0.5%Tween-20的0.0 lMPBS中,真空冷冻干燥,备用; 试纸制备:硝酸纤维素膜层用将质量浓度为1.2g/L包被GTX2,3-Gly-KLH包被于的检测 线(T线),包被量为0.祉L/cm;在距离检测线3 mm处将质量浓度为15 g/L的羊抗鼠二抗包 被于质控线(C线),包被量为0.祉L/cm。包被完毕后将包被好的硝酸纤维素膜置于37 °C烘 干55 min,取出;将样品吸收垫置于浓度为0.1 moVUpH值为7.2,体积分数0.5%)胶体金标 记抗体的憐酸盐缓冲液中浸泡5.化,37 °C烘干;最后吸附层从测试端依次为吸附纤维层、 硝酸纤维素膜层及末端的吸水材料层,再按试纸条底层为支撑层,中间层为吸附层,保护层 固定在吸附层上,安装好,按需切割成形,即得。
[002引 实施例5 一种抗膝沟藻毒素 GTX2,3单克隆抗体的免疫胶体金标记试纸条,所述的试纸条底层为 支撑层,中间
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