缓冲液(pH 9.0 )中，稀释后的 摩尔浓度为5mmol/L。配制好后，常温避光储存。
[0022]⑤十二烷基磺酸钠（SDS)溶液的配制：取0.2019g SDS溶于7ml磷酸盐缓冲液(pH 9.0)中，得到摩尔浓度为1 OOmmo 1 /L的SDS母液。配制好后，常温储存。
[0023] 1.3表面活性剂与细胞色素 C复合物过氧化物酶活性测量 采用愈创木酸(Guaiacol)氧化法进行测定： 1) 取6以1摩尔浓度为100臟〇1/1的303母液加入到2.546 1111浓度为50111111〇1/1的磷酸盐缓 冲液(pH 9.0)中，使SDS的终浓度达到0.2mmo 1 /L; 重复以上操作，获得一系列具有一定浓度梯度(〇.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、 2·0、2·2、2·4、2·6、2·8、3·2、3·6、4·0、5·0、6·0、8·0、10 mmol/L)的表面活性剂溶液； 2) 向步骤1)所得各溶液中加入48μ1浓度为lmmol/L细胞色素 C溶液;在此次实验中各不 同SDS浓度下的人工酶体系都是由相应浓度的SDS溶液和细胞色素 c溶液共构建成，共 2.6ml; 3) 向步骤2)所得各溶液中加入0. lml浓度为45 mmol/L的愈创木酚溶液； 4) 向步骤3)所得各溶液中加入0.3ml浓度为5 mmol/L的H2〇2溶液，于25°C开始酶促反 应，同时记录愈创木酸氧化初始速度;愈创木酸氧化初始速度按下述公式进行计算：
式中，V为愈创木酚氧化初始速度； Α2、Αι分别为t2、ti时四邻甲氧基连酸470nm处的吸光值，t2、ti单位S; b为比色皿光程，lcm; ε为四邻甲氧基连酚470nm处的摩尔吸光系数； 5)以表面活性剂终浓度为横坐标，以愈创木酚氧化初始速度为纵坐标，在excel中进行 作图（SDS与细胞色素 C自组装结构过氧化物酶活性），添加幂趋势线和移动平均趋势线，图2 中沿箭头移动方向所选取的移动平均趋势线周期分别为4,6,8,9，10，12，通过改变移动平 均周期，使移动平均趋势线与幂趋势线相切，（图2中，移动平均周期为9时的黑色实线与幂 趋势线相切），此时切点对应的表面活性剂浓度即为其CMC值。由图2可以获知:表面活性剂 十二烷基磺酸钠(SDS)的临界胶束浓度为3.3±0.2mM。
[0024] 此外，参照上述方法对其它几种表面活性剂（SDeS、SLS、CTAB、DTAC、DTABW^CMC& 进行了测定，结果见下表。该结果也证明了本发明测定方法是可行的。
[0025] 几种常见耒而活忡剂的咍界防市浓麼（CMC)简耒
: 实25_ 磷酸_簡中溶壽::其'_填见樣 主要结果与结论。
[0026] 2.1细胞色素 C浓度对十二烷基磺酸钠 CMC测定的影响 图3给出了不同浓度细胞色素 C对十二烷基磺酸钠 CMC测定的影响（实验条件:25°C，pH 9.0、50mM磷酸盐缓冲液）。由图3可以看出：在较宽细胞色素 C浓度(2 -16 ymol/L)范围内， SDS等表面活性剂的CMC值在误差范围内是一致的。
[0027] 2.2磷酸盐缓冲液pH值对(SDS)CMC测量的影响 图4给出了磷酸盐缓冲液pH值对十二烷基磺酸钠 CMC测定的影响（实验条件：25°C，50 mmol/L磷酸盐缓冲液，细胞色素 C浓度为10 μ mol/L)。由图4可以看出：在磷酸盐缓冲液pH值 为7.0 -10范围内，SDS等表面活性剂的CMC值在误差范围内是一致的，即CMC值不随pH值变 化而变化。
[0028] 2.3酶促反应温度对十二烷基磺酸钠 CMC测定的影响 图5给出了酶促反应温度对十二烷基磺酸钠 CMC测定的影响（实验条件：pH8.0、50 mmol/L磷酸盐缓冲液，细胞色素 C浓度为10 μ mol/L)。由图5可以看出：SDS等表面活性剂的 CMC值随温度升高而增大。本发明测定方法能够对不同温度下表面活性剂的CMC值进行测 定。
[0029]实验结论:本发明利用细胞血素 C与表面活性剂自组装形成胶团结前后过氧化物 酶活性不同的原理，通过测量细胞色素 C与不同浓度表面活性剂组装时所具有的过氧化物 酶活性，经数据处理获得表面活性剂CMC。本发明方法适用于测定离子型表面活性剂的CMC， 具有工作pH、温度范围广，操作简便，灵敏度高，重复性好等优点。
【主权项】
1. 一种利用细胞血素 c自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度的方法，其特 征在于，包括如下步骤： 1)取不同质量的表面活性剂分别溶于憐酸盐缓冲液中，获得一系列具有一定浓度梯度 的表面活性剂溶液； 2 )向步骤1)所得各溶液中加入细胞色素 C; 3 )向步骤2 )所得各溶液中加入愈创木酪； 4) 向步骤3 )所得各溶液中加入双氧水，于25 - 50°C开始酶促反应，同时记录愈创木酪 氧化初始速度； 5. W表面活性剂浓度为横坐标，W愈创木酪氧化初始速度为纵坐标，在excel中进行作 图，添加移动平均趋势线幕趋势线和移动平均趋势线，通过改变移动平均趋势线中的移动 平均周期使移动平均趋势线与幕趋势线相切，切点对应的表面活性剂浓度即为临界胶束浓 度。2. 如权利要求1所述利用细胞血素 C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度 的方法，其特征在于，酶促反应中，细胞色素 C的浓度为2-16 μπιο1/1;愈创木酪的初始浓度 为1.5 mmol/l;双氧水W出〇2计，出〇2的初始浓度为0.5 mmol/L。3. 如权利要求1所述利用细胞血素 C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度 的方法，其特征在于，步骤4)中所述表面活性剂为十二烷基横酸钢、十烷基硫酸钢、十二烧 基肌氨酸钢、十六烷基Ξ甲基漠化锭、十二烷基Ξ甲基氯化锭或十二烷基Ξ甲基漠化锭。4. 如权利要求1所述利用细胞血素 C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度 的方法，其特征在于，步骤4)中所述愈创木酪氧化初始速度通过下述公式计算获得：式中，V为愈创木酪氧化初始速度； A2、Ai分别为t2、ti时四邻甲氧基连酪470nm处的吸光值，t2、ti单位S; b为比色皿光程，1cm; ε为四邻甲氧基连酪470nm处的摩尔吸光系数。
【专利摘要】本发明公开了一种利用细胞血素C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度的方法，其包括如下步骤：1）取不同质量的表面活性剂分别溶于磷酸盐缓冲液中，获得一系列具有一定浓度梯度的表面活性剂溶液；2）向步骤1）所得各溶液中加入细胞色素C、愈创木酚和双氧水，于25－50℃开始酶促反应，记录愈创木酚氧化初始速度；3）以表面活性剂浓度为横坐标，以愈创木酚氧化初始速度为纵坐标进行作图，添加移动平均趋势线幂趋势线和移动平均趋势线，通过改变移动平均趋势线中的移动平均周期使移动平均趋势线与幂趋势线相切，切点对应的表面活性剂浓度即为临界胶束浓度。本发明具有工作pH、温度范围广，操作简便，灵敏度高等优点。
【IPC分类】G01N21/31
【公开号】CN105548050
【申请号】CN201610001064
【发明人】洪军, 李迪, 肖保林
【申请人】河南大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月5日