一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于医药技术领域，涉及一种药物中有关物质的含量检测方法，具体涉及 替格瑞洛中有关物质的含量检测方法。
【背景技术】
[0002] 替格瑞洛，化学名称为：（15,25,31?，55)-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氟苯基)环丙 基]氨基}-5_(丙硫基)-3Η-[1，2,3]_三唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)环戊烷-1， 2-二醇。
[0003] 替格瑞洛，分子式:C23H28F2N6〇4S，分子量:522.57，
[0004] 化学结构式为：
[0006] 替格瑞洛通过典型的化学合成法制备，并通过起始原料控制其化学结构上的六个 手性中心，原料药为白色至浅粉色粉末。
[0007] 替格瑞洛具有多晶性，文献报道其有I、II、III、IV四种非溶剂化晶型和多种溶剂 化物，目前上市产品使用其II晶型。
[0008] 替格瑞洛在水中的溶解度很低(0.016mg/mL，20 °C)，并且在水相溶液中不显示pH 依赖性。替格瑞洛属于BCS IV类药物，即低溶解度、低渗透性的药物。
[0009] 替格瑞洛是一种环戊三唑嘧啶(CPTP)类化合物。替格瑞洛及其主要代谢产物能可 逆性地与血小板P2Y12ADP受体相互作用，阻断信号传导和血小板活化。替格瑞洛及其活性 代谢产物的活性相当。
[0010] 替格瑞洛通过阻滞P2Y12受体而抑制ADP诱发的血小板聚集，与氯吡格雷的作用机 制相似。但不同的是，替格瑞洛对P2Y12受体的抑制作用是可逆的，停药后1-3天血小板的功 能就可恢复，此中作用对需要进行冠状动脉旁路移植术或其它手术的患者十分重要，因为 这能削弱输血引起的血栓效应，明显降低心血管疾病患者的死亡率。
[0011] 替格瑞洛的另一特点是口服后起效迅速。与噻吩吡啶类药物不同，替格瑞洛不需 要在肝脏中经过代谢激活，故可有效降低药物间的相互作用。替格瑞洛的具体作用机制尚 未阐明，目前提出的一种假说是：替格瑞洛是一种腺苷前体，口服后会在体内转变为腺苷， 增加血液中腺苷的含量。腺苷是一种重要的内源性小分子，能激活4种糖蛋白偶联腺苷受体 A1、A2A、A2B和A3,从而调节机体组织的功能，改善心血管疾病的临床床症状。
[0012] 替格瑞洛作为一种新型具有选择性的抗凝血药在国外已经有诸多不良反应的报 道，并且有些不良反应机制尚不明确，还需要进一步研究。
[0013] 对于存在多个手性中心的原料药为了更好的对其质量进行控制，在质量标准中定 入旋光度进行表征。而多晶型药物容易产生体内代谢常数不一致，因此需要对原料药的晶 型进行一致性研究。另外为了提高难溶性药物的溶解性需要对其粒度进行考察。
[0014] 在原料药合成过程中，不可避免的会引入一些杂质，同时在原料存储及制剂制备 和存储过程中，不可避免的会引发一些降解杂质。替格瑞洛原料药的合成路线如附图1所 示。相关杂质及相对保留时间如表1所示。
[0015] 表1:各杂质信息及相对响应因子列表
[0017]
[0018] 注:亚砜1和亚砜2为旋光异构体，故仅有一个结构式。
[0019] 为了更好的提高替格瑞洛的药物质量，提升药物的安全性和稳定性。我们对替格 瑞洛的有关物质的含量检测方法进行研究。最终找到了一种精密度高，操作简单，适用性强 的含量检测方法，可以用于替格瑞洛原料药中上述杂质的质量控制。
【发明内容】
[0020] 本发明的目的在于提供一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法。
[0021 ]本发明所建立的液相色谱法检测替格瑞洛的有关物质，通过系统适用性溶液对已 知杂质定位，用含校正因子的自身对照法计算已知杂质含量，使有关物质的检测结果更加 严格和准确。
[0022]本发明所述替格瑞洛的有关物质的含量检测方法，包括以下步骤：
[0023] (1)系统适用性溶液制备:取羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环 羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3及替格瑞洛配制成系统适用性溶液；
[0024] (2)供试品溶液制备:取替格瑞洛原料药配制成供试品溶液；
[0025] (3)对照溶液的制备:取供试品溶液配制成对照溶液；
[0026] (4)分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱 图；
[0027] (5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品 溶液中有关物质的含量；
[0028] 其中，所述液相色谱的色谱条件如下：
[0029] 色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18;
[0030] 流动相:流动相A: lOmmo 1/L磷酸盐缓冲液，流动相B:选自甲醇或乙腈，进行梯度洗 脱。
[0031 ]优选的，液相色谱的色谱条件如下：
[0032] 色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18,型号为：150X4.6mm，5ym;
[0033] 流动相：
[0034] 流动相A:10mmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢钠约1.56g，加水900ml使溶 解，用磷酸调节pH值至3.0-4.0，加水稀释成1000ml);
[0035] 流动相B:选自甲醇、乙腈中的一种；
[0036] 梯度洗脱过程如下：
[0038]检测波长：242nm;
[0039] 柱温：30°C-40°C;
[0040] 流速：lml/min;
[0041 ]进样量 10yL;
[0042]溶剂：甲醇-水或乙腈-水。
[0043]优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤：
[0044] (1)系统适应性溶液的制备:称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光 降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使 溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，制成每lml中约含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5yg的溶液， 作为系统适用性溶液，
[0045] (2)供试品溶液的制备:取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶 中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
[0046] (3)对照溶液的制备:精密量取适量替格瑞洛对照品，用35%乙腈溶液稀释制成每 lml中约含5yg的溶液作为对照溶液（1)，精密量取替格瑞洛对照品5ml，置50ml量瓶中，用 35%乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2);
[0047] (4)精密量取系统适用性溶液10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密量取对照 溶液(2)10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密量取供试品溶液与对照溶液（1)各10μ1， 注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0048] (5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品 溶液中有关物质的含量。
[0049] 其中，步骤3,对照溶液的制备:精密量取供试品溶液lml，置100ml量瓶中，加水稀 释至刻度，摇匀，得到替格瑞洛对照品；
[0050] 其中，所述液相色谱的色谱条件如下：
[0051] 色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150X4.6mm，5ym，P/N:993967-902);
[0052] 流动相：流动相A:10mmol/L磷酸盐缓