冲液（取二水合磷酸二氢钠约1.56g，加水 900ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0-4.0，加水稀释成1000ml)，
[0053] 流动相B:选自甲醇、乙腈中的一种；
[0054] 梯度洗脱程序：
[0056]检测波长：242nm;
[0057] 柱温：30 Γ-40 Γ;
[0058] 流速：lml/min;
[0059] 进样量 10yL;
[0060] 溶剂：甲醇-水或乙腈-水。
[0061]通过以下实验进一步说明本发明的有益效果：
[0062]实验一、系统适用性试验
[0063]取羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化 物、过程中间体3、替格瑞洛对照品适量，加水溶解，制成含有羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜 2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3浓度为5μg/ml、替格瑞洛 浓度为200yg/m 1的样品作为系统适用性溶液，进样测定。
[0064]表2系统适用性试验结果
[0066]从上表中结果我们可以看出：各色谱峰之间的峰面积相对标准偏差符合规定。 [0067]实验二、专属性试验 [0068] 2.1干扰及定位试验
[0069] 分别取供试品溶液、各杂质溶液、空白溶剂分别进样，各杂质与主峰均能达到完 全分离，且空白溶剂不干扰测定。
[0070] 2.2破坏性实验
[0071 ]替格瑞洛原料药在强制降解试验前后的降解杂质对比如下：
[0072] A ·氧化降解：
[0073]将取替格瑞洛lg溶于100mL甲醇中，向此溶液中缓慢滴加10%的过氧化氢溶液 10mL。滴加完毕30分钟后，取替格瑞洛氧化破坏后的溶液过0.22μπι粒径的微孔滤膜进行样 品测试，并与破坏前同浓度的样品进行对比。结果见表3。
[0074]表3替格瑞洛样品氧化前后杂质情况对比表
[0076] Β、酸降解
[0077] 将取替格瑞洛lg溶于100mL甲醇中，向此溶液中缓慢滴加10%的盐酸溶液10mL。滴 加完毕30分钟后，取替格瑞洛酸破坏后的溶液过0.22μπι粒径的微孔滤膜进行样品测试，并 与破坏前同浓度的样品进行对比。结果见表4。
[0078]表4替格瑞洛样品酸破坏后杂质情况对比表
[0080] C、高温降解
[0081] 将取替格瑞洛lg加热熔融，冷却至室温后以甲醇溶解，配制成5yg每mL的溶液进行 高温前后样品的杂质情况比较。结果见表5。
[0082] 表5替格瑞洛加热破坏的杂质情况对比表
[0084] 由图可以看出，在本法色谱条件下，能够很好地检测出破坏后的各有关物质及降 解产物，且杂质峰可分离完全。
[0085] 因此，采用上述色谱条件来测定本品的有关物质及其降解产物可行。
[0086]实验三、检测限定量限验证
[0087] 考虑到梯度洗脱基线漂移的影响，单一阶段的水平基线不代表整个洗脱过程的灵 敏度，因此，根据浓度为0.2yg/mL的混合溶液连续进样六次，所得各成分峰面积的标准差 (SD)进行了灵敏度的推算，结果见表6。根据信噪比（信噪比由工作站自动计算，表格中数据 为信噪比最低的结果)计算，各成分的最小定量限在0.1~〇.8yg/mL的水平;按照峰面积积 分的相对标准偏差计算，以此分析方法测定各成分的最小定量限均可达到〇. lyg/mL~0.3μ g/mL的水平，相当于供试品溶液lmg/mL标示浓度的0.01%~0.03%，考虑到不同分析批之 间的误差，对此方法设定了 〇. 02 %的报告阈。
[0088] 表6各成分检测限和定量限的计算
[0090] 实验四、线性验证
[0091] 取各杂质及替格瑞洛在相当于供试品浓度的0.04%~0.6%进行了线性实验，并 将浓度与峰面积进行线性回归。以替格瑞洛线性斜率与各杂质线性斜率的比值作为相对响 应因子。结果显示，各成分在供试品浓度的0.04%~0.6%之间，浓度与峰面积线性关系良 好，相关系数r 2均大于0.999，符合验证要求。
[0092]表7线性关系试验结果表(n = 6,浓度:μg/ml)
[0094] 实验五、重复性
[0095] 在标准曲线的测定中，浓度约为lyg/mL的混合标准溶液连续进样六次，各成分峰 面积的相对标准偏差见表5,在相当于供试品溶液浓度0.1%水平的各成分连续进样的精密 度都可以达到10%的验收标准。按原色谱条件进样，重复6次，记录峰面积，结果见表8。 [0096]表8混合标准溶液（lyg/mL)连续进样的重复性
[0097]
[0098]
[0099] 结果表明，重复性良好。
[0100] 实验六、溶液稳定性
[0101]取140502批样品配制成供试品溶液在冷藏条件下的同一分析批内进行了重复进 样，样品在连续进样六次后，分别在第6小时、第12小时和第30小时再次进样，表9中列出了 主要的潜在降解产物氨基物和亚砜、以及未知杂质的的峰面积变化，和总杂质的测定结果， 验证了供试品溶液在避光、冷藏条件下至少30小时内的稳定性。
[0102] 表9供试品溶液在相同分析批中30小时的测定结果
[0103]
[0104] 试验七、耐用性
[0105] 取供试品溶液分别在不同色谱柱条件下进样，记录分离度、柱效并计算含量。结果 见表10,流动相中有机相比例变化对结果影响较小，其它条件变化对结果基本无影响，表明 系统耐用性良好。
[0106] 表10不同色谱柱进行流速调整后各成分的洗脱行为
[0107]
[0108] 通过上述实验结果证明，本发明的检测方法能够准确有效地检出替格瑞洛的有关 物质，提高检测的精密度和准确性，同时该检测方法还具有重复性好和稳定性好等特点。
[0109] 本发明的检测方法与现有方法相比较，可以有效地检出样品的有关物质，并通过 加校正因子的自身对照法计算各已知杂质的含量，准确地控制产品相关杂质，提高了产品 的质量，增强产品的安全性和可靠性。
【附图说明】
[011 0]附图1:替格瑞洛原料药合成路线；
[0111] 附图2:替格瑞洛及杂质标准品系统适用性高效液相色谱图；
【具体实施方式】
[0112] 通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明，但不用于限制本发明。
[0113] 对于替格瑞洛的有关物质，行业标准规定：
[0114] 供试品溶液色谱图中，转位产物(相对保留时间约为1.13)不得大于对照溶液主峰 面积的0.3倍(0.15%);
[0115] 亚砜1 (相对保留时间约为0.49)和亚砜2 (相对保留时间约为0.50)的峰面积之和 不得大于对照溶液主峰面积的0.4倍(0.2% );
[0116]氨基物(相对保留时间约为0.25)按校正后的峰面积计算(乘以相对响应因子0.5) 不得大于对照溶液主峰面积的0.3倍(0.15% );
[0117] 其余单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍(0.1 % );
[0118] 总杂质以各已知杂质和未知杂质的总量计，不得过0.5%。
[0119]实施例1、检测方法
[0120]步骤一，系统适用性溶液:称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降 解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶 解，制成每lml中含替格瑞洛0.2mg、